本发明专利技术涉及一种提高烟叶质量的生物菌剂，属生物技术领域。该生物菌剂由如下工序制备：ａ．生产菌株为臭曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｏｅｔｉｄｕｓ）Ｇ０１，ＣＧＭＣＣ Ｎ０．２８５１；ｂ．将Ｇ０１菌株接种到试管斜面培养基上，培养基配方为葡萄糖１％、蛋白胨０．５％、ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］ １％、ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ ０．５％、琼脂２％、氯霉素０．１％、虎红钠盐０．０３％、ｐＨ ７．０，３０℃恒温培养２天，获得试管种子；ｃ．将试管种子接种到５００ｍｌ三角瓶液体培养基中，每瓶装２００ｍｌ，液体发酵培养基配方为葡萄糖０．７～１％、蛋白胨０．３～０．５％、ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］ ０．５～１％、ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ０．５％、氯霉素０．１％、虎红钠盐０．０３％、ｐＨ ７．０，于３０～３２℃摇床培养，培养时间３～５天，转速为１５０～２００ｒ／ｍｉｎ，当菌浓度为每ｍｌ活菌数≥１０↑［７］得到液体生物制剂。本发明专利技术的生物制剂具有能降低烟叶糖含量、提高钾含量，从而提高烟叶质量的优点，能广泛应用于烟叶的种植。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种提高烟叶质量的生物菌剂，属生物
技术介绍
烟叶糖含量偏高、钾含量偏低是影响云南烟叶质量的主要原因之一。降低烟叶糖含 量、增加钾含量是烟草科学研究中最受关注的领域之一。烟叶糖含量除受遗传因素、生 态因素影响外，应用特殊的施肥(施铵态氮肥、施充足的磷钾肥)、烘烤调制(提高湿 度)技术是降低烟叶糖含量的主要途径；增施钾肥是提高烟叶含钾量的主要途径。随着人们对吸烟与健康问题的广泛关注及减少公害、保护环境运动的兴起，烟草业 如何在既能满足消费者的需求，又能减少公害、保护环境上面临严重挑战。目前，提高 烟叶质量，必须适当降低烟叶糖含量、增加含钾量。研究丌发具有实际应用价值的微生 物技术来提高烟叶钾含量、适当降低糖含量，从而提高烟叶质量，具有重要的现实意义 和广阔的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种能提高烟叶质量生物菌剂，为生产优质烟叶提供技 术支持。本专利技术采用的真菌是臭曲霉J^wg/Z/^/oe//^^ G01菌株，保藏单位中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址中国北京市朝阳区北辰西路l号院；保 藏日期2009年1月8日；保藏登记入册的编号CGMCCN0.2851。G01菌株属于土壤真菌，系本专利技术人从大量土壤细菌菌株中筛选出来的，具有显著 提高烟叶质量的能力，经中国农业科学院中国农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC) 进行鉴定，G01菌株为臭曲霉y^/ erg/〃iw /oe/Wus 。本专利技术是这样实现的G01菌株的试管种子培养，摇床扩大培养制备为生物制剂， 将制剂应用于大田植烟土壤中，烟叶成熟调制后测定烟叶含钾量。本专利技术细菌G01菌株的培养方法(以下为重量百分比)1、试管种子培养试管斜面培养基配方为葡萄糖1%、蛋白胨0.5°/。、 KH2P04 1%、 MgS04.7H200.5%、琼脂2%、氯霉素0.1%、虎红钠盐0.03%， pH7.0。将G01菌株接种到试管斜面培养基上，3(TC恒温培养2天，获得试管种子。 2、液体发酵培养液体发酵培养基配方为葡萄糖0.7 1%、蛋白胨0.3 0.5%、 KH2P04 0.5~1%、 MgS04.7H20 0.5%、氯霉素0.1%、虎红钠盐0.03%， pH7.0。将试管种接种子到500ml三角瓶液体培养基中，每瓶装200ml，于30 32。C摇床培 养，培养时间3 5天，转速为150-200 r/min，培养液下摇床后用稀释平板计数法测定菌 悬液浓度，菌浓度为每ml活菌数^107。即得具有提高烟叶含钾量功能的生物制剂。本专利技术生物制剂提高烟叶含钾量功能试验1、 制备生物制剂按前述GOl菌株的培养方法制备试验用制剂；以未接种G01菌 株的液体培养基处理作为对照。2、 生物制剂对烟草处理方法烤烟K326品种(纯氮施用量7克/株，N:P205:K20=1:1:3)，烟苗大田移栽后15天， 将供试菌剂每株浇施100毫升，其余按优质烟生产技术常规管理，烟叶成熟后分叶位采 摘按常规烘烤调制。3、 烟叶钾含量测定方法总糖和还原糖按《烟草及烟草制品水溶性糖的测定连续流动法》YC/T 159-2002 方法测定。总糖(还原糖)含量降低百分率的计算方法为总糖(还原糖)含量降低百分率％=(对照处理烟叶糖含量-制剂处理烟叶糖含量) /对照处理烟叶糖含量xl00烟叶钾含量按《烟草及烟草制品钾的测定火焰光度法》YC/T173 2003方法测定。 