【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向SARS
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CoV
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2的多肽及相关组合物和方法
专利
[0001]本专利技术涉及多肽。特别地，本专利技术涉及SARS
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CoV
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2特异性多肽和相关的构建体、组合物和方法。
[0002]专利技术背景
[0003]纳米颗粒为各个学科的进步做出了贡献。它们的使用具有赋予靶向递送并允许用于催化过程的有序的微阵列的工程化、缓释和笼状微环境。
[0004]对于含有敏感和亚稳态蛋白质的纳米颗粒的制造，蛋白质自组装是一种有吸引力的方法。事实上，自组装纳米颗粒在生理条件下通过非共价相互作用形成，并可靠地产生均匀且通常对称的纳米胶囊或纳米笼。
[0005]严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS
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CoV
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2)是导致2019年冠状病毒病(COVID
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19)的冠状病毒株，该病是导致COVID
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19大流行的呼吸系统疾病。
[0006]需要改进的治疗和/或预防SARS
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CoV
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2的组合物和方法。
[0007]专利技术概述
[0008]根据一个方面，提供了一种融合蛋白，其包含连接于SARS
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2结合部分的纳米笼单体，其中多个融合蛋白自组装以形成纳米笼。
[0009]在一个方面，所述SARS
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CoV
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2结合部分靶向SARS...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.融合蛋白，其包含与SARS
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CoV
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2结合部分连接的纳米笼单体，其中多个所述融合蛋白自组装以形成纳米笼。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述SARS
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2结合部分靶向SARS
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CoV
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2S糖蛋白。3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中所述SARS
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2结合部分装饰所述组装的纳米笼的内表面和/或外表面，优选外表面。4.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中所述SARS
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2结合部分包含抗体或其片段。5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其中所述抗体或其片段包含Fab片段。6.根据权利要求4的融合蛋白，其中所述抗体或其片段包含scFab片段、scFv片段、sdAb片段、VHH结构域或其组合。7.根据权利要求4所述的融合蛋白，其中所述抗体或其片段包含Fab片段的重链和/或轻链。8.根据权利要求4至7中任一项所述的融合蛋白，其中所述SARS
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2结合部分包含单链可变结构域VHH
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72、BD23和/或4A8。9.根据权利要求4至8中任一项所述的融合蛋白，其中所述SARS
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2结合部分包含表4中列出的mAb。10.根据权利要求9所述的融合蛋白，其中所述SARS
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2结合部分包含来自表4的mAb 298、324、46、80、52、82或236，或其变体。10a.根据权利要求10所述的融合蛋白，其中所述SARS
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2结合部分包含来自表4的mAb 298、80和52，或其变体。11.根据权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白，其中所述SARS
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2结合部分连接在所述纳米笼单体的N
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或C
