本申请提供同时检测沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和解脲脲原体的试剂盒及应用，涉及微生物检测领域。该同时检测沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和解脲脲原体的试剂盒包括反应试剂和反应盒，反应试剂包括样本核酸释放剂和恒温扩增试剂，所述样本核酸释放剂包括显色剂，反应盒包括可连通或隔开的样品提取舱和核酸扩增舱，核酸扩增舱包括至少三个彼此独立的检测孔，每个检测孔内分别放置有检测不同病原体的恒温扩增试剂。通过该试剂盒可以同时检测3种生殖道病原体，检测通量较高，快速、简便，耗时短；灵敏度、特异性高，可以实现一管式的全自动核酸提取、扩增、仪器自动分析判断；不需要昂贵的仪器设备，成本低，操作简单。操作简单。操作简单。
【技术实现步骤摘要】
同时检测沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和解脲脲原体的试剂盒及应用
[0001]本申请涉及微生物检测领域，尤其涉及同时检测沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和解脲脲原体的试剂盒及应用。
技术介绍
[0002]沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，CT)是一种革兰阴性微生物，具有特殊发育周期，镜检可观察到原体(EB)和始体(RB)两种形态结构。根据主要外膜蛋白抗原表位的差异，已发现多种引起人类疾病的生殖沙眼衣原体血清型，包括血清型B、Ba、D、E、F、G、H、I、J、K。生殖道沙眼衣原体感染是常见的性传播疾病。沙眼衣原体引起的疾病范围广泛，可累及眼、生殖道、直肠等多个脏器，也可发生母婴传播。根据临床表现分为具有泌尿生殖道症状体征的患者，无症状感染者和新生儿感染。男性常见的表现是尿道炎、附睾炎，女性则为宫颈炎、尿道炎、盆腔炎，也可诱发生育能力下降，新生儿结膜炎等。沙眼衣原体实验室诊断方法包括
①
显微镜检查：适用于新生儿眼结膜刮片的检查；
②
培养法：沙眼衣原体细胞培养阳性；
③
抗原检测：酶联免疫吸附试验、直接免疫荧光法或免疫层析试验检测沙眼衣原体抗原阳性；
④
抗体检测：新生儿衣原体肺炎中沙眼衣原体IgM抗体滴度升高；
⑤
核酸检测：沙眼衣原体核酸检测阳性。
[0003]淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae，NG)是一种革兰阴性的专性需氧双球菌，细胞色素氧化酶阳性，部分菌株具有质粒介导的耐药性。根据主要外膜蛋白抗原表位的差异，已发现多种引起人类疾病的淋病奈瑟菌菌株类型，包括WHO
‑
A、WHO
‑
B、WHO
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C、WHO
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D、WHO
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E、WHO
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G、WHO
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J、WHO
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P等。淋病是我国性传播疾病的主要病种之一，由淋病奈瑟菌感染所致，特点为潜伏期短、传染性强，如不及时治愈可出现严重的并发症和后遗症。根据临床表现分为有症状的泌尿生殖系统感染，常见表现为化脓性炎症；无症状的泌尿生殖系统感染，眼、咽、皮肤、直肠、盆腔等部位的感染，以及血行播散式感染。淋病奈瑟菌实验室诊断方法包括
①
显微镜检查：取男性尿道分泌物涂片做革兰染色，革兰阴性双球菌为阳性；
②
淋病奈瑟菌分离培养：为淋病的确诊试验，通过菌落特征、氧化酶试验、Superoxol试验和革兰染色初步鉴定，也可结合糖发酵试验或荧光抗体试验进一步确认；
③
抗原检测：淋病奈瑟菌抗原阳性；
④
核酸检测：淋病奈瑟菌核酸检测阳性。
[0004]解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum，UU)是一类没有细胞壁、高度多形性、能通过滤菌器、可用人工培养基培养增殖的最小原核细胞型微生物。根据外膜蛋白抗原表位的差异，已发现多种引起人类疾病的解脲脲原体，包括血清型UU2、UU4、UU5、UU7、UU8、UU9、UU10、UU11、UU12、UU13和UP1、UP3、UP6、UP14。解脲脲原体是人类泌尿生殖道常见的寄生菌之一，经尿道感染后患者可出现尿道炎症状，并可继发慢性前列腺炎，还继续感染精道、精囊和睾丸，影响精子和精液的质量，引起不育，解脲脲原体与不孕症、自然流产、死胎、女性生殖道炎症等密切相关，解脲脲原体还可经阴道分娩过程而由母亲传给婴儿。解脲脲原体实验室诊断方法包括
①
培养法：解脲脲原体细胞培养阳性；
②
抗原检测：酶联免疫吸附试
验、直接免疫荧光法或免疫层析试验检测解脲脲原体抗原阳性；
③
核酸检测：解脲脲原体核酸检测阳性。
[0005]沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和解脲脲原体是常见的生殖道感染疾病病原体，传统的病原学诊断耗费时间长，难以满足临床诊断需求，亟需研发新的诊断方法。
技术实现思路
