β-血影蛋白(SPTBN1)缺乏保护小鼠免于高脂肪饮食诱导的肝病和癌症发展制造技术

本公开提供了在有需要的受试者中治疗肥胖症、非酒精相关脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎或肝细胞癌的方法，所述方法包括施用治疗有效量的至少一种靶向SPTBN1的siRNA分子。效量的至少一种靶向SPTBN1的siRNA分子。效量的至少一种靶向SPTBN1的siRNA分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】β
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血影蛋白(SPTBN1)缺乏保护小鼠免于高脂肪饮食诱导的肝病和癌症发展
[0001]政府支持
[0002]本专利技术是在国家卫生研究所授予的U01 CA230690R01 M023146下由政府支持完成的。政府具有本专利技术的某些权利。
[0003]对以电子方式提交的序列表的引用
[0004]随申请提交的ASCII文本文件中以电子方式提交的序列表(名称：3973_018PC02_Seqlisting_ST25.txt；大小：37,736字节；和创建日期：2021年11月3日)的内容通过引用整体并入本文。


[0005]本公开提供了在有需要的受试者中治疗肥胖症、非酒精相关脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎或肝细胞癌的方法，所述方法包括施用治疗有效量的靶向SPTBN1的siRNA分子。

技术介绍

[0006]非酒精相关脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)由肥胖症和代谢紊乱引起，并且影响高达三分之一的世界人口(1，2)。这些疾病包含一系列疾病，包括肝脏中脂质积聚(脂肪变性)、损伤、炎症、肝细胞气球样变(细胞死亡)和进行性纤维化(肝硬化)，最终导致癌发生(3，4)。肝脏中脂质积聚促进慢性氧化和内质网(ER)应激、细胞死亡、免疫细胞浸润、纤维发生和疾病进展。这些影响因诸如游离脂肪酸(FFA)摄入增加、久坐生活方式和高胰岛素血症等因素而加剧。根据NASH是否在具有或不具有肝硬化的情况下发生，肝癌发病率可在2.4％(不具有肝硬化)至12.8％(具有肝硬化)之间变化(1，3)。肥胖使肝癌死亡的风险增加两倍，并且与NASH一起，导致这种癌症的惊人增加(5，6)。尽管有针对NASH的新的治疗方法，但很少有单一剂逆转纤维化和脂肪变性，因此NASH提出了主要的临床挑战(5，7)。因此，了解集中于异常脂质积聚、纤维化和向肝癌发生的致命转变的分子机制可在易受疾病进展影响的特定群体中找到针对NASH的新方法。
[0007]NAFLD的引发被认为涉及从头脂肪生成，伴有游离脂肪酸、甘油三酯和胆固醇的异常积聚。肝细胞死亡受体途径、肿瘤坏死因子(TNF)和胱天蛋白酶的激活导致NASH中观察到的组织损伤和脂肪性肝炎(8，9)。通过转录因子固醇调节元件(SRE)结合蛋白(SREBP)的激活和能量感应途径(诸如涉及腺苷单磷酸(AMP)激活蛋白激酶(AMPK)的途径)的阻遏来刺激从头脂肪生成。SREBP1是驱动脂肪酸合成并导致肝脂肪变性的主要脂肪生成转录因子(10)。SREBP蛋白通过与蛋白INSIG和SCAP相互作用而保持在内质网中。响应于固醇耗竭或ER应激的SREBP激活需要INSIG的解离和位点1蛋白酶(S1P)对SREBP的SCAP诱导的切割，随后是位点2蛋白酶(S2P)的第二次切割以产生SREBP蛋白的成熟形式，其易位到细胞核中并调节靶基因转录(11)。在具有激活的胱天蛋白酶
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3的应激培养细胞中，SREBP1和SREBP2被胱天蛋白酶
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3切割并激活，但这一过程的生理学背景是未知的(12)。切割的核形式称为n
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SREBP，并且全长ER定位形式称为前体SREBP。
[0008]纤维化程度被认为是NALFD进展为NASH和最终肝细胞癌(HC C)的最强预测因子(1，13，14)。肝纤维化的关键是转化生长因子β(TGF
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β)途径的激活(15，16)。TGF
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β1是这一家族的起始成员，并且这一配体通过激活SMAD转录调节因子的两种丝氨酸
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苏氨酸激酶受体(TGFBR2和TGFBR1)发信号。含有SMAD3的SMAD复合物通过引起过度的细胞外基质基因表达(诸如编码胶原COL1A1、COL1A2、COL3A1、COL5A2、COL6A1和COL6A3的那些)和刺激编码蛋白酶抑制剂金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)和纤溶酶原激活物抑制剂
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1(PAI
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1)的基因而对纤维化进展起关键作用(16)。SMAD3复合物还阻遏编码过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC
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α)的基因(17)。TGF
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β1通过SMAD3的促纤维化作用涉及多种机制和细胞类型，包括组织驻留成纤维细胞的增强的浸润或增殖(或两者)、肌成纤维细胞的产生、上皮
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间充质转化(EMT)的诱导和胶原裂解的抑制(18)。
[0009]SPTBN1(也称为β2
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血影蛋白，β2SP)是在细胞质和细胞核中具有功能的多结构域衔接蛋白(19
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21)。特别地，SPTBN1促进细胞质中SMAD3的TGF
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β受体激活(22)并与细胞核中的SMAD3相互作用以调节特定靶基因(23，24)。SPTBN1是由α和β亚基的两个反平行二聚体组成的动态四聚体蛋白质。SPTBN1结合配偶体包括锚蛋白和层粘连蛋白以及染色质调节剂CTCF(CCCTC结合因子)，所述锚蛋白发挥功能以将细胞膜上的蛋白质连接到含有血影蛋白的细胞骨架上，所述层粘连蛋白和染色质调节剂CTCF在细胞核中发挥功能以组织染色质并调节基因表达(19，23，25，26)。SPTBN1是胱天蛋白酶3和7的底物，并且在SPTBN1 1454DEVD1457肽序列处的切割产生两个片段(160和80kDa)，在细胞凋亡和转录中具有不同和单独的功能(27)。SPTBN1在肝病中的重要性源于发现用靶向SPTBN1的shRNA治疗的小鼠表现出较少的对乙酰氨基酚诱导的肝毒性(27)。
[0010]在约40％的HCC中观察到肝SMAD3和SPTBN1以及与促纤维化途径相关的TGF
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β途径成员的量增加，并且许多HCC与NASH相关(24，28)。

