本发明专利技术提供一种红树莓的组织培养与快速繁殖方法，它以红树莓的茎尖或带芽茎段作为外植体，在诱导培养基中直接诱导培养产生芽丛，再在增殖培养基中交替进行增殖培养出所需量的芽丛后，经生根培养后，直接放入育苗袋移栽，获得了红树莓种苗。本发明专利技术之方法高效、快速，无需通过采集大量外植体来获得无菌苗，通过各培养阶段的激素调节，采取激素混用和轮用，达到提高增殖率和减少变异的目的，省去了组培苗营养钵移栽的环节，提高移栽成活率，成活种苗便于运输，种植时，摘去育苗袋后直接栽种即可，完全实现了红树莓优良品种种苗的规模化和标准化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种植物的组织培养及繁殖方法，尤其是红树莓的组织培养与快速繁殖方法，属于植物栽培
技术介绍
红树莓为蔷薇科，悬钩子属灌木性果树，植株高1 2m，浆果较大，果实为红色或 橙色。红树莓果实营养丰富、柔软多汁、香味独特、色泽鲜艳，适宜加工成果汁、果酱及天然 色素等高档产品。红树莓常规的繁殖方法有分根法、分株法、扦插法和压条法等。但上述繁 殖方法繁殖速度慢，对母本材料要求高，用量大，还受到季节的限制，难以进行规模化、标准 化生产和优良品种的大面积推广。此外，目前运用组织培养方法繁殖生产种苗的方法成本 较高、培养周期较长。因此，需要寻找一套新的成本低、时间短、成活率高的无性繁殖体系来 扩大红树莓繁殖量，进行红树莓苗木的产业化生产，以满足市场需求。
技术实现思路
针对红树莓现有育苗技术存在的缺陷或不足，本专利技术的目的在于提供一种红树莓 的组织培养与快速繁殖方法，以适宜大规模生产优质种苗。 本专利技术以红树莓茎段为外植体，并在本专利技术提供的培养基中进行无菌苗诱导和增 殖培养，从而建立无菌快繁体系和无菌苗移栽体系，并在无菌体系中提高增殖率和生根率， 以縮短培养周期，降低成本，达到种苗快速繁殖和生产要求。 本专利技术通过下列技术方案完成一种，其特征 在于包括下列工艺步骤 A、将经过消毒灭菌处理过的红树莓外植体，即红树莓的茎尖或带芽茎段，接种到 下列诱导培养基中<table>table see original document page 4</column></row><table>在光照强度为1500 20001x，温度为20 27。C，光周期为8 10h/d培养条件 下，培养至外植体萌发叶分化成芽丛，切下芽丛，而外植体继续在诱导培养基中，诱导培养 至长出新芽丛切下，如此反复诱导培养，以25 35天为周期转接继代一次； B、将A步骤切下的芽丛依次轮回转接至下列增殖培养基I和II中 增殖培养基I: MS培养基 糖 30 40g/L 琼脂 BA 磁 pH5 0. 5 0. 2 5. 87g/L 1. Omg/L 0. 3mg/L 6. 0增殖培养基II MS培养基 糖 30'琼脂 BA 磁 pH40g/L 5 7g/L 1. 0 1. 5mg/L 0. 1 0. 2mg/L 5. 8 6. 0并在光照强度为1500 20001x，温度为20 27°C ，光周期为8 10h/d培养条件 下，进行增殖培养，且在增殖培养基I和II中，分别每25 30天继代一次，得增殖倍数为 2. 5 3的芽丛，如此反复进行增殖培养至所需数量的芽丛，并使芽丛上的芽苗长至高2 3cm、具2 3节，切下； C、将B步骤切下的芽苗分成单株，接种到下列生根培养基中，在光照强度为 20001x，温度为20 27t:，光周期为8 10h/d培养条件下，生根培养至芽苗长大1500并生根 1/2MS培养基 糖 3040g/L 琼脂 5 7g/LIAA 0. 