一种广谱型青枯菌噬菌体PTY21及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种广谱型青枯菌烈性噬菌体PTY21，所述噬菌体PTY21于2023年04月17日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：63365

【技术实现步骤摘要】
一种广谱型青枯菌噬菌体PTY21及其应用


[0001]本专利技术涉及青枯病防治
，更具体地，涉及一株宿主广谱型的青枯菌噬菌体PTY21及其应用。

技术介绍

[0002]由茄科劳尔氏细菌(Ralstonia solanacearum，俗称青枯菌)引起的植物青枯病，是一种世界性的重要植物细菌病害之一，寄主范围广，可危害番茄、辣椒、茄子、烟草、马铃薯、花生、姜、花卉、药材和林木等50个科的500多种植物，并可造成了毁灭性灾害，在热带和亚热带及温带地区尤为严重。青枯病菌寄主范围广，喜高温，种群复杂，防治非常困难，目前还没有有效的防治途径和方法。生产上一般以农业防治、抗病育种和化学防治为主，但效果不很理想。利用抗病品种来防治青枯病是一种经济且易于操作的措施，然而，目前我国还缺乏优质丰产和高抗的作物品种，而且，由于环境变化或病原菌产生变异，使得抗病品种在长期种植过程中逐渐丧失抗性。采用水旱轮作的方式，在一些地方也受到耕作制度的限制，实施较困难。青枯病化学防治的难度较大，因为目前尚未有理想的化学药剂，一直以来施用的农用链霉素，现在已经退出了市场，其它化学药剂，如龙克菌、王铜、硫酸铜等铜制剂的施用，对推迟和减缓青枯病的发生具有一定作用，但不能从根本上解决青枯病的防治问题，且大量化学药剂的使用，会导致病原菌产生抗药性和环境污染，因此，青枯病的生物防治受到国内外广泛重视。
[0003]噬菌体是一种通过与细菌细胞表面特异位点结合后杀灭特异性细菌的病毒，具有杀菌特异性强、对人畜无害等显著的优点，极具作为新型生物农药开发潜质。在青枯病菌噬菌体研究方面，Tanaka等(1990)利用从青枯病菌筛选到的2个噬菌体菌株，能降低烟草青枯病的发病率。Kutin等(2009)筛选到了一株裂解谱较广的噬菌体M
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DS1可以用来检测土壤青枯菌的存在，其检测灵敏度达102cfu/g。丝状噬菌体φRSM1和φRSM3侵染青枯菌能降低青枯菌的毒力，其生理生化也发生变化(Addy et al.,2012)，而将丝状噬菌体φRSM3侵染的青枯菌先接种于番茄根部，再接种野生型青枯菌，通过荧光检测方法发现，野生型青枯菌其毒力受到抑制，番茄整体发病率下降(Addy et al.,2012)。Fujiwara等(2011)使用烈性青枯菌噬菌体进行青枯病的生物防治，证明了噬菌体用于青枯病防治具有一定的效果。尽管如此，但至今噬菌体制剂产品的应用仍然极少。由于青枯菌种群的多样性和复杂性，导致一些噬菌体的宿主范围有限，例如余成鹏等(2018)报道了6个青枯菌噬菌体侵染江西和广东烟草青枯菌裂解情况，发现这些噬菌体对侵染烟草青枯菌都存在局限性，没有报道侵染来源于其他植物的青枯菌，其中噬菌体P1553寄主范围很窄。因此，筛选裂解能力强，且宿主范围广的青枯菌噬菌体，具有广阔的应用前景。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是针对现有青枯菌噬菌体宿主范围有限，裂解能力不强的缺陷和不足，提供一株宿主范围广，裂解能力强，防治效果好的青枯菌噬菌体PTY21及
其应用。
[0005]本专利技术的第一个目的在于提供一株广谱型青枯菌噬菌体PTY21。
[0006]本专利技术的第二个目的在于提供所述广谱型青枯菌噬菌体PTY21的应用。
[0007]本专利技术的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：
[0008]一株广谱型青枯菌噬菌体PTY21，所述噬菌体于2023年04月17日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：63365
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B1。
[0009]本专利技术从来自江西赣州市番茄青枯病根际周围土壤中分离得到了一株青枯菌噬菌体，可在含有宿主菌—青枯菌Tb1546的平板上出现明显的噬菌斑，命名为噬菌体PTY21，基因组学结果表明，所述噬菌体PTY21为双链DNA病毒，尾噬菌体门，有尾噬菌体纲，有尾噬菌体目，自复制短尾噬菌体科，已于2023年04月17日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：63365
