具有抗结肠炎作用的黄芪细胞外囊泡和囊泡脂质颗粒及其制备方法和用途技术

本发明专利技术属于医药领域，具体涉及具有抗结肠炎作用的黄芪细胞外囊泡和囊泡脂质颗粒及其制备方法和用途。本发明专利技术首次发现黄芪细胞外囊泡及其囊泡脂质颗粒对DSS诱导的结肠炎具有显著的预防和治疗作用，并且使用安全，不会产生不良反应，因此黄芪细胞外囊泡及其囊泡脂质颗粒是开发成预防或治疗结肠炎的药物的理想候选物，具有较高的商业价值和社会意义。具有较高的商业价值和社会意义。具有较高的商业价值和社会意义。

【技术实现步骤摘要】
具有抗结肠炎作用的黄芪细胞外囊泡和囊泡脂质颗粒及其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于医药领域，具体涉及具有抗结肠炎作用的黄芪细胞外囊泡和囊泡脂质颗粒及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]炎症性肠病(IBD)是一种慢性、非特异性、炎症性胃肠道疾病，主要包括克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)。克罗恩病的主要症状为慢性腹泻和腹痛，而溃疡性结肠炎患者则更容易出现间歇性腹部痉挛和血性腹泻。据中国疾病预防控制中心的统计，目前我国IBD总病例约为35万，预计到2025年，患者总数将突破150万。IBD的病因和发病机制尚不明确，大多数学者认为可能与基因易感性、环境改变、免疫调节、微生态紊乱等有关。
[0003]目前IBD治疗方式主要包括药物、手术、营养支持等。药物主要包括肿瘤坏死因子抑制剂，氨基水杨酸盐，免疫调节剂，皮质类固醇等。目前临床上常采用5
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氨基水杨酸类和糖皮质激素、免疫抑制剂等治疗UC，但存在治愈率低、易复发等不足，且长期使用会产生一些不良反应，如不耐受或过敏反应等。美沙拉嗪，又名5
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氨基水杨酸，其是柳氮磺胺吡啶(SASP)治疗UC的活性成分。美沙拉嗪可以抑制引起炎症的前列腺素的合成和炎性介质白三烯的形成，从而对肠粘膜的炎症起显著抑制作用，可用于溃疡性结肠炎、溃疡性直肠炎和克罗恩病。但是，美沙拉嗪也有相应的缺陷，较为常见的是一些胃肠道和肠外影响，如恶心、腹痛、腹泻和头痛。同时也存在发生严重副作用的可能性，包括骨髓毒性伴白细胞减少症和粒细胞缺乏症，血小板减少症，再生障碍性贫血，肠外炎症和神经系统表现，最令人担忧但罕见的问题是间质性肾炎引起的肾毒性。
[0004]我国拥有丰富的动植物中草药资源，由于其“多成分、多靶点、多途径、整体调节”等特点，成为近年来抗UC药物的研究热点之一。研究显示，包括活性成分、单味中草药及其提取物、中药复方在内的中草药可以有效改善UC的症状；而调节肠道菌群失调是中草药治疗UC的重要潜在靶点，如小檗碱可以增加产乳酸菌和碳水化合物水解菌，减少条件致病菌；黄柏酮可调节肠道菌群组成；美洲大蠊醇提物和黄连解毒汤可增加乳酸杆菌属Lactobacillus等有益菌，减轻结肠炎症。中医上普遍认为，脾胃气虚是溃疡性结肠炎发病的根本，故临床治疗多以健脾益气法为基本治法。有研究表明，五味子总多糖能显著改善结肠的炎性损伤，降低脾脏指数，升高胸腺指数，并有效降低结肠中MPO、NO、MDA、ROS的含量(活性)，同时升高GSH和SOD的含量。另外五味子多糖调节了结肠炎小鼠肠道微生物组成和多样性，显著提高了厚壁菌门、糖菌门、Enterorhabdus等的相对丰度，降低了Firmicutes、Turicibacter、Akkermansia等肠道菌的相对丰度，并且显著升高了结肠中丙酸、丁酸和异丁酸含量，提示五味子总多糖可用于制备治疗或改善炎症性肠病的药物。五味子甲素是从五味子果实中分离出来的具有生物活性的木脂素，研究表明五味子甲素具有抗炎、抗自由基、保肝及抑制胃肠平滑肌痉挛等作用。已有研究显示，五味子甲素对三硝基苯磺酸诱导的小鼠溃疡性结肠炎有给药作用，对大鼠实验性结肠炎具有保护作用。
[0005]另外，近年来，研究者逐渐从植物中发现并分离出粒径在30
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150nm之间的植物外泌体及胞外囊泡并进行表征。有数据表明，植物外泌体和胞外囊泡可能在维持肠道共生和内环境稳定方面发挥重要作用。但是，不同植物来源的细胞外囊泡具有较大差异，生物学功能也不尽相同，通过原植物及其提取物或天然产物单体的功效一般也无法预期植物来源细胞外囊泡的作用，因此寻找安全、有效的治疗结肠炎的植物来源细胞外囊泡具有较大难度。

