米团花二倍半萜化合物与提取物L01及其在制药中的应用制造技术

本发明专利技术提供了米团花中二倍半萜化合物与提取物L01及其在制备抗炎药物与免疫抑制药物中的应用，属于天然药物化学技术领域。本发明专利技术提供的米团花中二倍半萜类化合物具有1~12所示结构中的任意一种，骨架类型非常罕见，具有抗炎和免疫抑制活性，能够应用于抗炎药物和免疫抑制药物的制备。本发明专利技术还提供了一种以化合物1~12为特征成分的米团花提取物L01及其在制备抗炎药物和免疫抑制药物中的应用。试验结果表明，本发明专利技术提供的二倍半萜类化合物对CD3/CD28单抗刺激小鼠T细胞中促炎细胞因子IFN

【技术实现步骤摘要】
米团花二倍半萜化合物与提取物L01及其在制药中的应用


[0001]本专利技术属于天然药物化学
，具体涉及米团花中二倍半萜化合物与提取物L01及其制备方法和在制备抗炎药物与免疫抑制药物中的应用。

技术介绍

[0002]自身免疫性疾病是机体免疫系统对自身抗原产生局部或全身性异常免疫反应而导致自身组织损伤引起的一类疾病，包括银屑病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、炎症性肠病、多发性硬化症等。目前报道的自身免疫性疾病多达80余种，临床表现多样，发病率不断提高，对人类健康造成严重影响。银屑病，又称“牛皮癣”，是一种慢性自身免疫疾病，全球患病率为2～3％。银屑病分为斑块型银屑病、滴状银屑病、脓疱状银屑病、红皮病型银屑病等，其中斑块型银屑病最为常见，临床表现多为红斑、鳞屑，全身均可发病。银屑病患者常并发银屑性关节炎、淋巴癌、心血管疾病、高血压，糖尿病以及忧郁症。目前临床治疗自身免疫性疾病主要使用免疫抑制药物，尽管已有多种疗效不错的免疫抑制药物供临床使用，但仍然存在各种各样的问题如毒副作用大、疗效不满意及价格昂贵等，亟需研发新型的免疫抑制药物。
[0003]天然产物由于其作用机制独特、毒副作用小等特点，在自身免疫性疾病的治疗中发挥着重要作用。许多中草药来源的天然产物具有显著的抗炎免疫抑制作用，尤其植物萜类化合物的抗炎和免疫抑制活性引人注目，是发现新型天然抗炎和免疫抑制药物的重要来源。米团花(Leucosceptrum canum)为唇形科米团花属的单种属植物，多年生灌木或小乔木。米团花叶和树皮有较高的药用价值，云南民间用于舒筋、止血、消炎，治疗发热、胃痛、外伤出血、闭合性骨折、黄水疮等病症。目前从米团花中发现了一些二倍半萜类化学成分，然而尚未有关于米团花中二倍半萜抗炎活性及免疫抑制活性的报道。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术目的在于提供米团花二倍半萜化合物与提取物L01及其制备方法和在制备抗炎药物和免疫抑制药物中的应用。
[0005]为了实现本专利技术的上述目的，本专利技术提供了如下的技术方案：
[0006]如下结构式所示的米团花中二倍半萜化合物1～12，
[0007][0008]本专利技术提供了以上方案所述二倍半萜化合物1～12的制备方法，包括以下步骤：
[0009](1)用有机溶剂对米团花进行提取，得到提取液；
[0010](2)将所述提取液进行减压蒸馏，浓缩得到浸膏；
[0011](3)将所述浸膏溶解后依次进行柱层析分离和高效液相色谱分离，得到所述二倍半萜类化合物。
[0012]所述柱层析分离包括依次进行的硅胶柱层析、MCI柱层析或反相C
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柱层析、葡聚糖凝胶柱层析；所述高效液相色谱分离采用制备或半制备高效液相色谱。
[0013]本专利技术用有机溶剂对米团花进行提取，得到提取液。在提取之前，本专利技术优选先将所述米团花粉碎至30目。在本专利技术中，所述米团花可以取自米团花地上部位或任一组织，如米团花的叶、花或茎阴干；本专利技术对所述米团花的含水率没有特别的要求，新鲜或干燥的米团花均可。
[0014]在本专利技术中，所述有机溶剂优选包括甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷和石油醚中的一种或几种；所述有机溶剂在每千克干重的米团花中的加入量优选为5L。在本专利技术中，所
述提取优选为冷浸提取或热回流提取。在本专利技术中，所述冷浸提取的温度优选为室温，所述冷浸提取的次数优选为2～5次，更优选为3～4次；每次提取的时间优选为24～48h，更优选为36～48h；每次冷浸提取后，对所得提取体系进行过滤，并将每次过滤后的滤液合并。在本专利技术中，所述热回流提取的温度优选为40～50℃，更优选为45～50℃；所述热回流提取的时间优选为4～6h，更优选为4～5h。
[0015]得到提取液后，本专利技术将所述提取液进行减压蒸馏，浓缩得到浸膏。在本专利技术中，所述减压蒸馏的温度优选为35～45℃，时间优选为60～100min；所述减压蒸馏的浓缩倍数优选为50倍。经过减压蒸馏后，所述提取液中的有机溶剂被去除，提取液同时得到浓缩。
[0016]得到浸膏后，本专利技术将所述浸膏溶解后依次进行柱层析分离和高效液相色谱分离，得到所述二倍半萜类化合物。在本专利技术中，所述溶解浸膏用有机溶剂优选为氯仿，所述溶解浸膏用有机溶剂为浸膏质量的1.5～3倍。在本专利技术中，所述柱层析分离优选包括依次进行的硅胶柱层析、MCI柱层析或反相C