技术实现思路

[0011]本公开提供了在有需要的受试者中治疗疾病、病症或病状例如肥胖症、非酒精相关脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎或肝细胞癌的方法，所述方法包括施用治疗有效量的至少一种抑制SPTBN1表达的siRNA分子。
具体实施方式
[0012]通过产生肝特异性SPTBN1条件性敲除(LSKO)小鼠研究SPTBN 1在肝肿瘤发生中的作用。显示通过涉及降低促纤维化基因和参与从头脂肪生成的基因的表达的机制来保护LSKO小鼠或用靶向SPTBN 1的siRNA治疗的小鼠免受高脂肪饮食的有害影响。小鼠没有变得肥胖或发展为NASH或HCC。通过分析SPTBN1在人NASH和HCC中的表达并发现靶向SPTBN1的siRNA逆转了在NASH的人3D培养模型中诱导的涉及脂肪酸代谢和纤维化的基因中的转录变化，证实了结果的翻译重要性。因此，结果鉴定了SPTBN1响应高脂肪饮食(HFD)引起的应激病状在调节胱天蛋白酶
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3诱导的SREBP活性中的先前未知作用。
[0013]在一个实施方案中，本公开提供了在有需要的受试者中治疗肥胖症、非酒精相关脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎或肝本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种在有需要的受试者中治疗肥胖症、非酒精相关脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎或肝细胞癌的方法，所述方法包括施用治疗有效量的至少一种抑制SPTBN1表达的siRNA分子。2.如权利要求1所述的方法，其中抑制SPTBN1表达的所述siRNA分子中的至少一种包含15至30个核苷酸。3.如权利要求2所述的方法，其中抑制SPTBN1表达的所述siRNA分子中的至少一种包含15至20个核苷酸。4.如权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中抑制SPTBN1表达的所述siRNA分子中的至少一种包含1至6个核苷酸的悬突区域。5.如权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中抑制SPTBN1表达的所述siRNA分子中的至少一种不包含悬突区域。6.如权利要求1所述的方法，其中抑制SPTBN1表达的所述siRNA分子中的至少一种如SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9或SEQ ID No.10所示。7.一种在有需要的受试者中治疗肥胖症、非酒精相关脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎或肝细胞癌的方法，所述方法包括施用治疗有效量的至少一种抑制SPTBN1表达的siRNA分子，其中抑制SPTBN1表达的所述siRNA分子中的至少一种与SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9或SEQ ID No.10的至少10个核苷酸同源。8.一种在有需要的受试者中治疗肥胖症、非酒精相关脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎或肝细胞癌的方法，所述方法包括施用治疗有效量的至少一种抑制SPTBN1表达的siRNA分子，其中抑制SPTBN1表达的所述siRNA分子中的至少一种与SEQ ID No.7、SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：洛帕，
申请(专利权)人：乔治华盛顿大学国会特许非营利公司，
类型：发明
国别省市：