一种高灵敏度液相色谱串联质谱法测定人血浆中间苯三酚浓度分析方法技术

本发明专利技术提供了一种高灵敏度液相色谱串联质谱法测定人血浆中间苯三酚浓度分析方法。其包括：向血浆样本中加入稳定同位素内标溶液和提取试剂进行涡流，离心后收集上层有机相，氮气吹干，加复溶相复溶，涡流混匀得到预处理后的待测样品；采用液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种高灵敏度液相色谱串联质谱法测定人血浆中间苯三酚浓度分析方法


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种高灵敏度液相色谱串联质谱法测定人血浆中间苯三酚浓度分析方法；所述间苯三酚用于治疗消化系统和胆道功能障碍引起的急性痉挛性疼痛。

技术介绍

[0002]平滑肌痉挛所引起的疼痛是临床上最常见的急症之一，常见的包括消化系统和胆道功能障碍引起的急性痉挛性疼痛；急性痉挛性尿道、膀胱、肾绞痛；妇科痉挛性疼痛等。痉挛性腹痛可由急性胃肠炎、消化性溃疡等疾病引起。目前常用的罂粟碱类、阿托品类平滑肌解痉药，如抗胆碱能药物阿托品、氢溴酸山莨菪碱等在解痉方面临床效果显著。
[0003]间苯三酚是法国Laboratoires L.Lafon公司开发的一种毒副作用小且疗效确切的非阿托品、非罂粟碱类纯平滑肌解痉药。其特点是具有亲肌性，能直接作用于胃肠道和泌尿生殖道发生痉挛的平滑肌，对正常的平滑肌影响较小。主要应用于消化系统和妇科所出现的痉挛性疼痛。用于妇科时，间苯三酚对子宫的解痉作用不仅具有选择性，还能调节子宫的收缩。此外，间苯三酚还具有改善胎儿心率、缩短产程等作用，对子宫平滑肌的解痉效果比其他解痉药物更具独特性。与其他平滑肌解痉药相比，间苯三酚的特点是不具有抗胆碱作用，在解除平滑肌痉挛的同时，不会产生一系列抗胆碱样副作用。间苯三酚不会引起低血压、心率加快、心律失常等症状，对心血管功能没有影响。
[0004]国外已上市品种包括由法国Laboratoires L.Lafon公司生产的间苯三酚注射液以及间苯三酚口服冻干片，商品名为(斯帕丰)。国内临床应用品种主要为间苯三酚注射液和注射用粉针。由于间苯三酚具有三个酚羟基，在空气中及溶液中易氧化，冻干制剂有助于保持其稳定性。因此，国内开发口服冻干片意义重大。为了加速口服冻干片的临床应用，需要一种简便、准确、快速的生物分析方法。
[0005]现有技术中针对人血浆样本中间苯三酚的浓度检测方法灵敏度不高、分析速度慢(一针运行时间长达10分钟)，血浆用量大且部分技术前处理操作复杂等。这些缺点不利于临床检测大批量血浆样本中间苯三酚的浓度的准确分析。