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柱层析、葡聚糖凝胶柱层析。在本专利技术中，所述硅胶柱层析的装柱过程优选为：用200～300目硅胶装柱；将所述浸膏溶解后，拌以1～1.5倍(质量倍数)的200～300目硅胶，拌和后的试样晾干并研细过筛后转移至硅胶柱中进行柱层析。在本专利技术中，所述硅胶柱层析优选采用梯度洗脱，所述梯度洗脱采用的流动相优选为由溶剂A和溶剂B按体积比1:0～0:1组成的混合溶剂；所述溶剂A优选为二氯甲烷、氯仿和石油醚中任意一种，所述溶剂优选B为二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙酸乙酯和甲醇中任意一种。本专利技术优选将所述梯度洗脱所得流分依次进行减压浓缩和薄层层析检测，然后合并相同流分。在本专利技术中，所述硅胶柱层析的具体洗脱程序优选为：以PE:CH2Cl2(1:0,1:1,0:1,v/v)和CH2Cl2:Me2CO(9:1,4:1,1:1)进行梯度洗脱，将所得流分经薄层层析检测合并后共得到6个待分离流分，即Fr.1(PE)、Fr.2(PE:CH2Cl2＝1:1)、Fr.3(CH2Cl2)、Fr.4(CH2Cl2:Me2CO＝9:1)、Fr.5(CH2Cl2:Me2CO＝4:1)、Fr.6(CH2Cl2:Me2CO＝1:1)。
[0017]Fr.4进行MCI柱层析或反相C
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柱层析后，本专利技术将所得流分Fr.4
‑
2进行葡聚糖凝胶柱层析。在本专利技术具体实施例中，所述葡聚糖凝胶的型号为LH
‑
20。在本专利技术中，所述葡聚糖凝胶柱层析采用的流动相优选为二氯甲烷和甲醇以体积比1:1组成的混合溶剂；经过所述葡聚糖凝胶柱层析，得到4个亚流分即Fr.4
‑2‑
1、Fr.4
‑2‑
2、Fr.4
‑2‑
3、Fr.4
‑2‑
4。
[0018]经过上述柱层析以后，本专利技术将所得流分Fr.4
‑2‑
1、Fr.4
‑2‑
2、Fr.4
‑2‑
3、Fr.4
‑2‑
4进行高效液相色谱分离，得到所述二倍半萜类化合物。在本专利技术中，所述高效液相色谱分离采用制备或半制备高效液相色谱；所述高效液相色谱的色谱条件优选为：以C
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色谱柱、C8色谱柱、苯基色谱柱或硅胶色谱柱为色谱柱，柱温为35℃；采用梯度洗脱，流动相是由乙腈和水按体积比100:0～5:95组成的混合溶剂；流动速度为3mL/min。在本专利技术具体实施例中，所述高效液相色谱的分离程序具体优选为：采用安捷伦1200半制备液相色谱仪，Zorbax SB
‑
C...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.如下结构式所示的米团花中二倍半萜化合物1～12，2.权利要求1所述米团花二倍半萜化合物1～12的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)用有机溶剂对米团花进行提取，得到提取液；所述有机溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷和石油醚中的一种或几种；所述提取为冷浸提取或热回流提取；所述冷浸提取的温度为室温，所述冷浸提取的次数为2～5次，每次提取的时间为24～48h；所述热回流提取的温度为40～50℃，提取的时间为4～6h；(2)将上述提取液进行减压蒸馏，浓缩得到浸膏；所述减压蒸馏处理温度为30～60℃；(3)将上述浸膏溶解后依次进行柱层析分离和高效液相色谱分离，得到所述二倍半萜类化合物；所述柱层析分离包括依次进行的硅胶柱层析、MCI柱层析或反相C
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柱层析、葡聚糖凝胶柱层析；所述高效液相色谱分离采用制备或半制备高效液相色谱；所述硅胶柱层析的硅胶填料为200～300目；所述硅胶柱层析采用梯度洗脱，所述梯度洗脱采用的流动相是由溶剂A和溶剂B按体积比1:0～0:1组成的混合溶剂；所述溶剂A为二氯甲烷、氯仿和石油醚
中任意一种，所述溶剂B为二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙酸乙酯和甲醇中任意一种；所述MCI柱层析或反相C
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柱层析采用梯度洗脱，所述梯度洗脱采用的流动相为甲醇和水按体积比50％～100％组成的混合溶剂；所述葡聚糖凝胶柱层析采用的流动相为二氯甲烷或氯仿和甲醇以体积比1:1组成的混合溶剂；所述高效液相色谱的色谱条件为：以C
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色谱柱、C8色谱柱、苯基色谱柱或硅胶色谱柱为色谱柱，柱温20～50℃；采用梯度洗脱，流动相是由乙腈/水或甲醇/水按体积比100:0～5:95组成的混合溶剂；流动速度为1～3mL/min。3.米团花提取物L01，其特征在于，其是由下...

【专利技术属性】
技术研发人员：黎胜红，郭凯，周婷婷，刘艳春，刘燕，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：