本发明专利技术涉及一种幽门螺旋杆菌荧光检测试剂盒及其制备方法，通过点击化学反应将荧光染料吲哚菁绿
【技术实现步骤摘要】
一种幽门螺旋杆菌荧光检测试剂盒及其应用
[0001]本专利技术涉及一种幽门螺旋杆菌荧光检测试剂盒及其应用，属于生物
技术介绍
幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori,H. pylori）是一种革兰氏阴性螺旋状病原菌。1994年世界卫生组织（WHO）定义幽门螺旋杆菌为Ｉ类致癌原，2017年幽门螺旋杆菌又出现在世卫组织国际癌症研究机构公布的一类致癌物清单中（Leung WK, Wong LO, Cheung KS, et al. Effects of H. pylori treatment on gastric cancer incidences in olderindividuals, Gastroenterology, 2018）。在一项长达16年的随访研究中，证实幽门螺旋杆菌感染是胃癌形成的最主要原因（Robertino MM, et al. Dynamics of helicobacter pylori infection as a determinant of progression of gastricprecancerous lesions: 16
‑
year follow
‑
up of an eradication trial, Gut, 2016）。
[0002]目前，临床上常用的检测方法主要是
13
C或者
14
C尿素呼气试验，通过检测数值判断幽门螺旋杆菌的感染程度，无法对感染区域进行定位。ICG是美国食品药品监督管理局唯一批准的菁染料药，安全无毒，被广泛应用于临床，如原发性肝癌分化程度的初步鉴别、术中肿瘤边界界定等。
[0003]目前，尚未有利用幽门螺旋杆菌特异性抗体与ICG偶联合成探针检测幽门螺旋杆菌感染的报道。
技术实现思路
[0004]本专利技术旨在提供一种特异性强、灵敏度高、分辨率高的幽门螺旋杆菌荧光检测探针。
[0005]本专利技术的再一目的在于提供包含幽门螺旋杆菌荧光检测探针的试剂盒。
[0006]本专利技术的又一目的在于提供上魔神试剂盒的应用。
[0007]本专利技术提供一种特异性强、灵敏度高、分辨率高的幽门螺旋杆菌荧光检测探针，将荧光染料吲哚菁绿
‑
马来酰亚胺（ICG
‑
Mal）的马来酰亚胺基团与幽门螺旋杆菌单克隆抗体（HpAb）的巯基基团进行点击化学反应从而共价偶联，形成具有荧光特性的新型幽门螺旋杆菌检测探针。
[0008]本专利技术还提供了包括上述探针的幽门螺旋杆菌荧光检测试剂盒。
[0009]用于幽门螺旋杆菌的检测，具有异性强、灵敏度高、分辨率高的技术效果。
[0010]进一步的，所述幽门螺旋杆菌荧光检测试剂盒由试剂A、B、C组成，其中，试剂A为ICG
‑
Mal母液，浓度为0.1
‑
2 mg/mL，包括0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2 mg/mL，最优为1 mg/mL；试剂B为HpAb母液，浓度为5
‑
40 ug/mL，包括5、10、15、20、25、30、35或40 ug/mL，最优为20 ug/mL；试剂盒试剂C为生理盐水。
[0011]本专利技术还提供了一种幽门螺旋杆菌荧光检测试剂盒的应用：取100 uL试剂A加入100 uL试剂B中混合，室温下避光反应2 h，使马来酰亚胺基团与巯基偶联得到混合液；将2 mL试剂C加入上述混合液中进行稀释；稀释后，溶液滴加于样品上，30 min后除去非特异性吸附的染料，即可进行荧光检测。
[0012]本专利技术所述吲哚菁绿
‑
马来酰亚胺，其结构如下所示:本专利技术提供了一种新型幽门螺旋杆菌荧光检测探针具有特异性强、灵敏度高、分辨率高等特点。本专利技术提供了一种利用该探针的新型幽门螺旋杆菌荧光检测试剂盒及产品应用，试剂盒具有操作简单的特点。利用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜，实现对幽门螺旋杆菌感染区域的成像检测，
附图说明
[0013]图1为幽门螺旋杆菌光学显微图；图2为荧光探针对幽门螺旋杆菌检测的激光共聚焦成像图。
具体实施方式
[0014]下面通过实施例对本专利技术作进一步说明。但是本专利技术不限于所给出的例子。
[0015]实施例1：试剂盒中，试剂A为ICG
‑
Mal母液，浓度为1 mg/mL。
[0016]试剂盒中，试剂B为HpAb母液，浓度为20 ug/mL。
[0017]试剂盒试剂C为500 mL生理盐水。
[0018]表1为试剂盒成分组成：用于幽门螺旋杆菌检测的使用方法：取100 uL试剂A加入100 uL试剂B中混合，室
温下避光反应2 h，使马来酰亚胺基团与巯基偶联。将2 mL试剂C加入上述混合液中进行稀释。稀释后，溶液滴加于幽门螺旋杆菌溶液，30 min后离心重悬，进行荧光检测，表明试剂盒可实现对幽门螺旋杆菌的成像检测。幽门螺旋杆菌光学显微图见图1。如图2为荧光探针对幽门螺旋杆菌检测的激光共聚焦成像图。
[0019]实施例2：试剂盒中，试剂A为ICG
‑
Mal母液，浓度为2 mg/mL。
[0020]试剂盒中，试剂B为HpAb母液，浓度为40 ug/mL。
[0021]试剂盒试剂C为500 mL生理盐水。
[0022]用于幽门螺旋杆菌感染的胃组织检测的使用方法：取100 uL试剂A加入100 uL试剂B中混合，室温下避光反应2 h，使马来酰亚胺基团与巯基偶联。将2 mL试剂C加入上述混合液中进行稀释。稀释后，溶液滴加于幽门螺旋杆菌感染的胃组织表面，30 min后用试剂C冲洗，进行荧光检测。
本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种荧光特性的新型幽门螺旋杆菌检测探针，其特征在于：幽门螺旋杆菌单克隆抗体（HpAb）的巯基基团与荧光染料吲哚菁绿
‑
马来酰亚胺（ICG
‑
Mal）的马来酰亚胺基团共价偶联，形成具有荧光特性的新型幽门螺旋杆菌检测探针。2.一种幽门螺旋杆菌荧光检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的具有荧光特性的新型幽门螺旋杆菌检测探针。3.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌荧光检测试剂盒，其特征在于包含试剂A、B、C；其中，试剂A是浓度为0.1
‑
2 mg/mL的ICG
‑
Mal母液；试剂B是浓度为5
‑
40 ug/mL的HpAb母液；试剂C为生理盐水。4.根据权利要求3所述的幽门螺旋杆菌荧光检测试剂盒，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔大祥，宋存峰，彭家伟，
申请(专利权)人：上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。