检测人体尿液中三甲基氯化锡和氯丙嗪的方法技术

本发明专利技术涉及一种生物工程技术领域的尿液代谢物的检测方法，特别是涉及一种检测人体尿液中三甲基氯化锡和氯丙嗪的方法；其特征在于包括以下步骤：第一步，将收集的尿液离心后保存；第二步，取第一步得到的尿液，加入氢氧化钠和氯化钠，再加入乙酸乙酯，蜗旋，离心进行萃取；第三步，吸出有机相，加入无水硫酸钠除水，常温常压下用氮气浓缩；第四步：取第三步中的浓缩液用于气相色谱质谱联用测定；本发明专利技术具有简便、快捷、结果可靠、自动化程度高、便于产业化应用的检测人体尿液中三甲基氯化锡和氯丙嗪的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物工程
的尿液代谢物的检测方法，特别是涉及 一种。
技术介绍
三甲基氯化锡为晶状固体，具有腐败青草气味，常温下易挥发。工业上接 触到的三甲基氯化锡主要是来源于有机锡塑料稳定剂，三甲基氯化锡是生产有 机锡稳定剂中所产生的副产品，具有高度毒性，可通过呼吸道、消化道和皮肤 黏膜进入机体。生活中用到的有机锡塑料都会含有三甲基氯化锡，人体接触到 的概率非常高，存在相当大的危害。氯丙嗪为乳白色粉末，微臭，味极苦，有吸湿性，遇光渐变色，水溶液呈 酸性。氯丙嗪作为一种镇静剂，除了临床上通常用于抗精神药物外，还可作为 兽药用做动物镇静剂。随着集约化畜牧业的发展,兽药的使用量也在日渐增加。 在给畜牧业带来方便的同时，也给环境及人类健康带来了负面的影响。首先,兽 药原形或代谢^物可能蓄积、贮存在动物的细胞、组织、器官或可食性产品(如 蛋、奶)中，产生兽药残留。兽药残留对人类的健康存在着较大的潜在危害。除 了在动物性食品中的残留外,兽药还可以随动物的粪便、尿液排出体外,造成水 体和土壤环境的污染。由于土壤的淋溶作用，兽药又可以在土壤中迁移，使地下 水受到污染，进而有可能对整个生态系统造成不良效应。鉴于环境污染的形势非常严峻，建立环境污染对人体危害的预警体系非常 有必要。通过查阅文献我们发现，目前国内学者对环境污染物三甲基氯化锡和氯丙嗪内暴露代谢物的研究所采用的方法有很多，包括GC、 HPLC、 GC-MS、酶 联免疫吸附法标等；方法中使用的仪器型号也种类不一，以GC-MS为例，使用 日本岛津GC-14A和美国安捷伦6890N-5973MSD等的兼而有之；并无专门的机构对环境污染物质及其代谢产物的人体内暴露进行检测。大部分研究致力于对单 项污染物质进行检测，同种物质采用的方法也不尽相同，而且关注重点在于提 高污染物质的回收率，忽视了检测种类的全面性和综合性，检测成本较高，难 以系统化全面评价人体的污染物接触程度，不利于产业化推广到普通人群。在所采用的检测方法当中，与其他方法相比，用气质联用检测样本，检测 灵敏度高，能定性定量，为检测低浓度代谢物提供条件，并且其自动化检测更 容易进行大批量的测定。方法方便，快捷，准确。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供一种方法简便、快捷、结果可靠、自动 化程度高、便于产业化应用的。 本专利技术方法是通过以下技术方案实现的，其特征在于包括以下步骤 第一步，将收集的尿液离心后保存；第二步，取第一步得到的尿液，加入氢氧化钠和氯化钠，再加入乙酸乙酯，蜗旋，离心进行萃取；第三步，吸出有机相，加入无水硫酸钠除水，常温常压下用氮气浓缩； 第四步取第三步中的浓縮液用于气相色谱质谱联用测定。 本专利技术具有以下优点1. 本专利技术采用尿样作为检测样本，对人体无损伤，方便且易获得。2. 在面对同样的环境污染条件下，个人受损伤程度并不一致。本专利技术致力 于对人环境污染物质内暴露(尿样)水平的测定，能真实反映暴露水平和个人 损伤程度。不仅反映了多种途径暴露的总水平，而且能避免由环境外暴露剂量 估计暴露水平时吸收率的个体差异性的影响。3. 用气质联用检测样本，检测灵敏度高，能定性定量，为检测低浓度代谢 物提供条件，并且其自动化检测更容易进行大批量的测定。方法方便，快捷， 准确。4. 本专利技术以尽可能少的步骤同时检测三甲基氯化锡和氯丙嗪，检测成本低， 能系统化全面评价人体的污染物接触程度，有利于产业化推广到普通人群。5. 本专利技术通过同时检测三甲基氯化锡和氯丙嗪内暴露对人的健康危害，建 立这两种污染物内暴露对健康危害程度评价的参考标准。