一种食品中非法添加工业染料-酸性橙Ⅱ含量的测定方法技术

本发明专利技术涉及一种运用串联液相质谱仪测定食品中非法添加工业染料－酸性橙Ⅱ含量的方法。通过对样品离心及超声提取，取上清液采用固相萃取净化，过０．２２μｍ滤膜后注入液相色谱－串联质谱，通过对目标化合物以保留时间和两对离子的（特征离子对／定量离子对）所对应的ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ色谱峰面积相对丰度进行定性。要求被测试样中目标化合物的保留时间与标准溶液中目标化合物的保留时间一致，偏差小于２０％，同时要求被测试样中目标化合物的两对离子对应ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ色谱峰面积比与标准溶液中目标化合物的面积比一致，定量测定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种食品中非法添加工业染料-酸性橙ii含量的测定方法，特别是涉及一种运用串联液相质谱仪测定食品中非法添加工业染料-酸性橙ii的含量的方法
技术介绍
酸性橙n是一种偶氮类酸性工业染料，又名酸性金黄n、金橙n或酸性艳橙gr,俗名金黄粉，。溶于水、乙醇。主要用于蚕丝、羊毛的染色。也可染皮革、纸张、锦纶。能印花。还可用作指示剂。拔染性、勾染性好，染色牢度较差，适用于色泽鲜艳度高的绒线染色。染色时遇铜离子趋向红暗，遇铁离子色泽浅暗。非食用色素酸性橙n又名金橙n、 二号橙、桔黄橙、酸性金黄n或酸性艳橙gr，俗名金黄粉，化学名为2-萘酚偶氮对苯磺酸钠，是酸碱指示剂。医学上用于组织切片染色，在纺织上用作着色剂、皮革制品、塑料及木制品的染色。酸性橙n为中等毒性致癌合物，禁止在食品中使用。酸性橙ii属非食用色素，食品中不允许加入。但是由于酸性橙n色泽鲜艳、着色稳定、价廉等特点， 一些不法商贩为了牟取暴利将其用于食品生产与加工，严重危害了消费者身体健康。因此，及时准确判断食品中是否存在该非食用色素，建立一套快速、准确的食品中非食用色素酸性橙n的测定方法具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术提供的是一种食品中非法添加工业染料-酸性橙ii含量的测定方法。i原理试样中的目标化合物用曱醇-乙酸铵溶液提取，经弱阴离子交换固相萃取柱净化后，液相色谱-串联质谱测定，基质加标工作曲线外标法定量。2试剂与材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。2. 1甲醇液相色语纯2.2乙酸铵2. 3甲酸2. 4氨水2.5提取溶液称取3. 9克乙酸铵用水溶解，加入IO. OmL曱酸，用水定容到500mL后，用曱醇定容到1000mL。2.6固相萃取柱平衡溶液称取3. 9克乙酸铵用水溶解，力卩IO. OmL甲酸，用水疋容到500mL。2. 7淋洗溶液称取3. 9克乙酸铵用水溶解，力。10. OmL甲酸和25. OmL甲醇，用水定容到500mL。2. 8洗脱溶液取5mL氨水用曱醇定容至100mL。2. 9样品稀释液称取0. 39克乙酸铵用水溶解，力。0. 50mL甲酸，用水定容到250mL后，用水定容到500mL。2. 10流动相A:称取0. 39克乙酸铵用水溶解，力cr 0. 50mL曱酸，用水定容到500mL。2.11流动相B:乙腈，液相色:^普纯。2.12弱阴离子交换固相萃取柱WAX, 60mg/3mL，使用前依次用3mL甲醇、3mL水以及3mL固相萃取柱平4軒溶液(2. 5 )活化。2. 13标准品酸性冲登II。2. 14标准储备液(1. Omg/mL):准确称取0. 0100克酸性橙II标准品，用50°/。曱醇水溶液定容至10. OmL。2.15标准系列配制酸性橙n标准系列，酸性橙II浓度为25、 50、 100、200、 400ng/mLo3仪器和设备3.1液相色谱-串联质谱仪配有电喷雾(ESI)离子源。3. 2离心机。3. 3超声波水浴。3.4固相萃取装置。3.5氮吹仪。4样品及基质加标工作曲线的制备4. 1样品的制备a) 提取称取l. 0克试样于50mL离心管中，加入IO. 0mL提取溶液，超声提取30分钟，10 000 r/min离心10分钟，上清液转移至另一 50mL离心管中；残渣中加入10. OmL提取溶液再次提取，合并两次提取溶液。