本发明专利技术属于天然药物化学领域，涉及一种同时制备冬凌草中的多种高附加值化合物(冬凌草甲素、冬凌草乙素和天然植物色素)的方法。将冬凌草粉末经工业乙醇提取，提取液脱色富集收获天然植物色素，脱色后洗脱液经石油醚/乙酸乙酯混合溶剂等度洗脱进行硅胶柱层析获得粗品；粗品纯化即分别获得高纯度冬凌草甲素、冬凌草乙素。本发明专利技术制备方法操作简便、快速高效、绿色环保、各工序之间高度耦合的连续化制备生产冬凌草甲素、乙素和天然植物色素的新方法，产品具有高纯度、高收率和品质稳定的特点，可满足医药研究的需要。医药研究的需要。
【技术实现步骤摘要】
一种同时制备冬凌草中的多种高附加值化合物的方法
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[0001]本专利技术属于天然药物化学领域，涉及一种同时制备冬凌草中的多种高附加值化合物(冬凌草甲素、冬凌草乙素和天然植物色素)的方法。
技术背景：
[0002]冬凌草是唇形科香茶菜属植物碎米桠的干燥地上部分。在民间，关于其具有清热解毒、活性止痛功效的记载由来已久，其广泛被用于治疗咽喉肿痛、蛇虫咬伤等。
[0003]现代医学研究发现，冬凌草主要的活性成分为贝壳杉烷类二萜成分冬凌草甲素和冬凌草乙素。其分子中与环外的亚甲基所共轭的环戊烷酮结构均对多种癌细胞均表现出明显的阻滞作用。同时，冬凌草甲素和乙素有着良好的抗炎、降压、增强免疫力等功效。近些年来，医药领域一直在进行其结构修饰、制药成药和临床应用的探索，对于高纯度冬凌草甲素和乙素的需求量很大。因此亟需探索出一条高效快速、绿色环保的连续化、工业化制备冬凌草甲素和乙素生产路线。
[0004]由于冬凌草的有效部位为地上部分全草，其茎叶中含有的天然植物色素会随着提取过程被带出。一直以来，该部分均被视为杂质，除杂方法包括活性炭脱色、双氧水脱色等，未见对其进行关注和定量检测的相关报道。但天然色素本身就是一种优良的食品添加剂和染色剂，因此在制备冬凌草甲素和冬凌草乙素的同时，建立有效的色素定量分析检测手段，并将其收集纯化将最大程度的利用冬凌草资源，实现经济效益最大化。
[0005]关于“冬凌草中冬凌甲素和乙素制备”的相关专利如下：
[0006]1.山西省医药研究所申请的“冬凌草提取物及其制备方法和应用”(申请号：02151503.4)，内容涉及乙醇加热回流提取、活性炭脱色和中性氧化铝柱层析得到冬凌草甲素和乙素。
[0007]2.陈俊辉等人申请的“一种从冬凌草中提取冬凌草甲素的制备方法”(申请号：200610003497.8)，内容涉及乙醇加热回流提取、有机溶剂混合萃取和硅胶柱层析并用石油醚/丙酮梯度洗脱、甲醇重结晶制备冬凌草甲素。
[0008]3、北京化工大学申请的“一种以冬凌草为原料制备高纯度冬凌草甲素的方法”(申请号：201510185265.8)，内容涉及两次回流提取提取、大孔树脂不同溶剂洗脱除杂、三种溶剂萃取脱色进一步除杂、超声波辅助冷却结晶。
[0009]4、鲁艳清申请的“一种冬凌草甲素的制备方法”(申请号：201410730340.X)，内容涉及乙醇加热回流提取、大孔树脂梯度洗脱、硅胶柱层析并用石油醚/丙酮梯度洗脱、重结晶。
[0010]以上公开内容存在的问题有：
[0011](1)加热回流提取不利于保护甲素结构；提取时间过长降低生产效率，且导致杂质溶出量较大，给后续纯化工艺造成干扰。
[0012](2)各工序之间连续性差，操作繁琐，能耗较大。
[0013](3)并未关注冬凌草中色素的定量检测和收集利用。
[0014](4)仅得到冬凌草甲素纯品，未实现甲乙同时制备；或仅得到冬凌草甲素和乙素的低纯度有效成分，未得到高纯度化合物单体。
[0015]综上所述，目前已有的工艺路线均存在着不利于大规模生产冬凌草甲素、乙素和天然植物色素的问题。