[0006]本申请的目的在于提供一种同时检测沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和解脲脲原体的试剂盒，旨在解决现有沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和解脲脲原体病原学诊断方法耗费时间长，难以满足临床诊断需求的问题。
[0007]为实现以上目的，本申请提供同时检测沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和解脲脲原体的试剂盒，所述试剂盒包括反应试剂和反应盒，所述反应试剂包括样本核酸释放剂和恒温扩增试剂，所述样本核酸释放剂包括显色剂；
[0008]所述反应盒包括：样品提取舱和核酸扩增舱，所述样品提取舱和所述核酸扩增舱之间设置有阻隔结构，所述阻隔结构具有使所述样品提取舱和所述核酸扩增舱连通的接通状态和使所述样品提取舱和所述核酸扩增舱隔开的封闭状态；
[0009]所述核酸扩增舱包括至少三个彼此独立的检测孔，每个所述检测孔内分别放置有用于检测所述沙眼衣原体、所述淋病奈瑟菌和所述解脲脲原体的所述恒温扩增试剂。
[0010]优选地，所述恒温扩增试剂包括：dNTPs、链置换聚合酶、引物，所述引物包括检测所述沙眼衣原体的第一引物对、检测所述淋病奈瑟菌的第二引物对、检测所述解脲脲原体的第三引物对和检测内参HBB基因的第四引物对。
[0011]优选地，所述第一引物对包括第一F3、第一B3、第一LF、第一LB、第一FIP和第一BIP；
[0012]所述第一F3的核苷酸序列为SEQ ID NO.1；
[0013]所述第一B3的核苷酸序列为SEQ ID NO.2；
[0014]所述第一LF的核苷酸序列为SEQ ID NO.3；
[0015]所述第一LB的核苷酸序列为SEQ ID NO.4；
[0016]所述第一FIP的核苷酸序列为SEQ ID NO.5；
[0017]所述第一BIP的核苷酸序列为SEQ ID NO.6。
[0018]优选地，所述第二引物对包括第二F3、第二B3、第二LF、第二LB、第二FIP和第二BIP；
[0019]所述第二F3的核苷酸序列为SEQ ID NO.7；
[0020]所述第二B3的核苷酸序列为SEQ ID NO.8；
[0021]所述第二LF的核苷酸序列为SEQ ID NO.9；
[0022]所述第二LB的核苷酸序列为SEQ ID NO.10；
[0023]所述第二FIP的核苷酸序列为SEQ ID NO.11；
[0024]所述第二BIP的核苷酸序列为SEQ ID NO.12。
[0025]优选地，所述第三引物对包括第三F3、第三B3、第三LF、第三LB、第三FIP和第三BIP；
[0026]所述第三F3的核苷酸序列为SEQ ID NO.13；
[0027]所述第三B3的核苷酸序列为SEQ ID NO.14；
[0028]所述第三LF的核苷酸序列为SEQ ID NO.15；
[0029]所述第三LB的核苷酸序列为SEQ ID NO.16；
[0030]所述第三FIP的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.同时检测沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和解脲脲原体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括反应试剂和反应盒，所述反应试剂包括样本核酸释放剂和恒温扩增试剂，所述样本核酸释放剂包括显色剂；所述反应盒包括：样品提取舱和核酸扩增舱，所述样品提取舱和所述核酸扩增舱之间设置有阻隔结构，所述阻隔结构具有使所述样品提取舱和所述核酸扩增舱连通的接通状态和使所述样品提取舱和所述核酸扩增舱隔开的封闭状态；所述核酸扩增舱包括至少三个彼此独立的检测孔，每个所述检测孔内分别放置有用于检测所述沙眼衣原体、所述淋病奈瑟菌和所述解脲脲原体的所述恒温扩增试剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述恒温扩增试剂包括：dNTPs、链置换聚合酶、引物，所述引物包括检测所述沙眼衣原体的第一引物对、检测所述淋病奈瑟菌的第二引物对、检测所述解脲脲原体的第三引物对和检测内参HBB基因的第四引物对。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述第一引物对包括第一F3、第一B3、第一LF、第一LB、第一FIP和第一BIP；所述第一F3的核苷酸序列为SEQ ID NO.1；所述第一B3的核苷酸序列为SEQ ID NO.2；所述第一LF的核苷酸序列为SEQ ID NO.3；所述第一LB的核苷酸序列为SEQ ID NO.4；所述第一FIP的核苷酸序列为SEQ ID NO.5；所述第一BIP的核苷酸序列为SEQ ID NO.6。4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述第二引物对包括第二F3、第二B3、第二LF、第二LB、第二FIP和第二BIP；所述第二F3的核苷酸序列为SEQ ID NO.7；所述第二B3的核苷酸序列为SEQ ID NO.8；所述第二LF的核苷酸序列为SEQ ID NO.9；所述第二LB的核苷酸序列为SEQ ID NO.10；所述第二FIP的核苷酸序列为SEQ ID NO.11；所述第二BIP的核苷酸序列为SEQ ID NO.12。5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈华云，黎秋华，张达源，张荃峰，刘淑园，
申请(专利权)人：广州和实生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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