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末端，或者其中存在连接在所述纳米笼单体的N末端的第一SARS
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2结合部分和连接在所述纳米笼单体的C末端的第二SARS
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2结合部分，其中所述第一和第二SARS
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2结合部分相同或不同。12.根据权利要求1至11中任一项所述的融合蛋白，其中所述纳米笼单体包含与所述SARS
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2结合部分连接的第一纳米笼单体亚基；其中所述第一纳米笼单体亚基与第二纳米笼单体亚基自组装以形成所述纳米笼单体。13.根据权利要求12所述的融合蛋白，其中所述SARS
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CoV
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2结合部分连接在所述第一纳米笼单体的N
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或C
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末端，或者其中存在连接在所述第一纳米笼单体亚基的N
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末端的第一SARS
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2结合部分和连接在所述第一纳米笼单体亚基的C
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末端的第二SARS
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2结合部分，其中所述第一和第二SARS
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2结合部分相同或不同。14.根据权利要求12或13所述的融合蛋白，其与所述第二纳米笼单体亚基组合。15.根据权利要求12至14中任一项所述的融合蛋白，其中所述第二纳米笼单体亚基连接于生物活性部分。16.根据权利要求15所述的融合蛋白，其中所述生物活性部分包含Fc片段。17.根据权利要求16所述的融合蛋白，其中所述Fc片段是IgG1
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Fc片段。18.根据权利要求15或16所述的融合蛋白，其中所述Fc片段包含一种或多种突变，如LS、YTE、LALA、I253A和/或LALAP，其将所述融合蛋白的半衰期从例如数分钟或数小时调节
到数天、数周或数月。19.根据权利要求15至18中任一项所述的融合蛋白，其中所述Fc片段是scFc片段。20.根据权利要求1至19中任一项所述的融合蛋白，其中约3至约100个纳米笼单体例如24、32或60个单体或者约4至约200个纳米笼单体亚基例如4、6、8、10、12、14、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50或更多个亚基任选与一种或多种全纳米笼单体组合自组装以形成纳米笼。21.根据权利要求1至20中任一项所述的融合蛋白，其中所述纳米笼单体选自铁蛋白、脱铁铁蛋白、encapsulin、SOR、二氧四氢喋啶合酶(lumazine synthase)、丙酮酸脱氢酶、羧酶体、穹窿蛋白、GroEL、热休克蛋白、E2P、MS2外壳蛋白、其片段及其变体。22.根据权利要求21所述的融合蛋白，其中所述纳米笼单体是脱铁铁蛋白，任选是人脱铁铁蛋白。23.根据权利要求22所述的融合蛋白，其中所述第一和第二纳米笼单体亚基可互换地包含脱铁铁蛋白的“N”和“C”区域。24.根据权利要求23所述的融合蛋白，其中脱铁铁蛋白的“N”区包含与以下序列至少70％(例如至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的序列或由与以下序列至少70％(例如至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的序列组成：MSSQIRQNYSTDVEAAVNSLVNLYLQASYTYLSLGFYFDRDDVALEG VSHFFRELAEEKREGYERLLKMQNQRGGRALFQDIKKPAEDEW。25.根据权利要求22或23所述的融合蛋白，其中所述脱铁铁蛋白的“C”区包含与以下序列至少70％(例如至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的序列或由与以下序列至少70％(例如至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的序列组成：GKTPDAMKAAMALEKKLNQALLDLHALGSARTDPHLCDFLETHFLDEEVKLIKKMGDHLTNLHRLGGPEAGLGEYLFERLTLRHD或GKTPDAMKAAMALEKKLNQALLDLHALGSARTDPHLCDFLETHFLDEEVKLIKKMGDHLTNLHRLGGPEAGLGEYLFERLTLKHD。26.根据权利要求1至25中任一项所述的融合蛋白，其进一步包含在所述纳米笼单体亚基与所述生物活性部分之间的接头。27.根据权利要求26所述的融合蛋白，其中所述接头是柔性的或刚性的，并且包含约1至约30个氨基酸残基，例如约8至约16个氨基酸残基。28.根据权利要求26或27所述的融合蛋白，其中所述接头包含GGS重复，例如1、2、3、4或更多个GGS重复。29.根据权利要求28所述的融合蛋白，其中所述接头包含与以下序列至少70％(例如至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的序列或由与以下序列至少70％(例如至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的序列组成：GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGG。