蟾毒灵在制备抗伪狂犬病毒药物中的用途制造技术

本发明专利技术属于抗病毒药物制备领域，提供蟾毒灵在制备抗伪狂犬病毒药物中的用途；当蟾毒灵应用浓度为0.12μM时，可显著抑制伪狂犬病毒在PK15细胞上的增殖；当按照5mg/kg剂量注射BALB/c小鼠时，可提高伪狂犬病毒感染小鼠的存活率。蟾毒灵是从传统中药蟾酥中提取的中药单体，具有安全、毒副作用少、药物残留低且无污染等优势。等优势。等优势。

【技术实现步骤摘要】
蟾毒灵在制备抗伪狂犬病毒药物中的用途


[0001]本专利技术属于抗病毒药物领域，具体涉及蟾毒灵在制备抗伪狂犬病毒药物中的用途。

技术介绍

[0002]伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Peudorabies virus,PRV)引起的一种病毒性传染病。PRV属于疱疹病毒科、疱疹病毒亚科、水痘疱疹病毒属。通过遗传进化分析，发现伪狂犬病毒与牛疱疹病毒Ⅰ型、马疱疹病毒Ⅰ型以及水痘带状疱疹病毒具有很高的同源性。猪是PRV的唯一天然宿主，除猪以外，PRV还可以感染多种哺乳动物，包括绵羊、犬、牛、狐狸、狼、老虎等，而且也出现过人类感染伪狂犬病毒的事件，这说明PRV对公共卫生存在潜在威胁。
[0003]PRV病毒粒子呈正二十面体结构，由内而外依次为核心DNA、核衣壳、被膜及囊膜，同时在囊膜上还有许多8
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10nm且呈放射状排列的刺突蛋白。
[0004]PRV的传播方式有水平和垂直两种，呼吸道、消化道、交配、精液和胎盘等均可进行病毒传播。PRV可感染各年龄段的猪，危害较大，常使仔猪整窝发病，出现高热、精神沉郁、呼吸困难并震颤流涎等神经症状；育肥猪感染PRV后出现生长缓慢、咳嗽及发烧等症状；但PRV侵袭成年猪后一般为隐性经过，死亡率较低；PRV侵袭母猪后会导致配种障碍；妊娠母猪感染PRV后流产、产死胎或木乃伊胎；PR可使公猪睾丸肿胀、萎缩、精液质量下降、性功能降低甚至丧失生殖能力。
[0005]目前灭活疫苗和减毒活疫苗都被广泛用于预防和控制PR。我国在20世纪50年代报告了第一例伪狂犬病毒，Bartha
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K61疫苗在20世纪70年代引入我国。随着PRV变异毒株的出现，原有疫苗的免疫保护效果可能会出现一定程度下降。当前，并没有研发出有效治疗PRV感染的药物，因此PRV的抗病毒药物研究具有不错的前景。
[0006]蟾毒灵是从中药蟾酥中分离出来的，具有抗癌活性，是类地高辛免疫反应的主要成分蟾毒灵可与Na
+
/K
+
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ATPase的亚基α1、α2和α3结合，是类固醇受体共激活剂SRC
‑
3、SRC
‑
1和Na
+
/K
+
‑
ATPase的有效抑制剂。蟾酥味辛，性温，有毒，归心经。辛散温通，香开辟秽，毒大力强，专入心经。外用解毒消肿、止痛；内服除止痛外，又辟秽开窍而醒神。目前还没有关于蟾毒灵抑制伪狂犬病毒的研究报道。
[0007]
技术实现思路

