粘液玫瑰单胞菌活菌制剂及胞外多糖在制备用于缓解UVB导致的皮肤损伤的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种皮肤共生菌粘液玫瑰单胞菌活菌制剂在缓解UVB导致的皮肤损伤中的应用，并进一步提出了基于其制备得到的胞外多糖在UVB导致的皮肤损伤中的应用。结果表明，在UVB引起角质形成细胞炎症模型中，粘液玫瑰单胞菌DL

【技术实现步骤摘要】
粘液玫瑰单胞菌活菌制剂及胞外多糖在制备用于缓解UVB导致的皮肤损伤的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及医药
，具体涉及一种皮肤共生菌粘液玫瑰单胞菌活菌制剂及胞外多糖在制备用于缓解UVB导致的皮肤损伤的药物中的应用。

技术介绍

[0002]随着大气污染逐年加重，臭氧层遭到严重破坏，辐射到地球表面紫外线显著增加，影响人们的生活质量。日光中UVB可以引起日晒伤、色沉和皮肤鳞状细胞癌等一系列皮肤病。皮肤上角质形成细胞(HaCaT)是表皮的主要组成细胞，HaCaT细胞是UVB在表皮的主要作用靶点，UVB几乎全部被HaCaT细胞吸收，可以诱导HaCaT细胞产生过量的活性氧(ROS)，破坏自身抗氧化防御系统，引起脂质过氧化反应，影响相关信号传导通路，损伤细胞结构或功能。UVB辐照会促使其分泌白细胞介素
‑
6(IL
‑
6)和白细胞介素
‑
1β(IL
‑
1β)等多种炎症因子介导炎症反应，调节免疫应答以及诱导细胞凋亡等细胞生理活动，继而造成皮肤不良表现，如红斑、红肿、松弛、干燥、脱屑，并出现色素沉着等。

