一种抗GAPDH的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗GAPDH的单克隆抗体及其应用，包括重链CDR1或其变体的重链、重链CDR2或其变体的重链、重链CDR3或其变体的重链，以及轻链CDR1或其变体的重链、轻链CDR2或其变体的重链、轻链CDR3或其变体的轻链；重链CDR1如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列；重链CDR2如SEQ ID NO:2所示；重链CDR3如SEQ ID NO:3所示；轻链CDR1如SEQ ID NO:4所示；轻链CDR2如SEQ ID NO:5所示；轻链CDR3如SEQ ID NO:6所示。抗GAPDH的单克隆抗体的效价可达8.75

【技术实现步骤摘要】
一种抗GAPDH的单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术属于分子免疫学领域，更具体地，涉及一种抗GAPDH的单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]目前对基因进行表达定量的检测方法，常用的有实时定量PCR、RNA印迹、核糖核酸酶保护分析、基因芯片等；在蛋白水平进行定量的检测方法有蛋白印迹、免疫共沉淀等。但这些检测方法都需利用内参蛋白对目标基因和目标蛋白进行校正，以获得真实可靠的结果，如将目标蛋白含量除以内参蛋白含量，所得到的数值即为校正后的目标蛋白相对含量，可用于校正蛋白水平，利于不同条件下或不同细胞组织中目标蛋白表达量的比较。而这样的内参蛋白所对应的抗体就称为内参抗体，即内参抗体(Internal Control Antibody)是用于对内参蛋白进行检测，可以校正蛋白定量过程中的实验误差以及验证转膜、显色等步骤是否正常。
[0003]目前常用的内参包含GAPDH、β
‑
actin和β
‑
tubulin，以及线粒体内参COX IV和核内参Histone H3和PCNA等。其中GAPDH是甘油醛
‑3‑
磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde
‑3‑
phosphate dehydrogenase)的缩写，而GAPDH基因也属于常用的内参基因，如在真核生物中，GAPDH被用作内参基因定量测定目标基因的表达量；而在原核生物中，大肠埃希菌的GAPDH被作为内参基因用于荧光定量PCR检测。现有研究也认为GAPDH可以作为真核生物和原核生物共同的内参蛋白用于Western
‑
blot分析。
[0004]目前GAPDH抗体作为应用最广泛的内参抗体之一，经常用于Western blot等实验，以及可用于各类农产品生理生化变化的研究中。但现有商品化的GAPDH抗体大部分来源于哺乳动物，种类少、价格昂贵。因此，寻找更多亲和力好、表达量高的抗GAPDH的单克隆抗体，有助于进一步了解和掌握各类农产品的生理生化变化规律，开发出更利于人体健康的农产品。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本专利技术提供了一种抗GAPDH的单克隆抗体及其应用，其目的在于通过人源GAPDH的N端短肽作为抗原刺激小鼠，在其体内发现一种高效价的GAPDH抗体，并通过该抗体可变区基因克隆及测序，获得该抗体重链和轻链的氨基酸序列，以此为基础制备抗GAPDH的单克隆抗体，由此解决现有GAPDH抗体种类少、价格昂贵的技术问题。
[0006]为实现上述目的，按照本专利技术的一个方面，提供了一种抗GAPDH的单克隆抗体，其包括重链CDR1或其变体的重链，重链CDR2或其变体的重链，和重链CDR3或其变体的重链；
[0007]以及轻链CDR1或其变体的轻链，轻链CDR2或其变体的轻链，和轻链CDR3或其变体的轻链；
[0008]所述重链CDR1，包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列N
‑
Y
‑
G
‑
M
‑
N或由其组成；所述
重链CDR2，包括SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列W
‑
I
‑
G
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T
‑
N
‑
T
‑
G
‑
E
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P
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T
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Y
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G
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E
‑
E
‑
F
‑
K
‑
G或由其组成；所述重链CDR3，包括SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列D
‑
G
‑
Y
‑
Y
‑
D
‑
F
‑
D
‑
Y或由其组成；
[0009]所述轻链CDR1，包括SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列K
‑
S
‑
S
‑
Q
‑
S
‑
L
‑
L
‑
D
‑
S
‑
G
‑
G
‑
K
‑
T
‑
Y
‑
L
‑
N或由其组成；所述轻链CDR2，包括SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列L
‑
V
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S
‑
K
‑
L
‑
D
‑
S或由其组成；所述轻链CDR3，包括SEQ ID NO:6所示的序列W
‑
Q
‑
G
‑
T
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H
‑
F
‑
K
‑
T或由其组成。
[0010]优选地，所述抗GAPDH的单克隆抗体，其所述变体的重链，其重链可变区包括SEQ ID NO:7，8，9，10所示的氨基酸序列或由其组成、或与SEQ ID NO:7，8，9，10所示的序列具有至少80％，85％，90％同一性的序列、或与SEQ ID NO:7，8，9，10所示的序列相比具有一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列。
[0011]优选地，所述抗GAPDH的单克隆抗体，其所述变体的轻链，其轻链可变区包括SEQ ID NO:11，12，13，14所示的氨基酸序列或由其组成、或与SEQ ID NO:11，12，13，14所示的序列具有至少80％，85％，90％同一性的序列、或与SEQ ID NO:11，12，13，14所示的氨基酸序列相比具有一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列。
[0012]优选地，所述抗GAPDH的单克隆抗体，其所述变体的重链，其重链可变区包括SEQ ID NO:7，8，9，10所示的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:7，8，9，10所示的序列具有至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％同一性的序列、或与SEQ ID NO:7，8，9，10所示的序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸突变的序列，所述氨基酸突变为保守突变，包括置换，插入或缺失氨基酸。
[0013]优选地，所述抗GAPDH的单克隆抗体，其所述变体的轻链，其轻链可变区包括SEQ ID NO:11，12，13，14所示的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:11，12，13，14所示的序列具有至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％同一性的序列、或与SEQ ID NO:11，12，13，14所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸突变的序列，所述氨基酸突变为保守突变，包括置换，插入或缺失氨基酸。
[001本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗GAPDH的单克隆抗体，其特征在于，包括重链CDR1或其变体的重链，重链CDR2或其变体的重链，和重链CDR3或其变体的重链；以及轻链CDR1或其变体的轻链，轻链CDR2或其变体的轻链，和轻链CDR3或其变体的轻链；所述重链CDR1，包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列N
‑
Y
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G
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M
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N或由其组成；所述重链CDR2，包括SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列W
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I
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G
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T
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N
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T
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G
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E
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P
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T
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Y
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G
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E
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E
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F
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K
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G或由其组成；所述重链CDR3，包括SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列D
‑
G
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Y
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Y
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D
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F
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D
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Y或由其组成；所述轻链CDR1，包括SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列K
‑
S
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S
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Q
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S
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L
‑
L
‑
D
‑
S
‑
G
‑
G
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K
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T
‑
Y
‑
L
‑
N或由其组成；所述轻链CDR2，包括SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列L
‑
V
‑
S
‑
K
‑
L
‑
D
‑
S或由其组成；所述轻链CDR3，包括SEQ ID NO:6所示的序列W
‑
Q
‑
G
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T
‑
H
‑
F
‑
K
‑
T或由其组...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴川，漆彦婷，潘炜松，陈刚，徐超，
申请(专利权)人：湖南诺合新生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：