一种体外灭活肝肠孢虫的组合物及其应用和方法技术

本发明专利技术提供了一种体外灭活肝肠孢虫的组合物及其应用和方法，涉及养殖技术领域。本发明专利技术所述体外灭活肝肠孢虫的方法，包括：用pH值为4.0

【技术实现步骤摘要】
一种体外灭活肝肠孢虫的组合物及其应用和方法


[0001]本专利技术属于养殖
，尤其涉及一种体外灭活肝肠孢虫的组合物及其应用和方法。

技术介绍

[0002]南美白对虾(Litopenaeusvannamei)是我国目前养殖规模最大的对虾种类之一，其肉质鲜美、营养丰富、经济价值高，深受人们的喜爱。南美白对虾的生长速度快，繁殖数量高，且后代存活率高，已成为我国市场重要的水产品之一，其市场具有广阔的发展前景。但是，对虾的养殖业一直饱受对虾缓慢生长综合征的困扰，患有对虾缓慢生长综合征的养殖池中的对虾生长速度明显低于正常对虾，EHP是目前造成对虾生长缓慢的主要病原之一。
[0003]虾肝肠胞虫(Enterocytozoonhepatopenaei,EHP)是一种专性细胞内寄生的微孢子虫，具有几丁质的孢子壁，抗逆性较强，其感染并寄生宿主后，通过掠夺或与宿主竞争营养物质来进行生长发育，导致宿主营养不良，进而导致其生长迟缓甚至停滞，严重影响了养殖对虾的成虾产量，损害了养殖户的经济效益。每年都有因为EHP感染而失败的养殖案例，需要进行清塘。EHP传播方式主要分为垂直传播和水平传播。若不进行清塘，再次养殖时还会有感染的风险。传统的消杀方式主要用CaO2，该方式费时费力，成本也较高。截止目前未见有明确药物可控制EHP感染的相关报道。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种体外灭活肝肠孢虫的组合物及其应用和方法，能够使肝肠孢虫失去侵染致病能力。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种体外灭活肝肠孢虫的组合物，包括以下浓度的溶液：50
‑
100mg/L的二氧化氯溶液和pH值为4.0
‑
5.0的水溶液。
[0007]优选的，通过柠檬酸调节所述水溶液的pH值。
[0008]本专利技术还提供了上述组合物在体外灭活肝肠孢虫中的应用。
[0009]本专利技术还提供了利用上述组合物在体外灭活肝肠孢虫的方法，包括：用所述水溶液处理肝肠孢虫悬液后，再用二氧化氯溶液处理。
[0010]优选的，所述肝肠孢虫悬液的制备方法包括：将患有肝肠孢虫南美白对虾的肝胰腺制备成匀浆后，用体积百分含量为25％
‑
35％、55％
‑
65％和85
‑
95％的Percoll进行密度梯度离心，将最下层沉淀用水重悬，得到所述肝肠孢虫悬液。
[0011]优选的，所述重悬所用水的体积为90
‑
110μL。
[0012]优选的，所述水溶液、二氧化氯溶液与肝肠孢虫悬液的体积比为(1
‑
3):(1
‑
3):(1
‑
3)。
[0013]优选的，所述水溶液处理的时间为5
‑
15min。
[0014]优选的，所述二氧化氯溶液的处理时间为10
‑
20h。
[0015]相对于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
[0016]本专利技术提供了一种体外灭活肝肠孢虫的组合物及其应用和方法，包括：用pH值为4.0
‑
5.0的水溶液刺激肝肠孢虫后，再用二氧化氯溶液处理。其中pH值为4.0
‑
5.0的水溶液刺激肝肠孢虫，能使其萌发；二氧化氯溶液处理，能使肝肠孢虫灭活，失去侵染致病能力。采用本专利技术体外灭活肝肠孢虫的方法对环境无污染，除此之外在安全性、有效性、成本效益、便捷性等方面都具有一定的优势，针对性强、效果显著。。
附图说明
[0017]图1为实施例1EHP的分离纯化密度梯度离心结果；
[0018]图2为实施例1和对比例1步骤2的混合液镜检图；其中左图为对比例1，右图为实施例1；
[0019]图3为不同浓度的二氧化氯溶液对EHP的影响；其中上左、上中、上右、中左、中右、下左和下右图片中二氧化氯溶液的浓度分别为0、0.5、1、5、10、50、100mg/L。
