一种抗人Ki-67抗体及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及抗体基因工程技术领域，特别是涉及一种抗人Ki

【技术实现步骤摘要】
一种抗人Ki
‑
67抗体及其制备方法和用途


[0001]本专利技术涉及抗体基因工程
，特别是涉及一种抗人Ki
‑
67抗体及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]Ki
‑
67抗原是一种与细胞增殖有关的核蛋白，分子量大小为320kDa或359kDa。Ki
‑
67抗原代表细胞增殖水平，是一个可靠而迅速地反映恶性肿瘤增值率的指标，其高表达是细胞增殖活跃的重要标记。细胞周期调节机制和细咆凋亡在多数恶性肿瘤的进程中有一定的内在联系，许多研究表明Ki
‑
67蛋白表达的精确调控、分布是细胞增殖、完成细胞周期所不可或缺的。此外，Ki
‑
67还与核糖体RNA转录有关。Ki
‑
67存在于细胞分裂周期G1、S、M和G2期，但在细胞静止期G0期不表达。此抗体已被证明可用于标记正常和肿瘤细胞中的Ki
‑
67抗原，包括软组织肉瘤、前列腺腺癌和乳腺癌。
[0003]作为一种核增殖抗原，对于Ki
‑
67在癌症中的研究有广阔的前景，其不仅对癌症的发生、发展有很好的预见与诊断性，而且对其在基因水平的研究使其在癌症肿瘤的治疗和预后上都有很高的价值。因此，开发出一种染色性能强、敏感度高的ki
‑
67诊断抗体对于肿瘤的诊断和研究具有重要意义。