1 0. 2mg/LNAA 0. 3 0. 5mg/LpH 5. 8 6. 0 ;D、将上述C步骤的生根苗移至室外散射光下锻炼6 10天后，取出生根苗，用清 水将苗上培养基洗净，放入质量浓度为0. 1%的多菌灵溶液中消毒1 2分钟，移栽至装有下列质量比基质的育苗袋中腐殖土 红土= i : 1，其中该混合基质中含有质量比为4 7%的珍珠岩，即得红树莓种苗。 所述A步骤的对红树莓外植体进行消毒灭菌处理为在无菌超净台中，将经常规 方法用洗涤剂清洗过的2 3cm茎尖或带芽茎段，依次在体积浓度为70% 75%的酒精中 消毒处理30 60秒，再在质量浓度为0. 1 %的HgCl2中灭菌处理6 10分钟，最后在体积 浓度为1. 5% 2%的次氯酸钠溶液中消毒处理15 20分钟，之后用无菌水漂洗2 3次， 即可。 所述酒精、HgCl2、次氯酸钠溶液、无菌水、多菌灵均为市购的常规产品。 本专利技术在研究红树莓的组培与快繁方法的过程中，通过选择红树莓带芽茎段和茎尖为外植体，直接诱导产生芽丛，并利用不同的增殖培养基进行交替培养，同时采取加快转接速度及直接放入育苗袋移栽等技术措施，获得了红树莓种苗高效快速繁殖和生产的效果。其优越性体现在 1、提供红树莓离体组培快繁的成套技术，实现了红树莓种苗的规模化、标准化生5产。 2、用带芽茎段和茎尖作为外植体，并对该外植体进行反复多次诱导，获得大量芽 丛，再经增殖培养、生根培养、炼苗移栽，获得大量种苗，无需通过采集大量外植体来获得无 菌苗。 3、进行不同培养阶段的激素调节，采取激素混用和轮用，达到提高增殖率和减少 变异的目的。 4、无菌生根苗直接移栽到育苗袋中，省去了组培苗营养钵移栽的环节，提高移栽 成活率，成活种苗便于运输，种植时，摘去育苗袋后直接栽种即可。具体实施例方式以下结合实施例对本专利技术作进一步的详细描述。 实施例1 1、外植体灭菌采集红树莓幼嫩枝条，切成2cm长的带芽小段，用洗衣粉水清洗 后，在无菌超净台中用体积浓度为75%的酒精，对其表面消毒30秒，然后用质量浓度为 0. 1%的HgCl2灭菌6分钟，之后在体积浓度为2%的次氯酸钠溶液中消毒15分钟，最后用 无菌水漂洗3次； 2、不定芽诱导培养将经过上述1步骤消毒灭菌的上述外植体在无菌工作环境中 接种于下列诱导培养基中MS培养基+BA 1. 0mg/L+NAA 0. lmg/L+糖30g/L+琼脂5g/L， pH 5. 8，在光照强度为15001x，培养温度为20°C ，光周期为8h/d的培养条件下培养18天，有 35%的外植体无污染且长出有叶芽丛，切下芽丛；切去新生芽丛的外植体继续在上述诱导 培养基中，并在上述培养条件下培养15天，有85%的外植体长出第二代有叶芽丛，切下芽 丛；如此反复培养外植体，使之诱导生成新芽丛，每33天继代转接一次，使之达到生产所需 的种源数量； 3、增殖培养将上述2步骤切下的芽丛置于下列增殖培养基I中MS培养基+BA 0. 5mg/L+NAA 0. 3mg/L+糖30g/L+琼脂5g/L， pH 5. 8，在光照强度为15001x，培养温度为 2(TC，光周期为8h/d的培养条件下，进行增殖培养25天，转接至下列增殖培养基II中MS 培养基+BA 1. Omg/L+NAAO. lmg/L+糖30g/L+琼脂5g/L， PH 5. 8，在光照强度15001x，培养 温度20°C ，光周期8h/d的条件下，培养25天，得增殖倍数为2. 5的芽丛，再将所得芽丛切下 分开并依次转接到上述增殖培养基I和II中，在与上述相同天数，相同培养条件下，进行增 殖培养，得增殖倍数为2. 