具体实施方式
[0020]本专利技术提供了一种体外灭活肝肠孢虫的组合物，包括以下浓度的溶液：50
‑
100mg/L的二氧化氯溶液和pH值为4.0
‑
5.0的水溶液。
[0021]在本专利技术中，对水溶液pH值的调节试剂没有特殊限定，作为一种可实施方式，通过柠檬酸调节所述水溶液的pH值。
[0022]本专利技术所述水溶液中的水优选为超纯水。
[0023]本专利技术还提供了上述组合物在体外灭活肝肠孢虫中的应用。
[0024]本专利技术还提供了上述组合物在体外灭活肝肠孢虫的方法，包括：用所述水溶液刺激肝肠孢虫悬液后，再用二氧化氯溶液处理。
[0025]EHP侵染机制之一为：孢子与宿主细胞进行识别与结合，EHP孢子萌发，极丝弹出穿刺宿主细胞质膜后成为极管，将孢原质注入宿主细胞中完成侵染，而灭活的EHP无法弹出极丝，也即无法将孢原质注入宿主细胞完成侵染。孢子虫在体外以休眠态的孢子形式存在，孢子壁由几丁质和孢壁蛋白组成，能够抵御外界的不良环境。肝肠孢虫的孢子壁结构使其对环境胁迫具有很强的耐受能力，即使离开了宿主进入环境中也能够存活相当长的一段时间。所以现有技术中不将EHP萌发就直接用药物清塘，并不能将EHP彻底灭活，导致南美白对虾出现反复感染EHP的现象。本专利技术先用低pH值水溶液刺激肝肠孢虫，能使其萌发，再用二氧化氯溶液处理，使肝肠孢虫灭活，失去侵染致病能力，能从源头上显著减少南美白对虾感染EHP的几率。
[0026]本专利技术所述肝肠孢虫悬液的制备方法优选包括：将患有肝肠孢虫南美白对虾的肝胰腺制备成匀浆后，用体积百分含量为25％
‑
35％、55％
‑
65％和85
‑
95％的Percoll进行密度梯度离心，将最下层沉淀用水重悬，得到所述肝肠孢虫悬液；所述Percoll的浓度更优选为30％、60％和90％；所述重悬所用水的体积优选为90
‑
110μL，更优选为100μL。
[0027]本专利技术所述水溶液、二氧化氯溶液与肝肠孢虫悬液的体积比优选为(1
‑
3):(1
‑
3):(1
‑
3)，更优选为2:2:2。
[0028]在本专利技术中，所述水溶液处理的时间优选为5
‑
15min，更优选为10min；所述二氧化
氯溶液的处理时间优选为10
‑
20h，更优选为16h。
[0029]本专利技术对未涉及来源的原料没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可。
[0030]下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0031]实施例1
[0032]1、EHP的分离纯化
[0033](1)取20只患EHP南美白对虾的肝胰腺，研钵研磨后用0.22μm本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种体外灭活肝肠孢虫的组合物，其特征在于，包括以下浓度的溶液：50
‑
100mg/L的二氧化氯溶液和pH值为4.0
‑
5.0的水溶液。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，通过柠檬酸调节所述水溶液的pH值。3.权利要求1或2所述组合物在体外灭活肝肠孢虫中的应用。4.一种利用权利要求1或2所述组合物在体外灭活肝肠孢虫的方法，其特征在于，包括：用所述水溶液处理肝肠孢虫悬液后，再用二氧化氯溶液处理。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述肝肠孢虫悬液的制备方法包括：将患有肝肠孢虫南美白对虾的肝胰腺制备成匀浆后，用体积百分含量为25％
‑
35％、55％
‑
6...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈辉，曹晓慧，乔毅，蒋葛，成婕，万夕和，黎慧，王李宝，史文军，窦雅斌，刘学实，张晟，张雷霆，秦亚丽，沈静，
申请(专利权)人：江苏省海洋水产研究所，
类型：发明
国别省市：