氨基酸分析方法和液相色谱装置制造方法及图纸

本发明专利技术涉及一种氨基酸分析方法和液相色谱装置，在该氨基酸分析方法和液相色谱装置中实现苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的分离性能的提高。该氨基酸分析方法是使用具备阳离子交换柱的液相色谱装置对氨基酸进行分析的方法，其具备使含有作为氨基酸的苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的试样与洗脱液一起流通于阳离子交换柱以分离苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的工序，并使分离苏氨酸和丝氨酸时的柱温度高于分离甘氨酸和丙氨酸时的柱温度。度高于分离甘氨酸和丙氨酸时的柱温度。度高于分离甘氨酸和丙氨酸时的柱温度。

【技术实现步骤摘要】
氨基酸分析方法和液相色谱装置


[0001]本公开涉及氨基酸分析方法和液相色谱装置。

技术介绍

[0002]作为对试样中的试样成分进行分析的方法，已知有液相色谱法。在液相色谱法中，通常在利用分离柱的试样成分的分离工序中使分离柱的温度升温而实现分离性能的提高。
[0003]例如在专利文献1中公开了如下内容：使含有多种氨基酸的试样流通于在包含100℃以上的温度区域的温度梯度内加热的分离柱，以更短的时间对试样中的氨基酸进行高精度的分离和分析。
[0004]现有技术文献
[0005]专利文献
[0006]专利文献1：日本特许第6595086号公报

