痕量总蛋白的快速检测方法技术

痕量总蛋白的快速检测方法，它涉及一种痕量总蛋白的检测方法。本发明专利技术的目的是为了解决现有蛋白快速检测方法中检出限高的技术问题，为其提供了一种痕量蛋白的快速检测方法。本发明专利技术中痕量蛋白检测反应底物由考马斯亮蓝G250粉末、浓度为95％的乙醇、磷酸和三蒸水制成。本发明专利技术方法可用于浓度仅为0.5～20mg/L的痕量蛋白检测，检测过程用时短、检测数据准确、稳定性高。高。高。

【技术实现步骤摘要】
痕量总蛋白的快速检测方法
[0001]本专利技术专利申请是由申请号为201910121733.3，申请日为2019年02月19日，专利技术名称为“痕量蛋白检测反应底物及痕量蛋白的快速检测方法”的专利技术专利分出的分案申请。


[0002]本专利技术涉及一种痕量总蛋白的检测方法。

技术介绍

[0003]现有方法中对痕量总蛋白(0.5～20mg/L)检测常采用高压液相色谱、抗原抗体结合等方法，但是这些方法所需实验材料或设备昂贵，实验过程复杂、导致检出成本高、耗时长(至少1～2天)，因此只适合实验室研究水平检测，不适合工业化生产和质量监控中的快速检测。而且目前可用于快速蛋白检测的方法检出限高，不能满足痕量总蛋白(0.5～20mg/L)检测的需要。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是为了解决现有蛋白快速检测方法中检出限高的技术问题，为其提供了一种痕量总蛋白的快速检测方法。
[0005]本专利技术痕量总蛋白检测反应底物500mL由0.05g考马斯亮蓝G250粉末、25mL浓度为95％的乙醇、65mL磷酸和余量的三蒸水制成。
[0006]本专利技术痕量总蛋白的快速检测方法按照以下步骤进行：
[0007]一、配制梯度标准蛋白液，梯度标准蛋白液分为N个浓度，梯度标准蛋白液中蛋白的浓度最小为0mg/L、蛋白的浓度最大为20mg/L～30mg/L；
[0008]二、将痕量总蛋白待测样品制成溶液；
[0009]三、将步骤一配制的各浓度的梯度标准蛋白液与痕量总蛋白待测样品溶液等体积分别加入酶标板，然后加入上述痕量总蛋白检测反应底物，避光静置反应10～30分钟，再将酶标板置于酶标仪中，在560nm～610nm下检测反应溶液的吸光值；
[0010]四、获得标准曲线公式：
[0011]梯度标准蛋白液中蛋白浓度为0mg/L样品测得的吸光值称为本底，其余浓度梯度标准蛋白液测得的吸光值减去本底获得各自对应的标准吸光值；以标准吸光值为纵坐标，梯度标准蛋白液浓度为横坐标，绘制标准曲线散点图，得到标准曲线公式；
[0012]五、痕量总蛋白待测样品吸光值减去本底后获得相对吸光值，将相对吸光值带入标准曲线公式，计算得到痕量总蛋白待测样品的蛋白含量。
[0013]本专利技术方法可用于浓度仅为0.5～20mg/L的痕量总蛋白检测，检测过程用时短、检测数据准确、稳定性高。
附图说明
[0014]图1是本专利技术实验一中蛋白浓度测定标准曲线图。
[0015]图2是实施例6对比试验检测结果图。
具体实施方式
[0016]本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
[0017]具体实施方式一：本实施方式痕量总蛋白快速检测方法按照以下步骤进行：
[0018]一、配制梯度标准蛋白液，梯度标准蛋白液分为N个浓度，梯度标准蛋白液中蛋白的浓度最小为0mg/L、蛋白的浓度最大为20mg/L～30mg/L；
[0019]二、将痕量总蛋白待测样品制成溶液；
[0020]三、将步骤一配制的各浓度的梯度标准蛋白液与痕量总蛋白待测样品溶液等体积分别加入酶标板，然后加入痕量总蛋白检测反应底物，避光静置反应10～30分钟，再将酶标板置于酶标仪中，在560nm～610nm下检测反应溶液的吸光值；
[0021]四、获得标准曲线公式：
[0022]梯度标准蛋白液中蛋白浓度为0mg/L样品测得的吸光值称为本底，其余浓度梯度标准蛋白液测得的吸光值减去本底获得各自对应的标准吸光值；以标准吸光值为纵坐标，梯度标准蛋白液浓度为横坐标，绘制标准曲线散点图，得到标准曲线公式；
[0023]五、痕量总蛋白待测样品吸光值减去本底后获得相对吸光值，将相对吸光值带入标准曲线公式，计算得到痕量总蛋白待测样品的蛋白含量。
[0024]标准曲线公式中R2>0.99。
[0025]本实施方式500mL痕量总蛋白检测反应底物由0.05g考马斯亮蓝G250粉末、25mL浓度为95％的乙醇、65mL磷酸和余量的三蒸水制成。
