快速、免分离检测血清中多巴胺的生物传感器及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种快速、免分离检测血清中多巴胺的生物传感器及其制备方法与应用。本发明专利技术的检测多巴胺的生物传感器包含Ag2Se量子点标记的多巴胺核酸适体探针、生物素化的与所述多巴胺适配体序列互补的DNA、链霉亲和素，三者之间通过多巴胺核酸适体

【技术实现步骤摘要】
快速、免分离检测血清中多巴胺的生物传感器及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于神经递质小分子多巴胺的医学检测与荧光各向异性免疫分析法的交叉领域，具体涉及一种快速、免分离检测血清中多巴胺的生物传感器及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]多巴胺(dopamine,DA)是一种重要的儿茶酚胺小分子神经递质，其在中枢神经系统中发挥着重要的作用。其主要功能是帮助细胞传递冲动，从而可以传递大脑的欲望、感觉以及兴奋等信息。阿尔维德
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卡尔森因发现多巴胺在大脑中作为信息传递者的作用获得了2000年诺贝尔生理或医学奖。除此之外，一些成瘾行为也与多巴胺密切相关，比如酒精成瘾、沉迷赌博等。一些神经系统疾病，比如阿尔茨海默症、帕金森症和注意力缺陷多动症也会因多巴胺的异常而引起。因此，多巴胺的检测在临床诊断以及相关疾病的发病机制研究中具有重要意义。目前对于多巴胺的检测已经受到了广泛的关注，多种检测方法也被相继提出，包括酶联免疫法、比色法、电化学法、高效液相色谱法等等。现有的方法存在操作复杂，基质自发干扰强等局限性。开发一种简单、快速、灵敏以及适合复杂基质的多巴胺检测方法是十分重要的。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于克服现有技术存在的缺点与不足，提供一种能够检测复杂基质中的多巴胺的生物传感器及其制备方法与应用，所述的生物传感器能够快速、免分离检测血清中的多巴胺。
[0004]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0005]一种检测多巴胺的生物传感器，其包含Ag2Se量子点标记的多巴胺核酸适体探针(DFAP)、生物素化的与所述多巴胺适配体序列互补的DNA(c
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DNA)、链霉亲和素(SA)，三者之间通过多巴胺核酸适体
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互补DNA、生物素
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链霉亲和素结合，形成生物传感器，称为DFAP
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SAB。与所述多巴胺适配体序列互补的DNA，其5
’
端序列与多巴胺适配体部分序列互补，用于使多巴胺核酸适体与互补DNA结合；3
’
端序列与多巴胺适配体序列不互补，用于降低空间位阻。
[0006]其中，所述的Ag2Se量子点标记的多巴胺核酸适体探针优选通过包括如下步骤的方法得到：
[0007](1)使用辛胺接枝的聚丙烯酸(OPA)对疏水性Ag2Se量子点进行水溶化修饰，得到亲水且表面包覆羧基的Ag2Se
‑
OPA量子点。可以参照公开号为CN114814197A的专利申请《一种FSAP检测探针及其制备方法与应用》中的方法制备亲水且表面包覆羧基的Ag2Se
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OPA量子点。
[0008](2)Ag2Se
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OPA
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NH2量子点的制备：亲水且表面包覆羧基的Ag2Se
‑
OPA量子点与两端带有氨基的PEG(NH2‑
PEG
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NH2)进行酰胺化反应，得到的Ag2Se
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OPA
‑
NH2量子点。
[0009](3)DFAP探针的制备：Ag2Se
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OPA
‑
NH2量子点与一端带有羧基的多巴胺适配体(DA
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Apt)经酰胺化反应得到Ag2Se量子点标记的多巴胺核酸适体探针。
[0010]进一步地，所述步骤(2)Ag2Se
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OPA
‑
NH2量子点的制备具体包括如下步骤：将Ag2Se
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OPA量子点分散在硼酸盐缓冲液(pH＝7.4，50mM)中，先加入EDC活化表面羧基，后加入两端带有氨基的PEG(NH2‑
PEG
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NH2)在22
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28℃下反应3
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4h，加入硼酸盐缓冲液(pH＝8.4，50mM)终止反应，得到氨基功能化的Ag2Se
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OPA
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NH2量子点。其中，Ag2Se
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OPA量子点与PEG的质量比优选为1：(2～3)。
