胸腺构建体及其用途制造技术

本发明专利技术提供了一种产生适用于植入受试者的胸腺构建体的方法，所述方法包括以下步骤：(i)提供脱细胞支架；(ii)用具有间充质性质的胸腺上皮细胞接种所述脱细胞支架；和(iii)培养所述接种的支架以产生所述构建体。胸腺上皮细胞优选为CD49f

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】胸腺构建体及其用途


[0001]本专利技术涉及胸腺构建体、制造胸腺构建体的方法及其用途。

技术介绍

[0002]胸腺是一个主要的淋巴器官，其中造血祖细胞被指示成为功能性T细胞。胸腺经历出生后的退化，但在整个生命过程中一直存在。
[0003]胸腺基质的上皮成分来源于内胚层，而间充质基质来源于神经嵴，间充质基质部分来源于传入血管。为了反映它们在免疫调节中的基本作用，许多研究深入了解了胸腺上皮细胞(以下简称“TEC”)的起源和表型复杂性，以及介导其活性的分子，包括选择具有不同非自体侵袭特异性的T细胞所需的AIRE和MHC II类(MHCII)。
[0004]一个核心的、长期建立的TEC鉴别特征是它们被分配为皮质(cTEC)或髓质(mTEC)，从而反映分化的TEC所贡献的解剖区域。然而，尽管已经对定义的TEC和其他基质细胞类型进行了相当详细的研究，但关于TEC和其他细胞如何共同促进人类胸腺的复杂三维(3D)组织，仅了解不完整的具体的分子和细胞。
[0005]由于胸腺控制着免疫能力和耐受性的发展，其功能剥离和随后用所需细胞群重建可能会提供适用于许多疾病的强大工具，包括原发性或获得性免疫缺陷。事实上，培养的胸腺切片目前用于移植到无胸腺患者的临床需求尚未得到满足，而且存在许多不良并发症。
[0006]此外，胸腺治疗策略可能同样适用于器官移植，在器官移植中，耐受性是长期移植物接受的关键障碍。
[0007]到目前为止，重建功能齐全的胸腺的尝试收效甚微，可能是因为胸腺固有的复杂性。此外，出生后上皮干细胞/祖细胞和间充质细胞的性质，包括体外广泛扩增的能力，仍存在很大的不确定性。
[0008]因此，提供使用胸腺组织支架构建功能性胸腺的方法将是有利的。
[0009]提供从脱细胞胸腺生产胸腺组织构建体的方法也是有利的。
[0010]此外，需要能够用表型复制的胸腺细胞生产胸腺组织装置，以便所得构建体在表型上尽可能与天然体内胸腺紧密匹配。
[0011]此外，提供能够使去细胞支架重新增殖的单一胸腺细胞类型将是有利的，特别是其可以在不需要添加HSC的情况下使用。
[0012]因此，无论本文是否公开，本专利技术的实施方案的目的是克服或减轻现有技术的至少一个问题。