通过这个检测方法的 建立，人们能对自身健康迸行评价，知道这些环境污染物对自己的危害程度， 为诊断或预测其患有某种疾病的可能性和发展趋势提供科学依据。6. 在同时检测三甲基氯化锡和氯丙嗪内暴露健康危害的同时，还进行跟踪 和干预。对有安全隐患的个体进行饮食、作息、生活习惯等等各种因素的调整， 把威胁隐患降到最低。附图说明图1是本专利技术实施例1所得用乙酸乙酯萃取1号人体尿液所得气相质谱选 择离子流图。图2是本专利技术实施例1所得用乙酸乙酯萃取2号人体尿液所得气相质谱选 择离子流图。图3是本专利技术实施例1所得用乙酸乙酯萃取3号人体尿液所得气相质谱选 择离子流图。_ 具体实施例方式本专利技术方法的各个步骤如下第一步，将收集的尿液离心后保存，保存温度为-20 °C;第二步，取第一步得到的尿液，加入氢氧化钠和氯化钠，再加入乙酸乙酯， 蜗旋，离心进行萃取；所述取尿液的体积为10ml，所述氢氧化钠加入的量为200ul，质量分数为 5%;氯化钠加入的量为3g，乙酸乙酯加入的量为10ml。所述蜗旋的转速为 1500rpm，时间为5min。所述离心的转速为3000rpm，时间为4min。第三步，吸出有机相，加入无水硫酸钠除水，常温常压下用氮气浓缩；所述无水硫酸钠的用量为5g，浓缩后最后定容至500ul。第四步取第三步中的浓縮液用于气相色谱质谱联用测定。 所取浓縮液迸样体积为1 5ul，优选2ul。所述用于气相色谱质谱联用测定的条件为色谱柱选择中等极性或非极性色谱柱中的一种，电离方式为El源电离，电离电压为70eV ，离子源温度在 220 250°C ，迸样口温度在250 °C 280 °C。 实施例1取-20 "C保存的3份尿样，分别标记为1、 2、 3号，自然解冻后离心，分 别同时进行以下实验操作步骤吸取10 ml尿样于萃取瓶中，加5%NaOH 200ul， 3 g氯化钠，再加入10ml乙酸乙酯进行萃取，1500rpm蜗旋5min， 3000rpm离心 4min，吸出有机相，加入5g无水硫酸钠除水后，常温常压下用氮气浓缩，浓缩 后最后定容至500ul进样分析。取lul反应液用于气相色谱质谱联用测定。GC/MS 条件为采用DB-5ms柱，EI离子源，电压为70eV，离子源温度为230°C,进 样口温度为280 T。采用SIM方式采集实验结果。结果如附图l、 2、 3所示。 图1为1号尿样SIM色谱图，从中同时分析出了三甲基氯化锡和氯丙嗪。图2 为2号尿样SIM色谱图，从中分析出了氯丙嗪。图3为3号尿样SIM色谱图， 从中分析出了三甲基氯化锡。本方法可用于人体尿液中三甲基氯化锡的检测，也可以用于人体尿液中氯 丙嗪的检测，还可以用于同时检测人体尿液中三甲基氯化锡和氯丙嗪。通过对 人体样本的检测，反映个体的三甲基氯化锡和氯丙嗪的内暴露情况，可以预防 三甲基氯化锡和氯丙嗪这两种环境污染物对人造成的危害和疾病，从而说明个 体的环境污染物接触情况，提示个体改善生活习惯方式，减少污染物的接触， 提高健康水平。同时本方法还可以作为环境监测的指标，来对人们的居住环境 进行评价。权利要求1. ，其特征在于，包括以下步骤第一步，将收集的尿液离心后保存；第二步，取第一步得到的尿液，加入氢氧化钠和氯化钠，再加入乙酸乙酯，蜗旋，离心进行萃取；第三步，吸出有机相，加入无水硫酸钠除水，常温常压下用氮气浓缩；第四步取第三步中的浓缩液用于气相色谱质谱联用测定。2. 如权利要求l所述的，其 特征是，第一步中，所述尿液离心后保存的温度为-20 °C 。3. 如权利要求l所述的，其 特征是，第二步中，所述取尿液的体积为10ml，所述氢氧本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测人体尿液中三甲基氯化锡和氯丙嗪的方法，其特征在于，包括以下步骤：　第一步，将收集的尿液离心后保存；　第二步，取第一步得到的尿液，加入氢氧化钠和氯化钠，再加入乙酸乙酯，蜗旋，离心进行萃取；　第三步，吸出有机相，加入无水硫 酸钠除水，常温常压下用氮气浓缩；　第四步：取第三步中的浓缩液用于气相色谱质谱联用测定。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴鸳鸯，陈枢青，
申请(专利权)人：陈枢青，施卫星，柳志明，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]