技术实现思路

[0006]针对上述情况，为了解决现有技术的缺陷，本专利技术提供了具有抗结肠炎作用的黄芪细胞外囊泡和囊泡脂质颗粒及其制备方法和用途。
[0007]为达到本专利技术的目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0008]在第一个方面中，本专利技术提供了一种具有预防或治疗结肠炎作用的药物组合物，所述药物组合物包含黄芪细胞外囊泡。
[0009]优选地，所述黄芪细胞外囊泡为纳米级囊泡。
[0010]在第二个方面中，本专利技术提供了一种具有预防或治疗结肠炎作用的药物组合物，所述药物组合物包含黄芪细胞外囊泡脂质颗粒。
[0011]优选地，所述黄芪细胞外囊泡脂质颗粒为纳米级。
[0012]作为可选的方式，在上述药物组合物中，所述黄芪细胞外囊泡包括以下一种或多种：外泌体、凋亡小体、微泡、溶酶体、内体、脂蛋白或细胞来源纳米颗粒。
[0013]优选地，所述黄芪细胞外囊泡的粒径为50
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300nm。
[0014]作为可选的方式，在上述药物组合物中，所述黄芪细胞外囊泡在透射电镜下为双膜结构，多呈凹陷圆饼状，且所述黄芪细胞外囊泡的粒径为50
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150nm。
[0015]作为可选的方式，在上述药物组合物中，所述黄芪细胞外囊泡采用PEG沉降的方法制备，其包括以下步骤：在室温条件下将黄芪用自来水进行初步清洗，然后使用PBS溶液将黄芪润洗3次，洗净的黄芪切成厚度约5mm的片状，加入适量的PBS浸泡，于破壁机破碎，纱网过滤，去除黄芪残渣，收集黄芪汁液，在4℃的条件下，将过滤的黄芪汁液依次按照3,000g
×
30min离心收集上清液，再将收集到的上清液按照5,000g
×
40min离心收集上清液，再将收集到的上清液按照15,000g
×
30min离心，然后将上清液使用8％PEG6000，含500mM NaCl进行沉降过夜，沉降后的黄芪上清液进行5,000g
×
30min离心得沉淀，使用过滤除菌的PBS溶液重悬沉淀，调整pH至中性，然后获得黄芪细胞外囊泡。
[0016]作为可选的方式，在上述药物组合物中，所述黄芪细胞外囊泡采用差速
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超速离心法结合蔗糖密度梯度离心分离制备，以获取更为纯净的黄芪细胞外囊泡，其包括以下步骤：在室温条件下将黄芪用自来水进行初步清洗，然后使用PBS溶液将黄芪润洗3次，洗净的黄芪切成厚度约5mm的片状，加入适量的PBS浸泡，浸泡充分后于破壁机破碎，纱网过滤，去除黄芪残渣，收集黄芪汁液，在4℃的条件下，将过滤的黄芪汁液依次按照3,000g
×
30min离心收集上清液，再将收集到的上清液按照5,000g
×
40min离心收集上清液，再将收集到的上清液按照15,000g
×
30min离心收集上清液，再将收集到的上清液按照150,000
×
70min离心获得沉淀，使用过滤除菌的PBS溶液重悬沉淀，初步获得黄芪细胞外囊泡，然后通过蔗糖密度梯度离心20,000g
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2h获取相对纯净黄芪细胞外囊泡。
[0017]作为可选的方式，在上述药物组合物中，所述黄芪细胞外囊泡脂质颗粒的制备方
法包括以下步骤：取甲醇本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有预防或治疗结肠炎作用的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物包含黄芪细胞外囊泡，优选地，所述黄芪细胞外囊泡为纳米级囊泡。2.一种具有预防或治疗结肠炎作用的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物包含黄芪细胞外囊泡脂质颗粒，优选地，所述黄芪细胞外囊泡脂质颗粒为纳米级。3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述黄芪细胞外囊泡包括以下一种或多种：外泌体、凋亡小体、微泡、溶酶体、内体、脂蛋白或细胞来源纳米颗粒，所述黄芪细胞外囊泡的粒径为50
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300nm。4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于：所述黄芪细胞外囊泡在透射电镜下为双膜结构，多呈凹陷圆饼状，且所述黄芪细胞外囊泡的粒径为50
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150nm。5.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于：所述黄芪细胞外囊泡脂质颗粒的制备方法包括以下步骤：取甲醇和氯仿的混合溶液于洁净的玻璃试管中，加入黄芪细胞外囊泡悬液，充分涡旋1min，加入氯仿和纯净水的混合溶液，充分涡旋1min，随后，离心，玻璃移取管取下层有机相至新的玻璃试管中，氮气吹干，向吹干的玻璃试管中加入PBS溶液，水浴...

【专利技术属性】
技术研发人员：王俊锋，王浩然，陆榕，王雨晨，侯杰，郭小清，
申请(专利权)人：中山纽兰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：