去除术中回收血液中肿瘤细胞的离体方法技术

本发明专利技术涉及一种从术中回收血液中去除肿瘤细胞的离体方法，该方法包括将三功能抗体与所述血液接触以形成抗体、肿瘤细胞和免疫细胞的聚集体或结合物，离心以获得红细胞浓缩物，以及过滤以从所述红细胞浓缩物中除去所述聚集体或结合物和残留抗体。集体或结合物和残留抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】去除术中回收血液中肿瘤细胞的离体方法


[0001]本专利技术涉及一种使用三功能双特异性抗体去除回收血液中肿瘤细胞，以及减少由此产生的红细胞浓缩物中的残余抗体的方法。

技术介绍

[0002]自1980年代初艾滋病流行以来，人们对异体输血的替代方案的兴趣日益浓厚，特别是对择期手术。目前占美国和欧洲一些国家献血5％以上的一种替代方案是自体输血，其主要通过术前献血获得。除术前献血外，手术区域的术中血液回收(Intraoperative blood salvage，IBS)(表A)是满足输血需求的重要选择。在上述IBS过程中，手术患者流失的血液被收集、清洗并使其可用于再回输给该患者。
[0003]简而言之，流入手术区域的血液从该部位吸入专门设计的容器。加入柠檬酸盐或肝素抗凝剂，离心和/或过滤内容物以去除白细胞和血块和碎片。使用的IBS设备可以从简单、廉价的装有抗凝剂的无菌瓶到昂贵、复杂、高速的细胞洗涤设备(例如Medtronic Sequestra 1000，Cobe BRAT 2，Medtronic Autolog，Haemonetics Cell Saver
‑
和FreseniusBentzien等人，Anaesthesist 49:505，2000；Serrick等人，J.Extra Corpor.Technol.35(1):28，2003；Carless等人，The Cochrane Review，In:The Cochrane Library，John Wiley&Sons,Ltd.，Issue 3pp.1
‑
180，2010)。在美国，每年有近一百万例手术用到IBS方法，其已成为医院血液管理和保存计划不可或缺的一部分(www.bloodbook.com)。
[0004]由于总体输血率高，除了术前贫血的发生率增加外，术前献血还引发了其他严重的经济问题(Carless等人，Transfus.Med.14:123，2004)。此外，在意大利，根据监管指南，异体输血不包括不需要的自体血液制品，由此必须丢弃大约30％的术前自体献血。在这方面，IBS和随后的自体输血通常是血液管理中安全和更具成本效益的措施。
[0005]表A：癌症手术术中血液回收基准
[0006][0007][0008]术中血液回收的优点
[0009]与输入异体红细胞相反，IBS被认为是一种安全有效的替代方案。重要的是，尽管
有出色的病毒诊断，但HIV感染的传播风险为每493.000次异体输血1例，丙型肝炎病毒感染的传播风险为每103.000次异体输血1例，乙型肝炎病毒感染的传播风险为每63.000次异体输血1例(Schreiber等人，N.Engl.J.Med.334:1685，1996)。从1996年到2001年进行的一项“输血的严重危害”的研究结果记录了这些异体输血事件的风险(Dzik等人，Transfusion 43:1190，2003)。引人注目的是，与献血和输血过程中由于管理或人为失误而导致ABO不相容血液的巨大风险相比，通过输入受污染的血传播传染病的风险似乎更小(Sazama，Transfusion 30:583，1990；Dzik等人，Transfusion 43:1190，2003)。超过70％的输血事件可归因于不正确的输血成分，其主要是由于管理失败和采样、处方和成分收集错误造成的(Dzik等人，Transfusion 43:1190，2003)。术前和术中自体红细胞输血本质上绕过了这些异体输血的固有风险。一般来说，自体血液回收技术具有优势，不需要输注晶体液或胶体来保持血容量(表A)。在大出血期间，术中可以回收多升血液，这远远超过其他自体技术。
[0010]患者对IBS的适用性
[0011]术中血液回收已经使用超过25年。它广泛用于心胸外科、血管和创伤外科以及肝移植。其应用的禁忌有细菌感染和肿瘤细胞可能流入手术区域，以及在手术部位使用微纤维胶原蛋白或其他异体材料。如今，由于献血短缺和对传播感染的恐惧，IBS的使用也在高失血癌症手术中引起了极大兴趣。报告发现与标准存活数据相比，局部复发或转移性疾病没有增加，因此不愿意在癌症手术中使用自体输血的外科医生已经减少(Klimberg等人，Arch.Surg.212:1326，1986；Perseghin等人，Vox Sang.72:221,1997)。如Vanderlinde等人(BMJ 324:772，2002)回顾的那样，与异体输血相比，用术前献血中收集的红细胞进行自体输血可以显著降低结直肠癌手术期间的感染和复发发生率(表B)。其中一些经过评审的临床试验甚至更为重要，因为由于细菌传播感染的固有风险，结直肠手术本身已被排除在IBS建议之外。
[0012]表B：自体与异体输血的随机试验的临床结果*
[0013][0014][0015]NS＝不显著
[0016]NA＝不可用(即没有报道)
[0017]*表格摘自Vanderlinde等人，BMJ 324:772，2002。
