青岛文昌鱼免疫相关Amphip38蛋白的制备与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种青岛文昌鱼免疫相关Amphip38蛋白的制备及应用。本发明专利技术从青岛文昌鱼为中首次筛选克隆了Amphip38基因，明确了Amphip38在青岛文昌鱼里的表达及进化分析，为脊椎动物免疫系统的发育提供理论基础。脊椎动物免疫系统的发育提供理论基础。脊椎动物免疫系统的发育提供理论基础。

【技术实现步骤摘要】
青岛文昌鱼免疫相关Amphip38蛋白的制备与应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及青岛文昌鱼免疫相关Amphip38蛋白的制备与应用。

技术介绍

[0002]随着学术界对文昌鱼里存在着参与免疫作用分子的高度关注，文昌鱼自然成为了研究脊椎动物免疫系统起源与进化以及探讨无脊椎动物和脊椎动物免疫系统连接关系的理想实验动物模型。p38最早是Weinstein等用LPS刺激巨噬细胞发现的酪氨酸磷酸化蛋白质之一(Weinstein et al.,1992)，但是却没有弄清楚它到底是什么蛋白质。Han等人在1994年分离克隆出此蛋白，由360个氨基酸组成，其分子量为38kDa，因此称之为p38α(Han et al.,1994)。之后发现了p38的其它三个亚型，即p38β、p38γ、p38δ，其cDNA分别编码372、367和366个氨基酸的多肽。p38的四个亚型的氨基酸序列非常相近，这些亚型之间有一定的组织分布差异：p38α和p38β在各种组织中普遍表达，p38γ主要在肌肉中表达，p38δ主要在腺体组织中表达(Jiang et al.,1996；Jiang et al.,1997；Kondoh et al.,2005；Li et al.,1996)。p38被认为是调控应激和炎症重要的信号传递者，参与了对多种炎症细胞因子和多种类型炎症转录因子的调控。St
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Denis等发现用LPS刺激大鼠巨噬细胞可使细胞内p38磷酸化，而抑制p38的磷酸化可以抑制甚至完全阻断巨噬细胞内TNF
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>α的产生，说明炎症反应中TNF
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α的产生同p38的激活有密切相关(Nick et al.,1999；St
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Denis et al.,1998)。应用p38特异抑制剂SB203580能明显抑制NF
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kB和AP
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1的激活，间接地下调炎症细胞因子TNF
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α、IL
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1的表达，改善炎症反应(Dong et al.,2006)。p38的激活除了能促进单核巨噬细胞产生TNF
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α、IL
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1、IL
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4、IL
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6、IL
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8、IL
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12等炎症因子外，还可介导IL
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10参与的免疫抑制反应。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的之一是提供一种从青岛文昌鱼中筛选的抗病免疫Amphip38基因的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0004]本专利技术的目的之二是提供编码所述蛋白的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0005]本专利技术的目的之三是提供含有所述蛋白的基因的载体，以及含有编码所述抗病免疫基因蛋白的基因或含有所述载体的宿主细胞。
[0006]本专利技术的目的之四是提供所述抗病免疫基因蛋白在制备青岛文昌鱼抗病制剂中的应用。
[0007]本专利技术的目的之五是提供编码所述抗病免疫基因蛋白的基因或所述的载体在制备转基因青岛文昌鱼中的应用。
[0008]本专利技术从青岛文昌鱼为中首次筛选克隆了Amphip38基因，明确Amphip38在青岛文昌鱼里的表达及进化分析，为脊椎动物免疫系统的发育提供理论基础。
附图说明
[0009]图1为青岛文昌鱼Amphip38基因和佛罗里达文昌鱼Amphip38基因的同源性比较。
[0010]图2为青岛文昌鱼Amphip38蛋白和佛罗里达文昌鱼Amphip38蛋白的同源性比较。
[0011]图3为Amphip38在青岛文昌鱼成体组织的表达。其中，ee为external epithelium表皮，en为endostyle内柱，go为gonad生殖腺，hc为hepatic caeca肝盲囊，in为intestine肠，mu为muscle肌肉，nc为neural cord神经管，no为notochord脊索，pg为pharyngeal gill咽鳃区，标尺：200μm。
[0012]图4为青岛文昌鱼Amphip38蛋白的同源性分析。
[0013]图5为青岛文昌鱼Amphip38蛋白的进化分析。
[0014]图6为Amphip38在线分析结果。其中，A为β
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转角，B为表面可及性，C为可塑性，D为抗原性，E为亲水性，F为优势线性表位。
[0015]图7为重组质粒pet
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29b(+)
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p38转染表达菌株BL21(DE3)后重组表达结果。其中，1：重组质粒转染表达菌株0.5mMIPTG诱导2h；2：重组质粒转染表达菌株1.0mMIPTG诱导2h；3：重组质粒转染表达菌株0.5mMIPTG诱导4h；4：重组质粒转染表达菌株1.0mMIPTG诱导4h；5：重组质粒转染表达菌株0.5mMIPTG诱导6h；6：重组质粒转染表达菌株1.0mMIPTG诱导6h；M:Blue Plus
TM II Protein Marker(14kDa
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100kDa)；7：重组质粒转染表达菌株0.5mMIPTG诱导8h；8：重组质粒转染表达菌株1.0mMIPTG诱导8h；9：重组质粒转染表达菌株0.5mMIPTG诱导10h；10：重组质粒转染表达菌株1.0mMIPTG诱导10h；11：重组质粒转染表达菌株诱导前。
[0016]图8为重组质粒pet
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29b(+)
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p38扩大表达结果。其中，M:Blue PlusTM II Protein Marker(14kDa
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100kDa)；1:诱导前菌液蛋白；2：0.5mMIPTG诱导4h后菌液蛋白；3：诱导后超声破碎上清；4：诱导后超声破碎沉淀。
[0017]图9为重组蛋白表达后纯化结果。其中，M:Blue PlusTM II Protein Marker(14kDa
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100kDa)；1:纯化后的pet
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29b(+)
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p38重组蛋白。
[0018]图10为重组蛋白纯化后复性结果。其中，M:Blue PlusTM II Protein Marker(14kDa
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100kDa)；1:纯化后的pet
‑
29b(+)
‑
p38重组蛋白；2：复性后的pet
‑
29b(+)
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p38重组蛋白。
[0019]图11为鼠抗Amphip38多抗检测p38在青岛文昌鱼成体组织中的表达。其中，ee:external epithelium表皮hc:hepatic caeca肝盲囊nc:neural cord神经管no:notochord脊索in:intestine肠mu:muscle肌肉bs:branchial slit鳃裂en:endostyle本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种从青岛文昌鱼中筛选的抗病免疫Amphip38基因的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.编码权利要求1所述蛋白的基因。3. 根据权利要求2所述的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.含有权利要求2或3所述的基因的载体。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏金环，刘召民，陈忠科，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：