[0026]本实施方式中梯度标准蛋白液可以由标准的结晶牛血清清蛋白(BSA)或标准酪蛋白制成。
[0027]具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤一中N为4～12的自然数。其它与具体实施方式一相同。
[0028]具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是步骤三中痕量总蛋白检测反应底物与待测样品溶液的体积比为1:1。其它与具体实施方式一或二相同。
[0029]具体实施方式四：本具体实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是步骤三中痕量总蛋白检测反应底物的体积为60～140μL。其它与具体实施方式一至三之一相同。
[0030]具体实施方式五：本具体实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是步骤三中痕量总蛋白检测反应底物的体积为100～130μL。其它与具体实施方式一至四之一相同。
[0031]具体实施方式六：本具体实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是步骤三中在595nm下检测反应溶液的吸光值。其它与具体实施方式一至五之一相同。
[0032]具体实施方式七：本具体实施方式与具体实施方式一至六之一不同的是步骤三中避光静置反应15分钟。其它与具体实施方式一至六之一相同。
[0033]具体实施方式八：本具体实施方式500mL痕量总蛋白检测反应底物由0.05g考马斯亮蓝G250粉末、25mL浓度为95％的乙醇、65mL磷酸和余量的三蒸水制成。
[0034]本具体实施方式痕量总蛋白检测反应底物的配制方法：乙醇中加入考马斯亮蓝G250粉末磁力搅拌，待考马斯亮蓝G250粉末完全溶解后再加入磷酸搅拌溶解，最后加三蒸
水定容。痕量总蛋白检测反应底物用中性滤纸过滤至棕色瓶中或避光，置于4℃保藏。
[0035]实施例1
[0036]标准曲线公式的验证
[0037]一、配制梯度标准蛋白液，制成浓度分别为0mg/L、3mg/L、6mg/L、9mg/L、12mg/L、15mg/L、18mg/L、21mg/L的标准蛋白液；
[0038]二、在酶标板中分别加入0mg/L、3mg/L、6mg/L、9mg/L、12mg/L、15mg/L、18mg/L、21mg/L的标准蛋白液各100μL，然后加入痕量总蛋白检测反应底物100μL，避光静置反应10分钟，再将酶标板置于酶标仪中，在595nm下检测反应溶液的吸光值；
[0039]三、获得标准曲线公式：
[0040]梯度标准蛋白液中蛋白浓度为0mg/L样品测得的吸光值称为本底，其余浓度梯度标准蛋白液测得的吸光值减去本底获得各自对应的标准吸光值；以标准吸光值为纵坐标，梯度标准蛋白液浓度为横坐标，绘制标准曲线散点图，得到标准曲线公式。
[0041]本实施例得到标准曲线方程为：y＝0.0101x+0.0092，R2＝0.9922。
[0042]实验结果如图1所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.痕量总蛋白检测方法，其特征在于痕量总蛋白检测方法按照以下步骤进行：一、配制梯度标准蛋白液，梯度标准蛋白液分为N个浓度，梯度标准蛋白液中蛋白的浓度最小为0mg/L、蛋白的浓度最大为20mg/L～30mg/L；二、将痕量总蛋白待测样品制成溶液；三、将步骤一配制的各浓度的梯度标准蛋白液与痕量总蛋白待测样品溶液等体积的分别加入酶标板，然后加入痕量总蛋白检测反应底物，避光静置反应10～30分钟，再将酶标板置于酶标仪中，在560nm～610nm下检测反应溶液的吸光值；四、获得标准曲线公式：梯度标准蛋白液中蛋白浓度为0mg/L样品测得的吸光值称为本底，其余浓度梯度标准蛋白液测得的吸光值减去本底获得各自对应的标准吸光值；以标准吸光值为纵坐标，梯度标准蛋白液浓度为横坐标，绘制标准曲线散点图，得到标准曲线公式；五、痕量总蛋白待测样品吸光值减去本底后获得相对吸光值，将相对吸光值带入标准曲线公式，计算得...

【专利技术属性】
技术研发人员：周晓辉，卢天华，刘军，
申请(专利权)人：河北太美生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：