技术实现思路

[0003]专利技术目的：为了解决UVB导致的皮肤损伤的问题，本专利技术提供了一种皮肤共生菌粘液玫瑰单胞菌(R.mucosa)活菌制剂和胞外多糖在制备用于缓解UVB导致的皮肤损伤的药物中的应用。
[0004]本专利技术进一步提供了粘液玫瑰单胞菌活菌制剂和胞外多糖的制备方法。
[0005]本专利技术更进一步地提供了皮肤共生菌粘液玫瑰单胞菌活菌制剂和胞外多糖在缓解UVB导致的HaCaT细胞和小鼠急性背部损伤的炎症因子转录水平检测和病理生理状态的作用。
[0006]具体地，本专利技术提出了粘液玫瑰单胞菌活菌制剂在制备用于缓解UVB导致的皮肤损伤的药物中的应用，所述粘液玫瑰单胞菌活菌制剂通过如下方法制备得到：将粘液玫瑰单胞菌接种于R2A培养基中，25
‑
37℃活化12
‑
24h，将活化的粘液玫瑰单胞菌转接于发酵培养基中，30
‑
37℃培养24
‑
36h得到发酵液，将发酵液离心后将菌体重悬于给药溶剂后即得活菌制剂；其中，所述给药溶剂为丙三醇、丙二醇中的任意一种。
[0007]所述粘液玫瑰单胞菌分类号为粘液玫瑰单胞菌(Roseomonas mucosa，亦记为R.mucosa)，菌株号为DL
‑
1已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2022年10月26日，保藏编号为CGMCC No.25967。该菌株是专利技术人于2021年11月从健康人皮肤筛选得到的皮肤共生菌菌株。
[0008]其中，R2A培养基组分为：酵母浸出粉0.5g/L，蛋白胨0.5g/L，酪蛋白水解物0.5g/L，葡萄糖0.5g/L，可溶性淀粉0.5g/L，磷酸氢二钾0.3g/L，无水硫酸镁0.024g/L，丙酮酸钠0.3g/L，琼脂15.0g/L，pH值7.2。
[0009]优选地，所述发酵培养基配方如下：碳源10
‑
100g/L，氮源1
‑
30g/L，无机盐0.01
‑
50g/L，pH5.0
‑
9.0，所述溶剂为水。
[0010]其中，所述碳源为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、木糖、果糖、乳酸、柠檬酸、甘油、淀粉和糖蜜中的任意一种几种的组合，优选为蔗糖、葡萄糖、乳糖、柠檬酸和淀粉中的任意一种或几种的组合；所述氮源为酵母浸粉、牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、玉米浆、豆饼粉、棉籽饼粉、尿素、(NH4)2SO4、NH4Cl、(NH4)2HPO4和NH4NO3中的任意一种或几种的组合，优选为蛋白胨、酵母浸粉、玉米浆、(NH4)2SO4、NH4Cl、(NH4)2HPO4和NH4NO3中的任意一种或几种的组合；所述无机盐为氯化钠、硫酸盐、磷酸盐、磷酸二氢盐、磷酸氢二盐和盐酸盐中的任意一种或几种的组合。
[0011]在一个优选的实施方式中，发酵培养基组分为胰蛋白胨17.0g/L，大豆蛋白胨3.0g/L，氯化钠5.0g/L，磷酸氢二钾2.5g/L，葡萄糖2.5g/L，pH值7.3。
[0012]所述活菌制剂中粘液玫瑰单胞菌活菌数为1
×
106‑1×
109CFU/mL。
[0013]优选地，粘液玫瑰单胞菌活菌数为1
×
105‑1×
107CFU/mL；更优选地，粘液玫瑰单胞菌活菌数为1
×
105‑1×
106CFU/mL。
[0014]研究结果表明，所述粘液玫瑰单胞菌活菌制剂降低UVB照射导致的HaCaT细胞的氧化应激水平和细胞凋亡。
[0015]所述粘液玫瑰单胞菌活菌制剂改善UVB辐照诱导的C57BL/6小鼠背部皮肤皮损，包括红斑、水肿、渗出及结痂，抑制UVB辐照引起的背部皮损处的角质形成细胞凋亡，并降低皮损处炎症因子转录水平。
[0016]本专利技术进一步提出了粘液玫瑰单胞菌胞外多糖在制备用于缓解UVB导致的皮肤损伤的药物中的应用，所述粘液玫瑰单胞菌胞外多糖通过如下方法制备得到：将粘液玫瑰单胞菌CGMCC 25967接种于R2A培养基中，25
‑
37℃活化12
‑
24h，将活化的粘液玫瑰单胞菌转接于发酵培养基中，30
‑
37℃培养24
‑
36h得到发酵液，将发酵液经除菌、除蛋白、无水乙醇沉淀、DEAE离心交换树脂分离纯化得到胞外多糖。
[0017]具体地，通过3000
‑
5000rpm离心10min除菌，加入1/2体积的sevage试剂除蛋白3次后，加入1倍体积无水乙醇后在4℃过夜得到胞外多糖粗糖沉淀，利用去离子水复溶后，通过DEAE
‑
52分离纯化后进行冻干干燥得到胞外多糖(后文R.mucosa DL
‑
1EPS，DL
‑
EPS均具有相同含义)。
[0018]所述胞外多糖的重均分子量为3000
‑
3500Da，其单糖组成包含阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、核糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、甘露糖醛酸和古罗糖醛酸。
[0019]在一些具体的实施方式中，所述胞外多糖的单糖组成为：阿拉伯糖：鼠李糖：半乳糖：葡萄糖：木糖：甘露糖：核糖：半乳糖醛酸：葡萄糖醛酸：甘露糖醛酸：古罗糖醛酸＝0.50～0.6:1.3～1.5:1.3～2:72
‑
78:4
‑
7:9
‑
11:0.9
‑
1.1:0.5
‑
2.4:0.6
‑
1.4:0.6
‑
1.4:0.9
‑
1.7。
[0020]本申请研究发现，粘液玫瑰单胞菌胞外多糖在缓解UVB引起的相关疾病、光老化和晒后修复中同样具本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.粘液玫瑰单胞菌活菌制剂在制备用于缓解UVB导致的皮肤损伤的药物中的应用，所述粘液玫瑰单胞菌活菌制剂通过如下方法制备得到：将粘液玫瑰单胞菌接种于R2A培养基中，25
‑
37 ℃活化12
‑
24 h，将活化的粘液玫瑰单胞菌转接于发酵培养基中，30
‑
37 ℃培养24
‑
36 h得到发酵液，将发酵液离心后将菌体重悬于给药溶剂后即得活菌制剂；所述粘液玫瑰单胞菌分类号为粘液玫瑰单胞菌（Roseomonas mucosa），菌株号为DL
‑
1，已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2022年10月26日，保藏编号为CGMCC No. 25967。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述活菌制剂中粘液玫瑰单胞菌活菌数为1
×
106‑1×
10
9 CFU/mL。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述粘液玫瑰单胞菌活菌制剂降低UVB照射导致的HaCaT细胞的氧化应激水平和细胞凋亡。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述粘液玫瑰单胞菌活菌制剂改善UVB辐照诱导的C57BL/6小鼠背部皮肤红斑、水肿、渗出及结痂，抑制UVB辐照引起的背部皮损处的角质形成细胞凋亡，并降低皮损处炎症因子转录水平。5.粘液玫瑰单胞菌胞外多糖在制备用于缓解UVB导致的皮肤损伤的药物中的应用，所述粘液玫瑰单胞菌胞外多糖通过如下方法制备得到：将粘液玫瑰单胞菌接种于R2A培养基中，25
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【专利技术属性】
技术研发人员：陆前进，詹伊婧，梁金宇，周丝雨，
申请(专利权)人：中国医学科学院皮肤病医院中国医学科学院皮肤病研究所，
类型：发明
国别省市：