b) 净化取5. OmL样品提取液，用固相萃取柱平衡溶液(2. 5 )稀释定容至50. OmL,过已活化好的弱阴离子固相萃取柱，用2mL淋洗液、2mL水淋洗，5mL洗脱液洗脱，收集洗脱液，用氮气吹至近干，用样品稀释液定容至1. OmL,过0. 22 n m滤膜后液相色i普-串联质语测定。4.2基质加标工作曲线的制备称取1.0克空白样品基质于50mL离心管中，称取6份，分别加入标准系列溶液(2. 15) IOOiuL,按4.1进行操作，制备基质加标工作曲线，酸性橙II为25、 50、 100、 200、 400ng/mL。。5测定5.1液相色谱-串联质谱参考条件色i普柱BHT 1. 7 m m x 100mm流动相0. 1°/。甲酸的5mmol/L乙酸铵水溶+乙腈9(1+9)。进样量5 p L 。柱温40°C 。离子源酸性橙II电喷雾ESI,负离子。扫描方式多反应监测MRM。监测离子对<table>table see original document page 6</column></row><table>5. 2定性测定各检测目标化合物以保留时间和两对离子的(特征离子对/定量离子对)所对应的LC-MS/MS色i普峰面积相对丰度进行定性。要求被测试样中目标化合物的保留时间与标准溶液中目标化合物的保留时间一致(一致的条件是偏差小于20%)，同时要求被测试样中目标化合物的两对离子对应LC-MS/MS色i瞽峰面积比与标准溶液中目标化合物的面积比一致，相对丰度>50%、 20-50%、 10-20%、 <10%时,容许偏差分别为20%、25°/" 30%和50%。5. 3定量测定按照5. 1液相色语-串联质谱条件测定样品及基质加标标准溶液，以标准溶液浓度对定量离子峰面积绘制标准曲线，外标法定量。6结果计算样品中酸性橙n的含量(/ig/kg) = ^-m式中M！——样品峰面积；M2——标准峰面积C——标准溶液浓度，ng/mLV ——定容体积，mL;m--称样量，g。附图说明附图为标准曲线。具体实施例方式实施例a) 称取l. 0克试样于50mL离心管中，加入IO. OmL提取溶液，超声提取30分钟，10 000 r/min离心10分钟，上清液转移至另一 50mL离心管中；残渣中加入10. OmL提取溶液再次提取，合并两次提取溶液。b) 净化取5. OmL样品提取液，用固相萃取柱平衡溶液(2. 5滩释定容至50. OmL,过已活化好的弱阴离子固相萃取柱，用2mL淋洗液、2mL水淋洗，5mL洗脱液洗脱，收集洗脱液，用氮气吹至近干，用样品稀释液定容至1. OmL,过0. 22 ju m滤膜后液相色镨-串联质谱测定。c) 基质加标工作曲线的制备称取1. 0克空白样品基质于50mL离心管中，称取6份，分别加入标准系列溶液(2.15) IOOjjL，按4.1进行操作，制备基质加标工作曲线，酸性橙II为25、 50、 100、 200、 400ng/mL。d)测定(见附图的标准曲线)浓度(ng/mL )2550100200400峰面积82719804012768714730样品精密度的测定:检测值(x) ng/mL检测酸性平均RSD回收力口标力口标力口标力口标力口标力口标样品样品率％橙n值(%)12345612(X)<table>table see original document page 9</column></row><table>试样中酸性橙n含量按公式(i)进行计算。显而易见，本领域的普通技术人员，可以用本专利技术通过液相色谱-串联质谱对食品中酸性橙n的测定方法，构成对酸性橙n含量的测定方法。上述实施例仅供说明本专利技术之用，而并非是对本专利技术的限制，有关
的普通技术人员，在不脱离本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种食品中非法添加工业染料－酸性橙Ⅱ含量的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括如下步骤：　称取样品经离心，超声提取，运用固相萃取技术，提取液柱过０．２２μｍ滤膜后液相色谱－串联质谱测定。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：宋薇，
申请(专利权)人：谱尼测试科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]