一种奥默柯达菌的检测方法及其蛋白指纹图谱的构建技术

本发明专利技术公开了一种奥默柯达菌的检测方法及其蛋白指纹图谱的构建，涉及临床医学检测技术领域，本发明专利技术基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术，挑选符合要求的谱图，并按照特定的筛选原则，比如最小信噪比≥10，质量偏差≤500ppm，最小出峰权重≥50％，特征峰的数量≤70，提取特征峰，构建奥默柯达菌标准指纹图谱。在实际检测过程中，采集的实时图谱与标准谱比对后快速实现属种鉴定，采集和鉴定的整个过程仅需几分钟。检测结果可广泛应用于临床检验、疾病预防、流行病筛查、进出口检验检疫等领域。域。域。

【技术实现步骤摘要】
一种奥默柯达菌的检测方法及其蛋白指纹图谱的构建


[0001]本专利技术涉及临床医学检测
，具体而言，涉及一种奥默柯达菌的检测方法及其蛋白指纹图谱的构建。

技术介绍

[0002]在过去的二十多年中，由罕见真菌引起的感染显著增加。奥默柯达菌(Kodamaea ohmeri)是一种子囊菌酵母，属于酵母科，广泛用于水果、泡菜和果皮的食品工业发酵。1998年首次从患者的血液中分离出来奥默柯达菌，几十年后，它已成为一种重要的新兴人类病原体，主要引起真菌血症、心内膜炎、蜂窝织炎、腹膜炎以及导管相关血流感染、皮肤感染等，特别是在免疫功能低下的患者中，该菌种已成为真菌病重要的机会性病原体。奥默柯达酵母菌主要传播途径以性交为主，由长期使用抗生素破坏酵母和细菌在阴道内的正常平衡导致，少数由接触到被霉菌污染的物品引起感染。据报道，由奥默柯达菌引起的侵袭性感染死亡率高达50％，作为柯达属中唯一一种可以在37℃以下生长并感染人类的菌种，近年来奥默柯达菌感染病患数量持续增加且死亡率高，世界各地几乎都有相关侵袭性感染的临床案例，尽早识别病原体和适当有效的用药是治疗该罕见真菌感染的重要考虑因素。
[0003]早期，作为一种在临床环境中分离的罕见病原体，奥默柯达菌在临床鉴定上存在诸多问题。以往根据菌落形态鉴定法，由于和念珠菌属形态相似，其经常被误认为是白色假丝酵母、光滑假丝酵母或热带假丝酵母。在大多数临床微生物实验中，根据不同颜色的菌落鉴定念珠菌菌种的显色生长培养基是一种有用工具。奥默柯达菌可以在显色培养基上生长酵母样菌落，其颜色在2r/>‑
3天内从粉红色/淡紫色变为蓝色，可以与光滑假丝酵母(丁香色)和热带假丝酵母(蓝色)区分开来。然而这种颜色变化需要时间，并且需要连续观察。因此，如果在日常工作中仅进行一次观察，显色培养基在识别奥默柯达菌方面的错误识别率可能高达100％。API 20C AUX、VITEK 2Compact等生化方法能很可靠地鉴定念珠菌属，但其有一定概率将奥默柯达菌错误鉴定为光滑假丝酵母、白色假丝酵母、季也蒙假丝酵母等。基因测序作为鉴定奥默柯达菌的金标准但其存在操作复杂、成本较高、测序结果需由专业技术人员处理判读的弊端，尚无法在临床微生物实验室普及和开展常规检测。因此，急需开发一种操作简单、准确性高、通量大、经济可靠的检测方法，以满足临床诊断中快速、准确鉴定需求，为奥默柯达菌临床快速诊断和及时治疗提供支持。
[0004]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种奥默柯达菌的检测方法及其蛋白指纹图谱的构建。
[0006]本专利技术是这样实现的：
[0007]第一方面，本专利技术实施例提供了一种奥默柯达菌蛋白指纹图谱的构建方法，其包括：获取至少一种目标奥默柯达菌作为代表菌株；对每种代表菌株进行质谱检测，获得每种代表菌株对应的原始图谱，根据提取标准从代表菌株的原始图谱中提取特征峰，以获得奥
默柯达菌蛋白指纹图谱；所述提取标准包括：最小信噪比≥10，质量偏差≤500ppm，最小出峰权重≥50％，特征峰的数量≤70。
[0008]第二方面，本专利技术实施例提供了一种奥默柯达菌的鉴定或检测方法，其包括：对待测样本进行质谱检测，获得质荷比峰图；将所述质荷比峰图与奥默柯达菌蛋白指纹图谱对比，鉴定待测样本是否为或是否含有奥默柯达菌；其中，所述奥默柯达菌蛋白指纹图谱为前述实施例所述的构建方法构建获得；所述方法不以疾病的诊断或治疗为直接目的。
[0009]第三方面，本专利技术实施例提供了一种奥默柯达菌的鉴定或检测方法，其包括：对待测样本进行质谱检测，获得质荷比峰图；将所述质荷比峰图与奥默柯达菌蛋白指纹图谱对比，鉴定待测样本是否为或是否含有奥默柯达菌；
[0010]所述奥默柯达菌蛋白指纹图谱中的特征峰包括：分子量3000～6000有25个特征峰，质荷比分别为：(3005～3007)，(3023～3025)，(3105～3017)，(3110～3112)，(3172～30174)，(3176～3178)，(3253～3255)，(3273～3275)，(3342～3344)，(3365～3367)，(3382～3384)，(3426～3428)，(3449～3451)，(3498～3500)，(3644～3646)，(3807～3809)，(3848～3850)，(3892～3894)，(4420～4422)，(4915～4917)，(5513～5515)，(5789～5791)，(5815～5817)，(5954～5956)，(5996～5998)；分子量6000～9000有19个特征峰，质荷比分别为：(6031～6033)，(6069～6071)，(6133～6135)，(6210～6212)，(6339～6341)，(6369～6371)，(6380～6382)，(6495～6497)，(6595～6597)，(6709～6711)，(6770～6772)，(6800～6802)，(6842～6844)，(6888～6890)，(6926～6928)，(7157～7159)，(7283～7285)，(7290～7292)，(8840～8842)；分子量9000～12000的有2个特征峰，质荷比分别为：(9603～9605)，(11028～11030)；所述方法不以疾病的诊断或治疗为直接目的。
