一种基于Cu3(HHTP)2的纳米片夹心型电化学发光免疫传感器的制备及应用制造技术

一种基于Cu3(HHTP)2的纳米片夹心型电化学发光免疫传感器的制备及应用，涉及免疫传感器领域，该制备方法包括：S1：制备Ru@Cu3(HHTP)2纳米片；S2：制备BSA封闭的Ru@Cu3(HHTP)2‑

【技术实现步骤摘要】
一种基于Cu3(HHTP)2的纳米片夹心型电化学发光免疫传感器的制备及应用


[0001]本专利技术涉及免疫传感器领域，具体的说是一种基于Cu3(HHTP)2的纳米片夹心型电化学发光免疫传感器的制备及应用。

技术介绍

[0002]C
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反应蛋白(CRP)是与身体炎症有关的关键性标志物，血清中CRP水平与多种复杂的慢性疾病密切相关，因此定量检测CRP具有重大的意义。CRP的异常表达与心血管疾病、阿尔茨海默症、肺癌等有密切联系，因此在低丰度水平上实现CRP的灵敏测定对于精确评估临床疾病至关重要。
[0003]目前血清中CRP的检测主要基于免疫学原理；临床常用的检测方法有免疫浊度法和比浊法，以及酶联免疫吸附、荧光、放射等方法。由于上述方法普遍不够敏感，耗时长，容易产生假阴性结果或者成本高，效益低,并且操作繁琐、仪器庞大、不适合于冠心病潜在人群的现场筛查。
[0004]免疫传感器具有成本低，灵活性强和高灵敏度，快速和便携等优点，最具发展前景，在临床类样品检测中应用越来越广泛。目前报道的夹心法型酶联免疫传感器常用辣根过氧化物酶做标记物，存在易失活,实验条件苛刻,不易保存,制备困难,成本高等缺点，无法满足现场检测的需要。
[0005]本申请以Ru@Cu3(HHTP)2为供体，GO
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Au为受体实现电化学发光共振能量转移(ECL
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RET)，并以此能量转移机制构筑电化学发光免疫传感器，实现对C
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反应蛋白的高灵敏分析。
专利技术内容
[0006]本专利技术旨在提供一种基于Cu3(HHTP)2的纳米片夹心型电化学发光免疫传感器的制备及应用，以对C
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反应蛋白进行高灵敏度的检测。
[0007]为了解决以上技术问题，本专利技术采用的具体方案为：一种基于Cu3(HHTP)2的纳米片夹心型电化学发光免疫传感器的制备方法，包括以下步骤：
[0008]S1：制备Ru@Cu3(HHTP)2纳米片；将Cu(CO2CH3)2·
H2O和HHTP分别溶于甲醇中，混合、离心处理得到Cu3(HHTP)2纳米片，再加入Ru(bpy)3Cl2水溶液得到Ru@Cu3(HHTP)2纳米片；
[0009]S2：制备BSA封闭的Ru@Cu3(HHTP)2‑
Ab1生物偶联物；将步骤S1得到的Ru@Cu3(HHTP)2纳米片分散在水中，加入APTES交联反应，再加入Ab1溶液，离心处理，加入BSA溶液，得到BSA封闭的Ru@Cu3(HHTP)2‑
Ab1生物偶联物，备用；
[0010]S3：制备GO
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Au纳米复合体；将Au NPs加入GO@PEI溶液中，搅拌、离心处理得到GO
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Au纳米复合体；
[0011]S4：制备BSA封闭的GO
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Au
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Ab2生物偶联物；将步骤S3制备的GO
‑
Au纳米复合体分散在PBS中得到GO
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Au悬液；加入Ab2溶液，离心处理，再加入BSA溶液，得到BSA封闭的GO
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Au
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Ab2生物偶联物，备用；
[0012]S5：制备基于Cu3(HHTP)2的纳米片夹心型电化学发光免疫传感器；将BSA封闭的Ru@Cu3(HHTP)2‑
Ab1缓慢滴在工作电极上；干燥后再将不同浓度的CRP抗原置于工作电极上识别并结合到已与Ru@Cu3(HHTP)2偶联的Ab1，将BSA封闭的GO
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Au
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Ab2生物偶联物作为ECL猝灭剂添加到涂有CRP抗原和Ru@Cu3(HHTP)2‑
Ab1的工作电极上；用缓冲溶液洗脱未结合的GO
‑
Au
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Ab2，完成工作电极的制备，再将制备完成的工作电极装配在免疫传感器上，即制得所述基于Cu3(HHTP)2的纳米片夹心型电化学发光免疫传感器。