技术实现思路

[0007]专利技术所要解决的课题
[0008]然而，在专利文献1那样的现有技术中，没有公开保留时间短、在分析的初期溶出的氨基酸成分(特别着眼于苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸)的分离性能提高。
[0009]因此，本公开的课题在于，在氨基酸分析方法和液相色谱装置中，实现苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的分离性能的提高。
[0010]用于解决课题的手段
[0011]本公开的一个实施方式的氨基酸分析方法是使用具备阳离子交换柱的液相色谱装置对氨基酸进行分析的方法，其特征在于，具备使含有作为上述氨基酸的苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的试样与洗脱液一起流通于上述阳离子交换柱以分离上述苏氨酸、上述丝氨酸、上述甘氨酸和上述丙氨酸的工序，使分离上述苏氨酸和上述丝氨酸时的柱温度高于分离上述甘氨酸和上述丙氨酸时的柱温度。
[0012]另外，本公开的一个实施方式的液相色谱装置具备：将洗脱液输送至流路的送液部；设置于上述送液部的下游，向上述流路的洗脱液中注入含有苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的试样的试样注入部；设置于上述试样注入部的下游，分离上述试样中的试样成分的阳离子交换柱；调整上述阳离子交换柱的柱温度的温度调整单元；和控制上述温度调整单元的控制单元，其特征在于，上述控制单元控制上述温度调整单元，使得分离上述苏氨酸和上述丝氨酸时的上述柱温度高于分离上述甘氨酸和上述丙氨酸时的上述柱温度。
[0013]专利技术的效果
[0014]根据本公开，能够在氨基酸分析方法和液相色谱装置中实现苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的分离性能的提高。
附图说明
[0015]图1是实施例1的氨基酸分析计100的装置构成及流路的示意图。
[0016]图2是控制实施例1的氨基酸分析计100的动作的时间程序上的时间表的示意图。
[0017]图3是实施例1的色谱图。
[0018]图4是控制实施例2的氨基酸分析计100的动作的时间程序上的时间表的示意图。
[0019]图5是实施例2的色谱图。
[0020]图6是实施例3的色谱图。
[0021]图7是比较例1的色谱图。
[0022]图8是比较例2的色谱图。
具体实施方式
[0023]以下，基于附图详细说明本公开的实施方式。以下的优选实施方式的说明在本质上仅为例示，完全不意味着对本公开、其应用物或其用途进行限制。
[0024]＜液相色谱装置＞
[0025]液相色谱装置是一边输送移动相(洗脱液)一边用分离柱分离试样的目标成分，用分光光度计等检测器检测按照分离的顺序流动的成分，并分析试样的成分的装置。本公开的液相色谱装置例如可以举出高效液相色谱装置(HPLC)、超高效液相色谱装置(UHPLC)等，尽管不意味着限定，但优选为HPLC。
[0026]本公开的液相色谱装置的分离模式是分离试样中的离子性成分等的离子交换模式。需要说明的是，离子交换色谱法是如下方法：在由离子交换树脂等离子交换体构成的固定相和由缓冲液等构成的移动相这2个相中，利用与试样成分之间产生的相互作用，分离并分析不同性质的试样成分。通常，在离子交换体中，根据经化学修饰的离子交换基团的性质，存在磺酸、羧酸等阳离子交换体和季铵、叔铵等阴离子交换体。本公开的液相色谱装置的离子交换体是阳离子交换体，在本说明书中，将填充有作为固定相的阳离子交换体的柱称为阳离子交换柱或简称为分离柱。
[0027]本公开的液相色谱装置是用于对含有氨基酸的试样、特别是作为分离对象成分至少含有苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的试样进行分析的装置。具体而言，本公开的液相色谱装置例如为蛋白质/肽的氨基酸组成分析、医药品/生物体液等的氨基酸及其类似物等的分析中使用的氨基酸分析计、蛋白质、胺类、有机酸等的分析中使用的HPLC系统等，优选为氨基酸分析计。
[0028]由本公开的液相色谱装置分析的试样只要至少含有苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸即可，也可以含有其他氨基酸等。例如，在同时分析多种氨基酸的氨基酸同时分析中，作为分析对象的氨基酸和氨基酸类似物可大致分类为约20种蛋白质水解物氨基酸和40种以上的生物体液氨基酸及氨基酸类似物。将多个缓冲液混合，在混合后的缓冲液中添加试样，并使其通过分离柱进行检测，由此能够同时分析这些多种氨基酸。
[0029]本公开的液相色谱装置也可以是利用梯度洗脱法对试样成分进行分析的装置。在该情况下，作为用于分离的移动相，使用多种洗脱液。需要说明的是，在本说明书中，“梯度”的用语是作为包括阶梯梯度、曲线梯度和线性梯度的用语使用的。
[0030]本公开的液相色谱装置例如从流路的上游侧起依次具备送液部、试样注入部、分
离部和检测器，并且具备与各部连接并控制它们的动作的控制装置。液相色谱装置除了这些构成以外，还可以具备其他任意的构成。具体而言，例如，从容易进行试样成分的检测的观点出发，也可以具备柱前衍生化或柱后衍生化用的试剂、泵、混合器、盒式的反应器等装置。
[0031][送液部][0032]送液部将流动相输送至流路。详细而言，送液部至少输送单一的洗脱液作为用于分离的移动相。特别是在使用梯度洗脱法的情况下，送液部将2种以上的洗脱液输送至流路。另外，作为移动相，送液部也可以输送用于清洗分离柱的柱清洗液、用于调整分离柱的状态的调整液等不用于分离试样的移动相。需要说明的是，有时将柱清洗表述为柱再生，在本说明书中，将柱清洗液也称为柱再生液。
[0033]具体而言，送液部例如由贮存洗脱液、柱清洗液、调整液等各移动相的容器、开始/结束向流路输送各容器内的移动相或调整各液体的流量的电磁阀、将各容器中的移动相输送至流路并且调整各移动相的流速的泵等构成。电磁阀能够在与各容器对应地设置的流路上与各容器对应地设置。泵可以设置在流路上的上述电磁阀的下游。具体而言，例如，与各容器对应的流路在电磁阀的下游合流而成为1个流路，也可以在该流路上设置1个泵(低压梯度洗脱)。另外，也可以在与各容器对应的流路上与各容器对应地设置多个泵(高压梯度洗脱)。
[0034]作为洗脱液，没有限定，可以使用在基于液相色谱法的氨基酸的分析中通常使用的各液体。
[0035]具体而言，例如，作为洗脱液，可以采用含有多元酸的碱金属盐的水溶液和/或缓冲液等。作为多元酸，具体而本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种氨基酸分析方法，其是使用具备阳离子交换柱的液相色谱装置对氨基酸进行分析的方法，其特征在于，具备使含有作为所述氨基酸的苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的试样与洗脱液一起流通于所述阳离子交换柱以分离所述苏氨酸、所述丝氨酸、所述甘氨酸和所述丙氨酸的工序，使分离所述苏氨酸和所述丝氨酸时的柱温度高于分离所述甘氨酸和所述丙氨酸时的柱温度。2.根据权利要求1所述的氨基酸分析方法，其特征在于，所述苏氨酸和所述丝氨酸的保留时间比所述甘氨酸和所述丙氨酸的保留时间短，在所述苏氨酸和所述丝氨酸溶出后，降低所述柱温度，使所述甘氨酸和所述丙氨酸溶出。3.根据权利要求1所述的氨基酸分析方法，其特征在于，所述洗脱液含有选自柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸锂缓冲液和硫酸钠水溶液的组中的至少1种。4.根据权利要求2所述的氨基酸分析方法，其特征在于，所述洗脱液含有选自柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸锂缓冲液和硫酸钠水溶液的组中的至少1种。5.根据权利要求1～4中任一项所述的氨基酸分析方法，其特征在于，所述洗脱液含有有机溶剂，使分离所述苏氨酸和所述丝氨酸时的所述洗脱液中的所述有机溶剂的浓度高于分离所述甘氨酸和所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊藤正人，源法雅，宝泉雄介，涉川雅美，
申请(专利权)人：日本株式会社日立高新技术科学，
类型：发明
国别省市：