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B1，分类命名号为Ralstonia phage PTY21。本专利技术通过对106株不同寄主来源的青枯菌株的感染试验，发现噬菌体PTY21宿主范围很广，能侵染106株青枯菌中的76株青枯菌菌株，可以侵染包括烟草、番茄、辣椒、茄子、马铃薯、花生、紫苏、百日草、桉树等植物来源的青枯菌，在青枯菌平板上产生的噬菌斑较大，裂解能力强，表明噬菌体PTY21能侵染的作物青枯病种类较多，防治范围广泛，具有宿主范围广特性。同时生物学特性研究发现，噬菌体PTY21最适宜生长繁殖的温度为30～40℃，45～55℃温度下，仍然表现出较高活性，致死温度为70℃。耐酸耐碱，噬菌体PTY21在pH4～12范围内都有活性，其中在pH6～11范围内，活性最强，但pH<3或pH>13，噬菌体PTY21基本上没有活性。氯仿对噬菌体PTY21有影响，而乙醚不影响。可根据对温度对噬菌体的影响，可以用来控制噬菌体的活性，且控制条件简单，在噬菌体的应用中有着实际意义。
[0010]因此，本专利技术还提供上述广谱型青枯菌噬菌体PTY21在防治植物青枯病中的应用。
[0011]本专利技术还提供上述广谱型青枯菌噬菌体PTY21在制备防治植物青枯病的制剂中的应用。
[0012]本专利技术还提供一种防治植物青枯病的制剂，所述制剂包含上述任一所述广谱型青枯菌噬菌体PTY21。
[0013]优选地，所述制剂中噬菌体PTY21的含量≥108PFU/mL。
[0014]本专利技术还提供上述任一所述制剂在防治植物青枯病中的应用。
[0015]优选地，所述植物青枯病为茄子青枯病、花生青枯病、辣椒青枯病、马铃薯青枯病、紫苏青枯病、百日草青枯病、桉树青枯病、烟草青枯病、番茄青枯病中的一种或多种。
[0016]本专利技术还提供一种防治植物青枯病的方法，是向植物根部或叶片施用上述任一所述广谱型青枯菌噬菌体PTY21或上述任一所述制剂。
[0017]优选地，所述植物为烟草、番茄、辣椒、茄子、马铃薯、花生、紫苏、百日草或桉树中的一种或多种。
[0018]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0019]本专利技术提供了一株广谱型青枯菌噬菌体PTY21，所述噬菌体于2023年04月17日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：63365
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B1，分类命名号为Ralstonia phage PTY21；所述噬菌体PTY21宿主谱广，能侵染不同寄主来源的106株青枯菌中的76株，可侵染包括烟草、番茄、辣椒、茄子、马铃薯、花生、紫苏、百日草、桉树等植物来源的青枯菌，且裂解能力强，防治范围广泛，能更有效的解决农作物种植中出现的青枯菌感染
问题，可作为用于防治植物青枯病。
附图说明
[0020]图1为噬菌体PTY21在青枯菌Tb1546培养平板上的噬菌斑。
[0021]图2为生长温度对噬菌体PTY21效价的影响。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株广谱型青枯菌噬菌体(Ralstonia phage)PTY21，其特征在于，所述噬菌体于2023年04月17日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：63365
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B1。2.根据权利要求1所述广谱型青枯菌噬菌体PTY21，其特征在于，所述噬菌体PTY21为双链DNA病毒，尾噬菌体门，有尾噬菌体纲，有尾噬菌体目，自复制短尾噬菌体科。3.权利要求1或2所述广谱型青枯菌噬菌体PTY21在防治植物青枯病中的应用。4.权利要求1或2所述广谱型青枯菌噬菌体PTY21在制备防治植物青枯病的制剂中的应用。5.一种防治植物青枯病的制剂，其特征在于，包含权利要求1所述广谱型青枯菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：桂艳男，黄章慧，
申请(专利权)人：广州宾德利生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：