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的融合蛋白，其进一步包含C末端接头。31.根据权利要求30所述的融合蛋白，其中C末端接头包含与以下序列至少70％(例如至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的序列或由与以下序列至少70％(例如至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的序列组成：GGSGGSGGSGGSGGGSGGSGGSGGSG。32.纳米笼，其包含根据权利要求1至31中任一项的至少一种融合蛋白和与所述融合蛋白自组装以形成纳米笼单体的至少一种第二纳米笼单体亚基。33.根据权利要求32所述的纳米笼，其中每个纳米笼单体均包含根据权利要求1至31中任一项所述的融合蛋白。34.根据权利要求32或33所述的纳米笼，其中约20％至约80％的所述纳米笼单体包含根据权利要求1至27中任一项所述的融合蛋白。35.根据权利要求32至34中任一项所述的纳米笼，其包含至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个不同的SARS
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2结合部分，例如3个不同的SARS
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CoV
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2结合部分。36.根据权利要求32至35中任一项所述的纳米笼，其中所述纳米笼是多价的和/或多特异性的。37.根据权利要求32至36中任一项所述的纳米笼，其包含来自表4的一种或多种mAb。38.根据权利要求37所述的纳米笼，其包含来自表4的3种mAb。39.根据权利要求37或38所述的纳米笼，其包含来自表4的mAb 298、324、46、52、80、82和/或236。40.根据权利要求32至39中任一项所述的纳米笼，其包含比例为4:2:1:1的scFab1人脱铁铁蛋白:scFc人N
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铁蛋白:scFab2
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C
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铁蛋白:scFab3
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C
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铁蛋白。41.根据权利要求32至40中任一项所述的纳米笼，其携带货物分子，例如药剂、诊断剂和/或成像剂。42.根据权利要求41所述的纳米笼，其中所述货物分子未与所述融合蛋白融合，并且被内部地包含在所述纳米笼中。43.根据权利要求42所述的纳米笼，其中所述货物分子是蛋白质，并且与所述融合蛋白融合，使得所述货物分子被内部地包含在所述纳米笼中。44.根据权利要求41至43中任一项所述的纳米笼，其中所述货物分子是荧光蛋白，例如GFP、EGFP、Ametrine，和/或基于黄素的荧光蛋白，如LOV蛋白，例如iLOV。45.三特异性抗体构建体，其靶向SARS
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2。46.SARS
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2治疗性或预防性组合物，其包含根据权利要求32至44中任一项所述的纳米笼或权利要求45所述的抗体。47.核酸分子，其编码根据权利要求1至31中任一项所述的融合蛋白。48.载体，其包含根据权利要求47所述的核酸分子。49.宿主细胞，其包含根据权利要求48所述的载体并产生根据权利要求1至31中任一项所述的融合蛋白。50.治疗和/或预防SARS
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2的方法，所述方法包括施用根据权利要求32至33中任一项所述的纳米笼或根据权利要求45所述的抗体或根据权利要求46所述的组合物。
51.根据权利要求32至33中任一项所述的纳米笼或根据权利要求45所述的抗体或根据权利要求46所述的组合物在治疗和/或预防SARS
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2中的用途。52.根据权利要求32至33中任一项所述的纳米笼或根据权利要求45所述的抗体或根据权利要求46所述的组合物，用于治疗和/或预防SARS
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2。53.多肽或其功能片段，所述多肽包含与下表中列出的任何序列具有至少70％同一性的氨基酸序列：
54.根据权利要求53所述的多肽，其包含与所列序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。55.根据权利要求54所述的多肽，其由与所列序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列组成。56.抗体或其片段，其包含根据权利要求53至55中任一项所述的多肽。57.融合多肽，其包含(1)片段可结晶(Fc)区，所述Fc区与(2)纳米笼单体或其亚基连接，其中所述Fc区包含I253A突变，其中编号根据EU索引。58.根据权利要求57所述的融合多肽，其中所述Fc区进一步包含LALAP(L234A/L235A/P329G)突变，其中编号根据EU索引。59.根据权利要求57或58所述的融合多肽，其中所述Fc区是IgG1 Fc区。60.根据权利要求57至59中任一项所述的融合多肽，其中所述纳米笼单体是铁蛋白单体。61.根据权利要求60所述的融合多肽，其中所述铁蛋白单体是铁蛋白轻链。62.根据权利要求61所述的融合多肽，其中所述铁蛋白轻链是人铁蛋白轻链。63.根据权利要求57至62中任一项所述的融合多肽，其中所述Fc区通过氨基酸接头连接于所述纳米笼单体或其亚基。64.根据权利要求57至63中任一项所述的融合多肽，其中所述Fc区连接于所述纳米笼...
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