5的芽丛，如此反复交替在增殖培养基I和II中，增殖培养至所需 芽丛数量，并使芽丛长成2节、高2cm的芽苗，切下； 4、生根培养将上述3步骤切下的芽苗分成单株接种到下列生根培养基中1/2MS 培养基+IAA 0. 2mg/L+NAA 0. 3mg/L+糖30g/L+琼脂5g/L， pH 5. 8，在光照强度15001x，培 养温度2(TC，光周期8h/d的条件下培养30天，得长高长壮的生根苗； 5、炼苗和移栽将上述4步骤的生根本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种红树莓的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于包括下列工艺步骤： Ａ、将经过消毒灭菌处理过的红树莓外植体－－即红树莓的茎尖或带芽茎段，接种到下列诱导培养基中： ＭＳ培养基糖 ３０～４０ｇ／Ｌ 琼脂 ５～７ｇ／ＬＢＡ ０．５～１．５ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ ０．１～０．３ｍｇ／Ｌ ｐＨ ５．８～６．０ 在光照强度为１５００～２０００ｌｘ，温度为２０～２７℃，光周期为８～１０ｈ／ｄ培养条件下，培养至外植体萌发叶分化成芽丛，切下芽丛，而外植体继续在诱导培养基中，反复诱导培养至长出新芽丛，以２５～３５天为周期转接继代一次； Ｂ、将Ａ步骤切下的芽丛依次转接至下列增殖培养基Ⅰ和Ⅱ中： 增殖培养基Ⅰ： ＭＳ培养基 糖 ３０～４０ｇ／Ｌ 琼脂 ５～７ｇ／Ｌ ＢＡ ０．５～１．０ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ ０．２～０．３ｍｇ／Ｌ ｐＨ ５．８～６．０增殖培养基Ⅱ： ＭＳ培养基 糖 ３０～４０ｇ／Ｌ 琼脂 ５～７ｇ／Ｌ ＢＡ １．０～１．５ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ ０．１～０．２ｍｇ／Ｌ ｐＨ ５．８～６．０ 并在光照强度为１５００～２０００ｌｘ，温度为２０～２７℃，光周期为８～１０ｈ／ｄ培养条件下，进行增殖培养，且在增殖培养基Ｉ和ＩＩ中，分别每２５～３５天继代一次，得增殖倍数为２．５～３的芽丛，如此反复进行增殖培养至所需数量的芽丛，并使芽丛长成２～３节、高２～３ｃｍ的芽苗，切下； Ｃ、将Ｂ步骤切下的芽苗分成单株，接种到下列生根培养基中，在光照强度为１５００～２０００ｌｘ，温度为２０～２７℃，光周期为８～１０ｈ／ｄ培养条件下，生根培养至芽苗长大并生根： １／２ＭＳ培养基 糖 ３０～４０ｇ／Ｌ 琼脂 ５～７ｇ／Ｌ ＩＡＡ ０．１～０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ ０．３～０．５ｍｇ／Ｌ ｐＨ ５．８～６．０； Ｄ、将上述Ｃ步骤的生根苗移至室外散射光下锻炼６～１０天后，取出生根苗，用清水将苗上培养基洗净，放入质量浓度为０．１％的多菌灵溶液中消毒１～２分钟，移栽至装有下列基质的育苗袋中：腐殖土∶红土＝１∶１质量比的基质中，该基质中混合有质量比为４～７％的珍珠岩，即得红树莓种苗。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张倩，杨春梅，赵培飞，汪国鲜，吴丽芳，
申请(专利权)人：云南省农业科学院花卉研究所，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]
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