技术实现思路

[0013]根据本专利技术的第一方面，提供了一种生产适合植入受试者的胸腺构建体的方法，所述方法包括以下步骤：
[0014](i)提供去细胞支架；
[0015](ii)将胸腺上皮细胞接种于所述去细胞支架；和
[0016](iii)培养所述接种的支架以产生所述构建体。
[0017]去细胞支架可以是脱细胞组织支架或合成支架。这种支架及其生产方法在本领域是众所周知的。例如，WO0214480描述了许多支架类别：(1)不可降解的合成聚合物；(2)可降解合成聚合物；(3)非人胶原蛋白凝胶，其是无孔的；(4)非人胶原蛋白网，其被加工成所需的孔隙率；和(5)脱细胞组织。
[0018]去细胞支架通常不包括细胞或细胞成分。然而，应当理解，例如，在使用来自生物来源的支架(例如脱细胞支架)的情况下，一些细胞可能保留在支架上(例如在脱细胞后)，如下所述。
[0019]在本文的一个实施方案中，所述支架是人造支架，其可以是合成的或天然的聚合物支架。
[0020]其他合成支架在性质上可能是蛋白质的，例如主要由纯化的蛋白质如胶原蛋白组成。非合成支架也可能是蛋白质的，或主要由组织中的胶原细胞外基质(ECM)组成。
[0021]所述支架可以是3D打印的支架，其可以包括任何前述材料。
[0022]优选地，所述支架是脱细胞(生物)基质。
[0023]在一些实施方案中，所述支架包括去细胞胸腺支架。
[0024]在优选实施方案中，所述去细胞胸腺支架是去细胞全胸腺支架，优选是已经去细胞全胸腺；并且在优选的实施方案中，得到的构建体是重建的胸腺。在其他实施方案中，所述去细胞胸腺支架是胸腺的去细胞部分，例如胸腺的叶或腺。
[0025]专利技术人惊奇地发现，当在去细胞支架上接种和培养时，可以使用特定的胸腺上皮细胞(TEC)来产生功能性胸腺。令人惊讶的是，当与胸腺的脱细胞细胞外基质(ECM)或其他合适的支架结合时，TEC表现出上皮
‑
间充质混合细胞功能，能够长期扩增，并能够重建天然胸腺的解剖表型。这种解剖的人类胸腺重建是功能性的，这是通过其在移植到人类免疫缺陷小鼠体内后支持成熟T细胞发育的能力来判断的。
[0026]由此产生的构建体可以被认为是人工器官，特别是人工胸腺。
[0027]适用于接种到去细胞支架上的TEC显示出间充质特征、特性和/或功能。我们说“间充质特征”，可以理解为TEC包括存在于间充质细胞(特别是胸腺间充质细胞)中的一种或多种表达标记。我们说“间充质特性”和“间充质功能”)，意在表明TEC表现出间充质行为和上皮行为，并且能够分化为不同的胸腺细胞类型。
[0028]令人惊讶的是，人们发现，这种同时具有上皮和间充质功能的“杂合”TEC群体可以被分离并用于创建胸腺构建体，而不需要与其他细胞类型进行进一步的细胞接种。
[0029]在一些实施方案中，在步骤(ii)之前分离、纯化和扩增示出了间充质特性的TEC群体。分离、纯化和扩增可以通过本领域常规的任何合适的方法进行。因此，所述TEC优选为克隆源性TEC。
[0030]已经发现，与已知的方法相比，使用分离和扩增的细胞群体提供了更有效的去细胞支架的再增殖，在已知的方法中，胸腺细胞被简单地消化并应用于去细胞支架，或者在培养胸腺细胞群体之前不分离TEC。
[0031]在一些实施方案中，所述TEC包括髓质TEC(mTEC)、皮质TEC(cTEC)，或优选mTEC和cTEC的组合，特别是mTEC和cTEC中至少一个，和优选地两者均呈现间充质表达标记物的mTEC和cTEC组合。
[0032]在其他实施方案中，所述TEC可以源自前体或干细胞，例如已被诱导分化为TEC、特别是mTEC和cTEC的诱导多能干细胞。
[0033]在一些实施方案中，TEC表达CD49f(CD49f+)。在一些实施方案中，所述TEC是CD49f+，和选自CD90+VIM+和TE
‑
7+的至少一种。
[0034]在优选的实施方案中，所述TEC基本上都是CD49f+。在特别优选的实施方案中，CD49f+TEC也为VIM+和任选地TE
‑
7+。
[0035]在优选的实施方案中，TEC基本上都是CD49f+。在特别优选的实施方案中，CD49f+TEC也是VIM+和任选的TE
‑
7+。
[0036]在一些实施方案中，所述TEC表达CD90(CD90+)和CD49f(CD49f+)。
[0037]在优选实施方案中，所述TEC表达CD49f(CD49f+)CD90(CD90+)和VIM(VIM+)。
[0038]在优选实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种适于植入受试者的胸腺构建体的生产方法，所述方法包括以下步骤：(i)提供脱细胞支架；(ii)将具有间充质性质的胸腺上皮细胞接种于所述脱细胞支架；和(iii)培养所述接种的支架以产生所述构建体。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤(ii)包括用胸腺上皮细胞(TEC)和胸腺间质细胞(TIC)接种所述脱细胞支架。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述胸腺上皮细胞包括髓质胸腺上皮细胞(mTEC)、皮质胸腺上皮细胞(cTEC)，或优选mTEC和cTEC的组合。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述TEC和TIC以3:1的TEC∶TIC至10:1的TEC∶TIC，优选为4:1至8:1，最优选为约5:1的比值进行接种。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述胸腺上皮细胞是CD49f
+
，优选也是选自VIM
+
、TE
‑7+
和CD90
+
的至少一种。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述胸腺上皮细胞是CD49f
+
和CD90
+
。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述脱细胞支架是通过使整个胸腺或胸腺的一部分或胸腺叶脱细胞而产生的。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述胸腺、胸腺的一部分或胸腺叶通过灌注选自洗涤剂、蛋白酶和核酸酶的至少一种脱细胞培养基而脱细胞。9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(iii)包括将胸腺...

【专利技术属性】
技术研发人员：帕奥拉，
申请(专利权)人：弗朗西斯克里克研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：