技术实现思路

[0004]鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种抗人Ki
‑/>67抗体及其制备方法和用途，用于解决现有技术中染色性能强、敏感度高的ki
‑
67诊断抗体的问题。
[0005]为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种抗人Ki
‑
67抗体，所述抗人Ki
‑
67抗体包含轻链和重链，所述轻链包含如下特征的一项或多项：
[0006]1)所述轻链包含如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；
[0007]2)与SEQ ID No.2所示的氨基酸序列具有90％以上同一性、且具有1)所限定的氨基酸序列功能的氨基酸序列。
[0008]优选地，所述重链包含如下特征的一项或多项：
[0009]3)所述轻链包含如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；
[0010]4)与SEQ ID No.3所示的氨基酸序列具有90％以上同一性、且具有3)所限定的氨基酸序列功能的氨基酸序列。
[0011]本专利技术还提供一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含编码前述抗人Ki
‑
67抗体的核苷酸序列。
[0012]本专利技术还提供一种核酸构建体，所述核酸构建体包含前述多核苷酸。
[0013]本专利技术还提供一种分离的细胞，所述细胞包含前述多核苷酸或前述核酸构建体。
[0014]本专利技术还提供一种制备所述抗人Ki
‑
67抗体的抗原，所述抗原为多肽；编码所述多肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0015]本专利技术还提供前述抗人Ki
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67抗体在制备Ki67抗原检测产品中的用途。
[0016]本专利技术还提供前述抗原在制备抗人Ki
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67抗体中的用途。
[0017]本专利技术还提供一种肿瘤诊断试剂盒，所述肿瘤诊断试剂盒包含诊断有效剂量的所述抗人Ki
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67抗体或其免疫偶联物。
[0018]本专利技术还提供一种制备Ki
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67抗体的产品，所述产品中包含所述抗原和/或佐剂。
[0019]本专利技术还提供前述抗人Ki
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67抗体的制备方法，所述制备方法选自下列的任一项：
[0020]A)将核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的多核苷酸编码的多肽与弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂混合，注入免疫动物体内，分离、纯化免疫动物的血清以获得所述抗人Ki
‑
67抗体；
[0021]B)培养并裂解前述的细胞，分离、纯化以获得所述抗人Ki
‑
67抗体。
[0022]如上所述，本专利技术的一种抗人Ki
‑
67抗体及其制备方法和用途，具有以下有益效果：
[0023]作为一种针对核增殖抗原Ki
‑
67的抗体，在癌症中的研究有广阔的前景，其不仅对癌症的发生、发展有很好的预见与诊断性，而且对Ki
‑
67在基因水平的研究使抗人Ki
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67抗体在癌症肿瘤的治疗和预后上都有很高的价值。本专利技术提供的Ki
‑
67诊断抗体染色性能强、敏感度高的对于肿瘤的诊断和研究具有重要意义。
附图说明
[0024]图1显示为本专利技术的Ki
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67抗原肽段长度与区域的分布示意图。
[0025]图2显示为本专利技术的Ki
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67抗原考马斯亮蓝染色结果示意图。
[0026]图3显示为本专利技术的Ki
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67抗原表达载体结构示意图。
[0027]图4显示为本专利技术的噬菌体文库酶切载体结构示意图。
[0028]图5显示为本专利技术的细胞固定实验流程示意图。
[0029]图6显示为本专利技术的PCR反应产物积累规律示意图。
[0030]图7显示为本专利技术的BCR序列文库示意图。
[0031]图8显示为本专利技术的Ki
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67抗体重链表达载体结构示意图。
[0032]图9显示为本专利技术的Ki
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67抗体轻链表达载体结构示意图。
[0033]图10显示为本专利技术的ELISA抗体验证结果。
[0034]图11显示为本专利技术的Ki
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67抗体等电点分析结果。
[0035]图12显示为本专利技术的Ki
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67糖型分析结果。
[0036]图13显示为本专利技术的Ki
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67抗体与市售抗体在免疫组化染色食管癌样本的对比结果图。
[0037]图14显示为本专利技术的Ki
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67抗体与市售抗体在免疫组化染色结肠癌样本的对比结果图。
[0038]图15显示为本专利技术的Ki
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67抗体与市售抗体在免疫组化染色扁桃体样本的对比结果图。
[0039]图16显示为本专利技术的Ki
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67抗体与市售抗体在免疫组化染色胎盘样本的对比结果图。
具体实施方式
[0040]本专利技术提供一种抗人Ki
‑
67抗体，所述抗人Ki
‑
67抗体包含轻链和重链，所述轻链包含如下特征的一项或多项：
[0041]1)所述轻链包含如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；
[0042]2)与SEQ ID No.2所示的氨基酸序列具有90％以上同一性、且具有1)所限定的氨基酸序列功能的氨基酸序列。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人Ki
‑
67抗体，其特征在于，所述抗人Ki
‑
67抗体包含轻链和重链，所述轻链包含如下特征的一项或多项：1)所述轻链包含如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；2)与SEQ ID No.2所示的氨基酸序列具有90％以上同一性、且具有1)所限定的氨基酸序列功能的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的抗人Ki
‑
67抗体，其特征在于，所述重链包含如下特征的一项或多项：3)所述重链包含如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；4)与SEQ ID No.3所示的氨基酸序列具有90％以上同一性、且具有3)所限定的氨基酸序列功能的氨基酸序列。3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸包含编码权利要求1或权利要求2所述的抗人Ki
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67抗体的核苷酸序列。4.根据权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，编码所述抗人Ki67抗体中轻链的核苷酸序列包含如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列；和/或，编码所述抗人Ki67抗体中重链的核苷酸序列包含如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。5.一种核酸构建体，其特征在于，所述核酸构建体包含权利要求3
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4任一所述的多核苷酸。6.一种分离的细胞，其特征在于，所述细胞包含权利要求3
‑
4任一所述的多核苷酸或权利要求5所述的核酸构建体。7.一种用于制备权利要求1
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2任一所述的抗人Ki
‑
67抗体的抗原，其特征在于，所述抗原为多肽；编码所述多肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。8.权利要求1
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2任一所述的抗人Ki
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67抗体在制备Ki<...

【专利技术属性】
技术研发人员：季天海，林清源，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属第九人民医院，
类型：发明
国别省市：