一株降解PAEs的红球菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株降解PAEs的红球菌及其应用，属于生物工程领域，保藏编号：CCTCC NO:M 2023231，保藏时间：2023年3月2日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武昌区珞珈山武汉大学生命科学学院，该菌筛选自土壤，对多种PAEs具有降解能力。对多种PAEs具有降解能力。对多种PAEs具有降解能力。

【技术实现步骤摘要】
一株降解PAEs的红球菌及其应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及一株降解PAEs的红球菌及其应用。

技术介绍

[0002]PAEs(phthalate esters，邻苯二甲酸酯)是一类由邻苯二甲酸酐与相应醇类在酸催化剂作用下通过酯化反应生成的有机化合物，通常为无色透明的油状粘稠液体，难溶于水，易溶于甲醇、乙醚等有机试剂。PAEs可根据侧链长度主要分为长侧链PAEs(DEHP、DnOP、DiNP等)和短侧链PAEs(DEP、DBP等)。可用于食品、医疗、卫生、农业、化妆品等领域。在食品领域中，主要应用在食物包装袋。在医疗、卫生领域，PAEs主要用于一些医疗器械的制作，长时间的使用很容易导致少量PAEs随器具注射进入体内。在农业领域，主要用作农业薄膜的制作，因此特殊的物理性质，很容易迁移到土壤中造成污染。在化妆品领域，DMP、DEP使用最为广泛，长期使用也会通过皮肤吸收进入人体。国际癌症研究机构(IARC)统计表明，塑料成品中PAEs含量通常为10％～60％，而有报道表明塑料中混合的PAEs的含量最高可达70％。PAEs作为增塑剂与聚合物之间的结合并非牢固的化学键结合，而是物理结合(氢键或范德华力)，因此环境因素的微小变化都会加速PAEs脱离聚合物脱离到环境之中。目前PAEs的污染主要聚集在DBP、DEHP领域，但在各种水体沉积物中也检测到DnOP的存在，预计未来DnOP的污染将是巨大的。目前关于DnOP的研究报道并不多，需要寻找新的或者高效DnOP降解菌。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一株高效降解PAEs的红球菌及其应用。
[0004]具体的技术方案如下：
[0005]红球菌(Rhodococcus sp.)AH
‑
ZY2的筛选及鉴定
[0006]1、采集土壤样品：从云南省昆明市土壤(102
°
10
′
E,24
°
23
′
N)取土样，无菌取样管保存。
[0007]2、筛选：取5g土样加25ml水，震荡混匀后，自然沉淀30min，分别吸取上清2ml到50ml LB，LB中培养。培养3天后，取2mL上层液体加入100mL BSM培养基中(加有100mg/L DEP、100mg/L DBP，100mg/L DEHP，100mg/L DnOP)，30℃，180r/min培养4天。然后取2mL培养物转移至新的100mL BSM培养基中(加有100mg/L DEP、100mg/L DBP，100mg/L DEHP，100mg/L DnOP)重复上述培养过程。转移数次后，将最后的培养液稀释涂布至LB平板。
[0008]3、PAEs降解菌的鉴定：所得菌株参考伯杰氏系统细菌学手册(2012)进行生理生化实验鉴定以及16S rDNA序列测序比对，确定所得菌株的菌属。
[0009]对所得菌株的PAEs降解能力测试及应用实验如下：
[0010]1、测试菌株在48h内分别对500mg/L DMP、DEP、DPrP、DBP、BBP、DEHP、DnOP、DiNP的降解情况；
[0011]2、测试菌株在16h内以500mg/L的DnOP为唯一碳源的生长及降解情况。
[0012]红球菌(Rhodococcus sp.)AH
‑
ZY2，保藏编号：CCTCC NO:M 2023231，保藏时间：
2023年3月2日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武昌区珞珈山武汉大学生命科学学院。
[0013]本专利技术的有益效果在于：该菌株在48h内可将500mg/L的DPrP、DBP、DnOP降解将近100％，对短链和长侧链的PAEs都有着显著降解效果。该菌株在16h内可将500mg/L的DnOP完全降解，是目前报道的对DnOP降解效果最强的菌株。
附图说明
[0014]图1为红球菌AH
‑
ZY2在LB平板上菌落形态；
[0015]图2为红球菌AH
‑
ZY2的透射电镜图片；
[0016]图3为红球菌AH
‑
ZY2的革兰氏染色结果图；
[0017]图4为序列进化树；
[0018]图5为红球菌AH
‑
ZY2对多种PAEs降解能力测试结果；
[0019]图6为红球菌AH
‑
ZY2对500mg/L的DnOP生长及降解能力测试结果。
具体实施方式
[0020]下面结合实施例和说明书附图对本专利技术做进一步地说明，但本专利技术的保护范围并不仅限于此。
[0021]实施例1
[0022]样品来源：从云南省昆明市土壤(102
°
10
′
E,24
°
23
′
N)取土样，无菌取样管保存。
[0023]筛选：取5g土样加25ml水，震荡混匀后，自然沉淀30min，分别吸取上清2ml到50ml LB，LB中培养。培养3天后，取2mL上层液体加入100mL BSM培养基中(加有100mg/L DEP、100mg/L DBP，100mg/L DEHP，100mg/L DnOP)，30℃，180r/min培养4天。然后取2mL培养物转移至新的100mL BSM培养基中(加有100mg/L DEP、100mg/L DBP，100mg/L DEHP，100mg/L DnOP)重复上述培养过程。转移数次后，将最后的培养液稀释涂布至LB平板。
[0024]如图1和图2所示，菌株AH
‑
ZY2在LB板上菌落呈橙红色，表面无褶皱，光滑圆润，边缘整齐，无臭味。
[0025]生理生化实验及唯一碳源利用特性：对菌株AH
‑
ZY2进行了一些生理生化实验的鉴定，结果如表1所示；另外，还检测了其对8种唯一碳源的利用特性，结果如表2所示。并且，在表1和表2中，“+”表示检测结果为阳性，
“‑”
表示检测结果为阴性，革兰氏染色结果如图3所示，红色为不动杆菌，紫色为菌株AH
‑
ZY2。
[0026]表1菌株AH
‑
ZY2的生理生化实验结果
[0027]生化实验AH
‑
ZY2革兰氏染色+过氧化氢酶+酪蛋白水解
‑
脲酶
‑
V
‑
P
‑
甲基红
‑
明胶液化
‑
[0028]表2菌株AH
‑
ZY2的唯一碳源利用特性
[0029][0030][0031]依据16S rDNA测序比对结果，进行进化分析，如图4所示，显示其与Rhodococcus具有最近的亲缘关系，因此结合生理生化与16S rDNA鉴定结果，将菌株定名为Rhodococcussp.AH
‑
ZY2。
[0032]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株红球菌(Rhodococcus sp.)AH
‑
ZY2，保藏编号：CCTCC NO:M 2023231，保藏时间：2023年3月2日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武昌区珞珈山武汉大学生命科学学院。2.一种如权利要求1所述的红球菌的筛选方法，其特征在于包括如下步骤：取土壤，加水，振荡混匀后，自然沉淀，分别吸取上清2ml到50ml LB，LB中培养。培养3天后，取2m...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟卫鸿，陈晓望，侯正雨，应彤彤，刘腾飞，梅程宇，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：