[0018]然而，一项研究清楚地表明，可以在手术区域检测到肿瘤细胞，尽管它们对癌症复发的影响尚不清楚(Hansen等人，Arch.Surg.130:387，1995)。例如，其比较了61位患者(进行了腹部、骨科、泌尿科、妇科或头颈部恶性肿瘤的癌症手术)的外周血和IBS中的肿瘤细胞数量。在上述61位患者中，在57位患者的肿瘤手术期间的血液中检测到肿瘤细胞。对这些肿瘤细胞的增殖能力、侵袭性和成瘤性进行鉴定，灵敏度为每500mL血液10个肿瘤细胞(Hansen等人，Arch.Surg.130:387，1995)。有趣的是，流出血液中的肿瘤细胞数量与失血量无关，并且这些患者中只有26％可以在外周血中检测到循环肿瘤细胞。因此，据估计，流入手术区域的血液中的肿瘤细胞数量可能在10到107的范围内。这些结果也由Dale等人，Br.J.Surg.75：581，1988和M
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ller等人，Anaesthesist 45：834，1996独立证实。
[0019]为了进一步解决IBS样品中残余的肿瘤细胞的风险的安全问题，需要额外的方法来有效清除污染的肿瘤细胞：
[0020]·
一种方法是与Cell Saver
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等自动IBS设备联合使用，以白细胞去除过滤器(例如Pall RC400、RCEZ1T)，RC XL
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1)对样品进行额外过滤为代表(Bantadini等人，Transfusion 34.531，1994；Yaprak等人，Turk.J.Pediatr.40:89,1998；Gwak等人，LiverTransplant.11:331,2005)。安全输入通过IBS收集的红细胞不会损害临床结果，正如几项试验所评估的那样(Edelman等人，Urology 47:179，1996；Perseghin等人，VoxSang.72:221,1996；Davis本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种从术中回收血液中去除肿瘤细胞的离体方法，其包括以下步骤：(i)将可能含有免疫细胞和肿瘤细胞的术中回收血液收集到储液器中；(ii)将储液器中步骤(i)所述术中回收血液与至少一种三功能抗体和/或支架蛋白接触，其中所述抗体或所述支架蛋白具有以下性质：a)与T细胞结合；b)与肿瘤细胞上的肿瘤相关抗原结合；c)通过其Fc部分与Fc受体阳性细胞结合，从而获得包含细胞聚集体的术中回收血液，其中所述细胞聚集体包含所述三功能双特异性抗体和/或所述支架蛋白；(iii)通过离心从步骤(ii)获得的术中回收血液中分离红细胞浓缩物；(iv)洗涤步骤(iii)中所述红细胞浓缩物；(v)过滤步骤(iv)中所述红细胞浓缩物以去除所述聚集体的残留物和/或所述与细胞结合的三功能双特异性抗体和/或支架蛋白的残留物。2.根据权利要求1所述的离体方法，其特征在于，所述三功能抗体选自由双特异性、三特异性、四特异性和多特异性抗体组成的组，优选完整IgG双特异性抗体。3.根据权利要求1或2所述的离体方法，其特征在于，用于与步骤(ii)中所述术中回收血液接触的所述至少一种三功能抗体和/或所述支架蛋白的量为2.5μg或更多，优选2.5μg或更多至5.0μg或更少。4.根据权利要求1至3任一项所述的离体方法，其特征在于，步骤(i)中所述术中回收血液的体积为300ml或更多，优选在应用三功能双特异性抗体之前收集在储液器中的体积为400ml或更多，任选地，所述方法还包括将步骤(i)中所述术中回收血液稀释至350ml至2800ml的体积的步骤，优选350ml至2000ml，其中含有至少300ml
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500ml未稀释的术中回收血液。5.根据权利要求1至4任一项所述的离体方法，其特征在于，所述方法还包括另外至少一轮的步骤(i)至(v)，并且其中至少在第一轮中，用于与所述三功能抗体接触的术中回收血液的体积为400
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1500ml。6.根据权利要求5所述的离体方法，其特征在于，所述术中回收血液是血液和稀释液的混合物。7.根据权利要求1至6任一项所述的离体方法，其特征在于，在步骤(ii)中将所述至少一种三功能抗体和/或所述支架蛋白与所述术中回收血液接触10
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180分钟的时间以获得含有细胞聚集体的术中回收血液，优选20
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90分钟，更优选30
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60分钟；任选地在19
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25℃的温度下，优选在室温下。8.根据权利要求1至7任一项所述的离体方法，其特征在于，所述细胞聚集体包括抗体、肿瘤细胞和免疫细胞，其中所述免疫细胞优选为T细胞和/或Fcγ受体阳性细胞。9.根据权利要求1至8任一项所述的离体方法，其特征在于，步骤(v)中使用的过滤器用于过滤步骤(iv)中的红细胞浓缩物，其中所述过滤器优选为白细胞去除过滤器。10.根据权利要求1至9任一项所述的离体方法，其特征在于，所述至少一种三功能抗体选自具有以下同种型组合的抗体组成的组：大鼠
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IgG2b/小...

【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：林迪斯血液护理有限责任公司，
类型：发明
国别省市：