[0011]进一步地，所述步骤(3)DFAP探针的制备具体包括如下步骤：将Ag2Se
‑
OPA
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NH2量子点与一端带有羧基的多巴胺适配体分散在PBS中，加入EDC在22
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28℃条件下反应4
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5h，得到DFAP探针。
[0012]所述的检测多巴胺的生物传感器的制备方法，包括如下步骤：将Ag2Se量子点标记的多巴胺核酸适体探针与生物素化的互补DNA分散在PBS中，在22
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28℃温度下反应1
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2h，再加入链霉亲和素反应0.5
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1h结合，得到DFAP
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SAB生物传感器。
[0013]所述的检测多巴胺的生物传感器，在添加多巴胺的情况下，Ag2Se量子点标记的多巴胺核酸适体探针与多巴胺的特异性识别导致探针从链霉亲和素的表面释放，通过监测荧光各向异性的变化值能够实现检测多巴胺。所述的生物传感器具有检测多巴胺的应用，以及制备多巴胺检测产品的应用。
[0014]所述的生物传感器检测多巴胺的原理为：将生物传感器放入荧光仪样品池中，设置荧光仪的激发、发射波长等参数，选择荧光偏振系统，测量得到空白传感器的荧光各向异性值。待测样品与生物传感器混合孵育后，由于多巴胺与多巴胺适配体的特异性结合，使得互补链从传感器上脱落，再次测定其荧光各向异性值。通过计算两次测量之间的差值实现对多巴胺的定量检测。
[0015]一种检测多巴胺的试剂盒，包含所述的检测多巴胺的生物传感器，还包含荧光仪样品池。
[0016]所述的检测多巴胺的试剂盒的使用方法，包括如下步骤：将生物传感器放入荧光仪样品池中，测量其荧光各向异性值；再将与待测样品混合孵育后的生物传感器放入荧光仪样品池中，测量其荧光各向异性值；根据荧光各向异性值差值与多巴胺浓度水平的关系曲线计算待测样品中多巴胺的浓度。
[0017]所述的荧光各向异性值差值与多巴胺浓度水平的关系曲线通过包括如下步骤的方法得到：将生物传感器放入荧光仪样品池中，测量其荧光各向异性值；再将已知梯度浓度的多巴胺分别与生物传感器孵育，放入荧光仪样品池，测量其荧光各向异性值；通过计算前后测量的荧光各向异性值的差值，构建其与多巴胺浓度水平的关系曲线。
[0018]本专利技术的生物传感器对多巴胺的检测利用了荧光各向异性免疫分析法。本专利技术以近红外二区量子点作为荧光标记物，使用多巴胺适配体构建多巴胺荧光各向异性检测探针，再用链霉蛋白增强信号构建了检测多巴胺的生物传感器。荧光各向异性免疫分析法具有操作简单，样品无需洗涤，适用于均相体系等特点；核酸适配体易于合成修饰、具有高特异性；近红外二区量子点具有耐光漂、抗基质自发荧光干扰的能力，具有良好的光稳定性，这些都为DFAP
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SAB生物传感器应用于复杂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测多巴胺的生物传感器，其特征在于：包含Ag2Se量子点标记的多巴胺核酸适体探针、生物素化的与所述多巴胺适配体序列互补的DNA、链霉亲和素，三者之间通过多巴胺核酸适体
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互补DNA、生物素
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链霉亲和素结合，形成生物传感器。2.根据权利要求1所述的检测多巴胺的生物传感器，其特征在于：所述的Ag2Se量子点标记的多巴胺核酸适体探针通过包括如下步骤的方法得到：(1)Ag2Se
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OPA
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NH2量子点的制备：表面包覆羧基的Ag2Se
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OPA量子点与两端带有氨基的PEG进行酰胺化反应，得到的Ag2Se
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OPA
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NH2量子点；(2)探针的制备：Ag2Se
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OPA
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NH2量子点与一端带有羧基的多巴胺适配体经酰胺化反应得到Ag2Se量子点标记的多巴胺核酸适体探针。3.根据权利要求2所述的检测多巴胺的生物传感器，其特征在于：Ag2Se
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OPA
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NH2量子点的制备包括如下步骤：将Ag2Se
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OPA量子点分散在硼酸盐缓冲液中，先加入EDC活化表面羧基，后加入两端带有氨基的PEG进行反应，得到Ag2Se
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OPA...

【专利技术属性】
技术研发人员：田智全，刘婧，陈明，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：