[0011]第四方面，本专利技术实施例提供了特征蛋白在制备用于检测或鉴定奥默柯达菌的产品中的应用，所述特征蛋白的数量与如前述实施例中所述的特征峰的数量相同，所述特征蛋白的质荷比与如前述实施例中所述的特征峰的质荷比一一对应。
[0012]第五方面，本专利技术实施例提供了一种检测或鉴定奥默柯达菌的试剂或试剂盒，其包括：前述实施例所述的构建方法构建的奥默柯达菌蛋白指纹图谱或前述实施例中所述的奥默柯达菌蛋白指纹图谱。
[0013]本专利技术具有以下有益效果：
[0014]本专利技术基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI
‑
TOF MS)技术，挑选符合要求的谱图，并按照特定的筛选原则提取特征峰，构建奥默柯达菌标准指纹图谱。在实际检测过程中，采集的实时图谱与标准谱比对后快速实现属种鉴定，采集和鉴定的整个过程仅需几分钟。检测结果可广泛应用于临床检验、疾病预防、流行病筛查、进出口检验检疫等领域。
附图说明
[0015]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0016]图1为奥默柯达菌特征峰提取示意图；
[0017]图2为奥默柯达菌特征峰提取示意图；
[0018]图3为待测图谱与特征谱对比示意图。
具体实施方式
[0019]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种奥默柯达菌蛋白指纹图谱的构建方法，其特征在于，其包括：获取至少一种目标奥默柯达菌作为代表菌株；对每种代表菌株进行质谱检测，获得每种代表菌株对应的原始图谱，根据提取标准从代表菌株的原始图谱中提取特征峰，以获得奥默柯达菌蛋白指纹图谱；所述提取标准包括：最小信噪比≥10，质量偏差≤500ppm，最小出峰权重≥50％，特征峰的数量≤70。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述质谱包括：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱；可选地，在进行质谱检测前，所述构建方法还包括：对每种代表菌株进行前处理，所述前处理的方法包括：甲酸裂解法和蛋白提取法中的至少一种；可选地，当所述处理方法≥2种时，所述根据提取标准从代表菌株的原始图谱中提取特征峰，以获得奥默柯达菌蛋白指纹图谱的步骤包括：根据提取标准分别从代表菌株每种处理方法对应的原始图谱种提取特征峰，以获得每种处理方法对应的奥默柯达菌蛋白指纹图谱；可选地，所述甲酸裂解法包括：将代表菌株的菌落与甲酸水溶液混合；单菌落滴加0.1～5μL体积分数为60％～80％的甲酸水溶液；可选地，所述蛋白提取法包括：获取代表菌株的单菌落与水混合后的菌液，将所述菌液与色谱级无水乙醇混合，离心后取沉淀物依次与甲酸水、乙腈混合，离心后取上清液用于点靶；可选地，所述甲酸水为体积分数为60％～80％的甲酸水溶液。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，进行质谱检测时，每种代表菌株的每种处理方式制备的样本点6～8个靶点，每个靶点采集4～6张原始图谱；可选地，在提取特征峰前，所述构建方法还包括：对代表菌株的原始图谱进行过滤；可选地，所述过滤的标准包括如下：去除有效峰个数≤20个、峰强度≤1000mV和/或不出峰的原始图谱。4.根据权利要求1～3任一项所述的构建方法，其特征在于，所述代表菌株选自：MCCC 2E00862、JC 32993、ATCC 46051、ATCC 52822、ATCC 20282和CBS 5367中的任意一种或多种；可选地，所述代表菌株的菌种数量≥2。5.一种奥默柯达菌的鉴定或检测方法，其特征在于，其包括：对待测样本进行质谱检测，获得质荷比峰图；将所述质荷比峰图与奥默柯达菌蛋白指纹图谱对比，鉴定待测样本是否为或是否含有奥默柯达菌；其中，所述奥默柯达菌蛋白指纹图谱为权利要求1～4任一项所述的构建方法构建获得；所述方法不以疾病的诊断或治疗为直接目的。6.一种奥默柯达菌的鉴定或检测方法，其特征在于，其包括：对待测样本进行质谱检测，获得质荷比峰图；将所述质荷比峰图与奥默柯达菌蛋白指纹图谱对比，鉴定待测样本是否为或是否含有奥默柯达菌；所述奥默柯达菌蛋白指纹图谱中的特征峰包括：分子量3000～6000有25个特征峰，质荷比分别为：(3005～3007)，(3023～3025)，(3105
～3017)，(3110～3112)，(3172～30174)，(3176～3178)，(3253～3255)，(3273～3275)，(3342～3344)，(3365～3367)，(3382～3384)，(3426～3428)，(3449～3451)，(3498～3500)，(3644～3646)，(3807～3809)，(3848～3850)，(3892～3894)，(4420～4422)，(4915～4917)，(5513～5515)，...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘平，黄智斌，廖凯儒，
申请(专利权)人：广州禾信康源医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：