烟叶钾含量提高百分率的计算方法为钾含量提高百分率％=(制剂处理烟叶钾含量-对照处理烟叶钾含量)/对照处理烟叶 钾含量x1004、 试验结果表1生物制剂处理烟叶糖和钾含量测定结果叶位处理总糖 (%)还原糖 (%)总氮 (%)烟碱 (%)磷 (%)钾 (%)总糖降低 百分率 %还原糖降 低百分率 %钾提高 百分率％G01菌株 对照14.68 20.24U.35 15.592.53 2.151.54 1.490.217 0.1864.73 4.4227.4725.917.0110G01菌株 对照24.29 31.1721.35 26.802.25 1.951.98 1.670.209 0.1794.40 3.6622.0720.3420.2214G01菌株 对照31.84 35.1825.99 28.142.19 1.931.91 2.070.2U 0.1973.39 2.749.497.6423.724叶位从烟株第一片脚叶往上计数编号。注数据由云南省烟草科学研究所分析测试中心分析。结果表明，生物制剂处理的第5、 10、 14叶位烟叶总糖含量分别比对照降低27.47%、 22.07%、 9.49%，还原糖含量分别比对照降低25.91%、 20.34%、 7.64%，钾含量分别比 对照提高7.01%、 20.22%、 23.72 %，表明本专利技术生物制剂具有降低烟叶糖含量、提高烟 叶钾含量，从而提高烟叶质量。本专利技术的生物制剂具有降低烟叶糖含量、提高烟叶钾含量，从而提高烟叶质量的优 点，能广泛应用于烟叶的种植。具体实施例方式下面用实施例来进一步详述本专利技术，但本专利技术的内容并不局限于此。 实施例h将Apergi/to/oefWw G01菌株接种到试管琼脂斜面上，培养基配方为葡萄糖1%、 蛋白胨0.5%、KH2PO4 l%、MgS04.7H20 0.5%、琼脂2%、氯霉素0.1%、虎红钠盐0.03%、 pH7.0， 3(TC培养恒温培养2天，获得试管种。将试管种接种到500ml三角瓶(每瓶装200ml)液体培养基中，培养基配方为葡萄糖1%、蛋白胨0.5%、KH2PO4 l%、MgS04.7H20 0.5%、氯霉素0.1%、虎红钠盐0.03% ， pH7.0。将接好种的三角瓶于3(TC下摇床(转速为150r/min)培养，培养时间3天，待 菌浓度为达到每ml活菌数^10、寸、，即得具有提高烟叶质量功能的生物制剂。将该生物 菌剂按每株100毫升浇施烟叶，能够降低烟叶糖含量、提高烟叶钾含量，从而提高烟叶 质量。实施例2:基本同实施例一，不同之处在于液体培养基配方，其配方为葡萄糖0.7%、蛋白胨0.3%、 KH2P04 0.5%。将接好种的三角瓶于32。C下摇床(转速为200 r/min)培养， 培养时间5天。实施例3:基本同实施例一，不同之处在于液体培养基配方，其配方为葡萄糖0.8%、蛋白月东0.4%、 KH2P04 0.8%。将接好种的三角瓶于3rC下摇床(转速为180 r/min)培养， 培养时间4天。权利要求1、一种提高烟叶质量的生物菌剂，其特征在于该生物菌剂由生产菌株经试管种子培养、摇床扩大培养工序制备，其特征在于a. 生产菌株为臭曲霉(Aspergillus foetidus)G01，CGMCC N0.2851；b. 试管种子培养将G01菌株接种到试管斜面培养基上，培养基配方为葡萄糖1％、蛋白胨0.5％、KH2PO4 1％、MgSO4.7H2O 0.5％、琼脂2％、氯霉素0.1％、虎红钠盐0.03％，pH 7.0，配方的比例为重量百分比，30℃恒温培养2天，获得试管种子；c. 摇床扩大培养将试管种子接种到500ml三角瓶液体培养基中，每瓶装200ml，液体发酵培养基配方为葡萄糖0.7～1％、蛋白胨0本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种提高烟叶质量的生物菌剂，其特征在于该生物菌剂由生产菌株经试管种子培养、摇床扩大培养工序制备，其特征在于： ａ．生产菌株为臭曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｏｅｔｉｄｕｓ）Ｇ０１，ＣＧＭＣＣ Ｎ０．２８５１； ｂ．试管种子培养：将Ｇ０１菌株接种到试管斜面培养基上，培养基配方为葡萄糖１％、蛋白胨０．５％、ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］ １％、ＭｇＳＯ↓［４］．７Ｈ↓［２］Ｏ ０．５％、琼脂２％、氯霉素０．１％、虎红钠盐０．０３％，ｐＨ ７．０，配方的比例为重量百分比，３０℃恒温培养２天，获得试管种子； ｃ．摇床扩大培养：将试管种子接种到５００ｍｌ三角瓶液体培养基中，每瓶装２００ｍｌ，液体发酵培养基配方为葡萄糖０．７～１％、蛋白胨０．３～０．５％、ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］ ０．５～１％、ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ０．５％、氯霉素０．１％、虎红钠盐０．０３％、ｐＨ７．０，配方的比例为重量百分比，于３０～３２℃摇床培养，培养时间３～５天，转速为１５０～２００ｒｐｍ，当菌浓度为每ｍｌ活菌数≥１０７得到生物制剂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：高家合，李梅云，晋艳，张树锋，
申请(专利权)人：云南省烟草科学研究所，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]
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