技术实现思路

[0006]为了克服现有技术中的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种高灵敏度液相色谱串联质谱法测定人血浆中间苯三酚浓度分析方法。
[0007]本专利技术的目的通过以下技术方案得以实现：
[0008]一方面，本专利技术提供一种高灵敏度液相色谱串联质谱法测定人血浆中间苯三酚浓度分析方法，其包括如下步骤：
[0009]向血浆样本中加入稳定同位素内标溶液和提取试剂进行涡流，离心后收集上层有机相，氮气吹干，加复溶相复溶，涡流混匀得到预处理后的待测样品；
[0010]采用液相色谱
‑
串联质谱检测，将待测样品进行液相色谱分离，然后进行质谱检测，基于检测峰面积比绘制标准曲线获得回归方程，最终计算获得待测样品中的间苯三酚浓度。
[0011]上述的方法中，优选地，所述稳定同位素内标溶液为间苯三酚
‑
13C6。
[0012]上述的方法中，优选地，所述预处理的具体方法包括：
[0013]向塑料离心管中加入100μL血浆样本，接着加入20.0μL的内标溶液和1000μL的乙酸乙酯，涡流混匀后离心收集上清液，取850μL的上清液到一干净96孔板中，氮气吹干，残留物加入200μL甲醇
‑
水(20：80，v/v)，涡流混匀，得到待测样品；
[0014]上述的方法中，优选地，所述离心的时间为3min，离心温度为4℃，离心速度为14000rpm。
[0015]上述的方法中，优选地，所述内标溶液的浓度为500ng/mL。
[0016]上述的方法中，优选地，进行液相色谱分离所采用的色谱柱为：Eclipse XDB
‑
Phenyl色谱柱，5.0μm，4.6
×
100mm；所采用的流动相为：A相：含0.005％甲酸的水溶液，B相：甲醇：乙腈(2：1，v/v)。
[0017]上述的方法中，优选地，进行液相色谱分离洗脱条件为：
[0018]梯度洗脱：
[0019]0‑
3.10min，5％ B相
→
40％ B相，95％ A相
→
60％ A相；
[0020]3.10
‑
3.40min，40％ B相，60％ A相；
[0021]3.60
‑
4.50min，5％ B相，95％ A相。
[0022]洗脱时间：4.50min；
[0023]流速：0.800mL/min；
[0024]进样量：20.00μL；
[0025]自动进样器温度：4℃；
[0026]柱温：40℃。
[0027]上述的方法中，优选地，进行质谱检测的质谱条件为：
[0028]离子源：电喷雾离子源(ESI)；
[0029]喷射电压：
‑
2000V；
[0030]喷雾气(Gas1)：40psi；
[0031]辅助气(Gas2)：70psi；
[0032]检测方式：负离子；
[0033]离子源温度：450℃；
[0034]碰撞诱导解离(CAD)：9；
[0035]气帘气(Curtain Gas)：40psi；
[0036]驻留时间：100ms。
[0037]上述的方法中，优选地，进行质谱检测采用定量分析离子对，所述定量分析离子对为：
[0038]间苯三酚m/z 125.0
→
56.9，碰撞能量(CE)
‑
21eV；
[0039]间苯三酚
‑
13C6 m/z 131.0
→
60.1，碰撞能量(CE)
‑
19eV。
[0040]上述的方法中，优选地，标准曲线具体制作为：
[0041]以待测样品理论浓度为横坐标，待测样品与内标物的峰面积比为纵坐标，进行回归分析计算获得直线回归方程。
[0042]另一方面，本专利技术还提供上述的方法在分析血浆样本中间苯三酚浓度中的应用；所述间苯三酚用于治疗消化系统和胆道功能障碍引起的急性痉挛性疼痛。
[0043]本专利技术的有益效果：
[0044](1)本专利技术具有提取后样本易于保存，分析速度较快，分析时间仅为4.5min，因此本专利技术适合大批量临床研究样品分析。
[0045](2)本专利技术灵敏度高、间苯三酚定量下限为2.00ng/mL，本专利技术方法准确度好，精密度高，重现性好，能够更准确地分析药物的浓度。
[0046]上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本专利技术的较佳实施例并配合附图详细说明如后。
附图说明
[0047]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高灵敏度液相色谱串联质谱法测定人血浆中间苯三酚浓度分析方法，其包括如下步骤：向血浆样本中加入稳定同位素内标溶液和提取试剂进行涡流，离心后收集上层有机相，氮气吹干，加复溶相复溶，涡流混匀得到预处理后的待测样品；采用液相色谱
‑
串联质谱检测，将待测样品进行液相色谱分离，然后进行质谱检测，基于检测峰面积比绘制标准曲线获得回归方程，最终计算获得待测样品中的间苯三酚浓度。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述稳定同位素内标溶液为间苯三酚
‑
13C6。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述预处理的具体方法包括：向塑料离心管中加入100μL血浆样本，接着加入20.0μL的内标溶液和1000μL的乙酸乙酯，涡流混匀后离心收集上清液，取850μL的上清液到一干净96孔板中，氮气吹干，残留物加入200μL甲醇
‑
水(20：80，v/v)，涡流混匀，得到待测样品；优选地，所述离心的时间为3min，离心温度为4℃，离心速度为14000rpm。4.根据权利要求1～3所述的方法，其中，所述内标溶液的浓度为500ng/mL。5.根据权利要求1所述的方法，其中，进行液相色谱分离所采用的色谱柱为：Eclipse XDB
‑
Phenyl色谱柱，5.0μm，4.6
×
100mm；所采用的流动相为：A相：含0.005％甲酸的水溶液，B相：甲醇：乙腈(2：1，v/v)。6.根据权利要求5所述的方法，其中，进行液相色谱分离洗脱条件为：梯度洗脱：0
‑
3.10min，5...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓泮，冯超，
申请(专利权)人：苏州熙萃医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：