[0008]目前还没有关于蟾毒灵抑制抗伪狂犬病毒的研究报道，本专利技术的目的在于提供一种蟾毒灵在制备抗伪狂犬病毒药物中的用途。
[0009]本专利技术的上述目的通过以下技术方案实现：
[0010]本专利技术的第一方面提供蟾毒灵在制备抗伪狂犬病毒药物中的用途。
[0011]进一步的，所述蟾毒灵用于抑制动物伪狂犬病毒的感染。
[0012]进一步的，所述蟾毒灵浓度大于0.12μM。
[0013]进一步的，所述蟾毒灵用于降低伪狂犬病毒感染后动物的死亡率。
[0014]进一步的，所述蟾毒灵的剂量为0.5mg/kg。
[0015]进一步的，所述蟾毒灵用于抑制伪狂犬病毒的入胞阶段。
[0016]进一步的，所述蟾毒灵用于降低伪狂犬病毒感染后动物的脏器出血。
[0017]进一步的，所述脏器包括肺和脑。
[0018]本专利技术的第二方面，提供一种抗伪狂犬病毒药物，包括蟾毒灵，还包括药学上可接受的辅料或辅助性成分。
[0019]在一些优选的实施方式中，所述抗伪狂犬病毒药物可以为片剂、粉剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、胶囊、口服液、针剂或缓释剂。
[0020]本组合物可通过本领域已知药物注射方式施用，包括但不限于经皮下、肌肉、静脉注射施用。
[0021]有益效果
[0022]蟾毒灵用于抗伪狂犬病毒效果非常显著；实验证明蟾毒灵在细胞实验中展现出明显的抗病毒活性，在0.12μM的浓度下即可展现出极强的抗伪狂犬病毒(MOI＝0.15)感染作用。
[0023]蟾毒灵用于抗伪狂犬病毒安全、毒副作用少；蟾毒灵为中草药中提取成分，不同于激素、抗生素、化学合成药物等，对机体无明显毒副作用。
[0024]蟾毒灵用于抗伪狂犬病毒药物残留低、无污染；蟾毒灵属于有机分子化合物，容易被动物机体吸收，生物代谢率高，且排泄无污染。
附图说明
[0025]图1为CCK
‑
8方法检测蟾毒灵对PK15细胞的毒性的结果。分别用10、40、60、80μM蟾毒灵处理PK15细胞24小时后，然后加入CCK
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8溶液显色4小时，并在450nm读取细胞吸光度检测细胞活性；
[0026]图2为Cell
‑
based ELISA方法测定蟾毒灵在PK15细胞上对伪狂犬病毒的抑制效果。分别用0.002
‑
2μM mM蟾毒灵预处理PK15细胞2小时，然后后在药物浓度不变的情况下感染PRV(0.15MOI)，24小时后对细胞进行固定，孵育抗PRV
‑
UL42蛋白一抗和HRP标记的兔抗鼠二抗，显色后在吸光度450nm处读取数值，计算伪狂犬病毒感染率。对数据进行分析，获得蟾毒灵抑制50％的病毒所需要的浓度(IC50)。
[0027]图3为Western blot测定蟾毒灵在PK15细胞上抑制伪狂犬病毒感染的活性。0.015
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0.12μM蟾毒灵预处理PK15细胞2小时后感染伪狂犬病毒，之后蟾毒灵一直存在，24小时后收取细胞进行Western blot测定细胞中伪狂犬病毒蛋白含量；
[0028]图4为间接免疫荧光测定蟾毒灵在PK15细胞上抑制PRV感染；分别以不同浓度的蟾毒灵预处理PK15细胞2小时后感染伪狂犬病毒，之后蟾毒灵一直存在，18小时后固定细胞，用3％BSA封闭，孵育抗PRV UL42蛋白的一抗和FITC结合的抗小鼠IgG二抗；用DAPI(含防荧光淬灭剂)在室温下避光染色。最后，用光导耦合照明荧光光源U
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HGLGPS对细胞进行观察。
[0029]图5为噬斑形成实验测定蟾毒灵在PK15细胞上对伪狂犬病毒入胞阶段抑制结果。用5μM蟾毒灵预处理PK15细胞2小时，感染伪狂犬病毒(5MOI)并置于4℃感作1小时，而后将细胞置于37℃条件下静置1小时，这期间蟾毒灵一直存在，收取细胞沉淀用噬斑形成试验测定病毒滴度。
[0030]图6为蟾毒灵在小鼠模型中对伪狂犬病毒引起的解剖病变的影响。实验选取4周龄雌性BALB/c小鼠，通过腹腔注射的方式，以3000PFU/只的接毒剂量使小鼠感染PRV JSY13毒株。并按照0.5mg/kg量对小鼠进行腹腔注射给药，每36小时给药一次，接毒后48小时后将小鼠放血处死，采集脑、肺脏、脾脏、肝脏等各脏器，观察病变情况。
[0031]图7为蟾毒灵对伪狂犬病毒攻毒小鼠死亡情况的影响。选取4周龄雌性BALB/c小鼠，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.蟾毒灵在制备抗伪狂犬病毒药物中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述蟾毒灵用于抑制动物伪狂犬病毒的感染。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述蟾毒灵浓度大于0.12μM。4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述蟾毒灵用于降低伪狂犬病毒感染后动物的死亡率。5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述蟾毒灵的剂量为5mg/kg。6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述蟾毒灵用于...

【专利技术属性】
技术研发人员：薄宗义，曹永忠，朱进进，郭梦娇，张成成，张小荣，吴艳涛，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：