[0013]作为上述技术方案的进一步优化，步骤S1具体为：S101：将Cu(CO2CH3)2·
H2O溶解于甲醇中，制得溶液Ⅰ；将HHTP溶于甲醇中制得溶液Ⅱ；将溶液Ⅰ和溶液Ⅱ混合，热反应、离心处理得到Cu3(HHTP)2纳米片；S102：将Cu3(HHTP)2纳米片真空干燥制得Cu3(HHTP)2粉末；S103：将Cu3(HHTP)2粉末分散在水中并注入Ru(bpy)3Cl2水溶液，油浴后离心、冻干处理处理得到Ru@Cu3(HHTP)2纳米片。
[0014]作为上述技术方案的进一步优化，步骤S101中，将溶液Ⅰ和溶液Ⅱ混合混合在圆底烧瓶中，磁搅拌10min后，将混合物缓慢加入到聚四氟乙烯高压釜中，65℃下保存24h，溶剂热反应后，离心得到Cu3(HHTP)2纳米片。
[0015]作为上述技术方案的进一步优化，步骤S2具体为：S201：将步骤S1制得的Ru@Cu3(HHTP)2纳米片分散在水中，加入APTES，油浴、离心处理得到表面负载APTES的Ru@Cu3(HHTP)2纳米片；S203：将表面负载APTES的Ru@Cu3(HHTP)2纳米片与GA作为交联剂混合，以使连接在Ru@Cu3(HHTP)2纳米片表面的APTES氨基激活；S204：将APTES氨基激活的Ru@Cu3(HHTP)2纳米片在PBS中分散，加入Ab1溶液，离心处理，得到Ru@Cu3(HHTP)2‑
Ab1生物偶联物；S205：将Ru@Cu3(HHTP)2‑
Ab1生物偶联物溶解在PBS中，加入BSA溶液，以将Ru@Cu3(HHTP)2‑
Ab1表面残留的非特异性活性位点封闭，即制得BSA封闭的Ru@Cu3(HHTP)2‑
Ab1。
[0016]作为上述技术方案的进一步优化，步骤S3具体为：S301：将HAuCl4·
4H2O溶液加入水中，加热至沸腾后加入还原剂，搅拌、冷却、离心处理得到Au NPs；S302：将PEI溶液加入到GO溶液中，搅拌、离心处理得到GO@PEI；S303：将Au NPs加入GO@PEI溶液中，搅拌、离心处理得到GO
‑
Au纳米复合体。
[0017]作为上述技术方案的进一步优化，步骤S302具体为：将PEI溶液加入到GO溶液中，然后在60℃下搅拌12h，通过离心和洗涤得到GO@PEI，并在水中进一步分散，得到GO@PEI溶液中。
[0018]作为上述技术方案的进一步优化，步骤S4具体为：S401：将步骤S3制备的GO
‑
Au纳米复合体分散在PBS中得到GO
‑
Au悬液；S402：将EDC和NHS组成的偶联液加入到GO
‑
Au悬液中以活化分布在GO
‑
Au表面的羧基；S403：将Ab2溶液引入羧基活化的GO
‑
Au中，离心处理得到GO
‑
Au
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Ab2生物偶联物；S404：将本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
(HHTP)2‑
Ab1表面残留的非特异性活性位点封闭，即制得BSA封闭的Ru@Cu3(HHTP)2‑
Ab1。5.根据权利要求1所述的一种基于Cu3(HHTP)2的纳米片夹心型电化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤S3具体为：S301：将HAuCl4·
4H2O溶液加入水中，加热至沸腾后加入还原剂，搅拌、冷却、离心处理得到Au NPs；S302：将PEI溶液加入到GO溶液中，搅拌、离心处理得到GO@PEI；S303：将Au NPs加入GO@PEI溶液中，搅拌、离心处理得到GO
‑
Au纳米复合体。6.根据权利要求1所述的一种基于Cu3(HHTP)2的纳米片夹心型电化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤S302具体为：将PEI溶液加入到GO溶液中，然后在60℃下搅拌12h，通过离心和洗涤得到GO@PEI，并在水中进一步分散，得到GO@PEI溶液中。7.根据权利要求1所述的一种基于Cu3(HHTP)2的纳米片夹心型电化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤S4具体为：S401：将步骤S3制备的GO
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Au纳米复合体分散在PBS中得到GO
‑
Au悬液；S402：将EDC和NHS组成的偶联液加入到GO
‑
Au悬液中以活化分布在GO
‑
Au表面的羧基；S403：将Ab2溶液引入羧基活化的GO
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Au中，离心处理得到GO
‑
Au
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Ab2生物偶联物；S404：将GO
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Au
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Ab2生物偶联物在PBS中分散，加入BSA以封闭GO
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【专利技术属性】
技术研发人员：崔晨，吕杰，
申请(专利权)人：河南工业大学，
类型：发明
国别省市：