技术实现思路
：
[0016]本专利技术目的在于提供一种同时制备冬凌草中的多种高附加值化合物(冬凌草甲素、冬凌草乙素和天然植物色素)的方法。
[0017]为实现上述目的，本专利技术采用技术方案为：
[0018]一种同时制备冬凌草中的多种高附加值化合物的方法，将冬凌草粉末经工业乙醇提取，提取液脱色收获天然植物色素，脱色后提取物经石油醚/乙酸乙酯混合溶剂等度洗脱进行硅胶柱层析获得粗品；粗品纯化即分别获得高纯度冬凌草甲素、冬凌草乙素。
[0019]进一步的说，将冬凌草粉末用工业乙醇于常温(25
‑
30℃)下提取10
‑
30min得冬凌草乙醇提取液；其中，冬凌草粉末和工业乙醇的质量体积比例(g/ml)为1:10
‑
1:15。
[0020]所述冬凌草乙醇提取液使用非极性大孔吸附树脂进行脱色，得脱色后的冬凌草乙醇液，所得冬凌草乙醇液用乙酸乙酯洗脱大孔树脂上吸附的色素富集，旋干乙酸乙酯后得天然植物色素(冬凌草总色素)。
[0021]所述脱色后洗脱液经石油醚/乙酸乙酯混合溶剂等度洗脱进行硅胶柱层析获得含冬凌草甲素和/或冬凌草乙素的粗品；其中，洗脱方式为等度洗脱，洗脱溶剂为石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:2
‑
1:6。
[0022]所述含冬凌草甲素或冬凌草乙素的粗品经硅胶柱层析，分别获得甲素或乙素精制产品，所得精制品分别用乙醇水重结晶，得到高纯度的冬凌草甲素或冬凌草乙素晶体。
[0023]所述粗品经硅胶柱层析以乙酸乙酯作为溶剂进行洗涤，分别获得甲素或乙素精制产品；其中，洗涤料液比为1：5
‑
1：20(g/ml)。
[0024]所述重结晶为将精制产品溶解于无水乙醇中，溶解温度为70
‑
80℃；而后加入水常温(25
‑
30℃)下进行结晶，结晶时间为8
‑
24h；其中，精制产品与无水乙醇质量体积比(mg/ml)为55
‑
60:1，乙醇和水体积比例为1:2
‑
1:5。
[0025]所述含冬凌草甲素和冬凌草乙素的粗品溶解于脱色后的冬凌草乙醇提取液中，而后经石油醚/乙酸乙酯混合溶剂等度洗脱进行硅胶柱层析纯化。
[0026]所述各步骤采用试剂(例如，树脂柱洗脱用乙酸乙酯，以及等度洗脱采用的石油醚/乙酸乙酯混合溶剂)可回收套用。
[0027]本专利技术与现有专利技术相比，具有突出的实质性特点和显著进步如下：
[0028]1.通过提取、脱色、分离和纯化四个步骤同时制备得到纯度大于98％的冬凌草甲素和冬凌草乙素产品，每个步骤下甲素和乙素的回收率均大于90％。
[0029]2.通过建立冬凌草乙醇提取液中脂溶性色素的定量检测方法，实现冬凌草乙醇提取液脱色过程的跟踪检测，并将冬凌草中总色素进行收集和资源化利用。
[0030]3.各工序之间实现高度集成耦合，操作简洁高效，能耗低。生产全过程所用溶剂只有乙醇、水、石油醚和乙酸乙酯四种，溶剂绿色无毒，且全部可回收套用，显著降低溶剂消耗量和生产成本。
附图说明
[0031]图1为本专利技术实施例提供的冬凌草甲素HPLC图。
[0032]图2为本专利技术实施例提供的冬凌草乙素HPLC图。
具体实施方式：
[0033]以下结合实例对本专利技术的具体实施方式做进一步说明，应当指出的是，此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本专利技术，并不局限于本专利技术。
[0034]本专利技术制备方法操作简便、快速高效、绿色环保、各工序之间高度耦合连续化制备生产冬凌草甲素、乙素和天然植物色素的新方法，产品具有高纯度、高收率和品质稳定的特点，可满足医药研究的需要。
[0035]本专利技术采用常温提取，等度洗脱的方法得到高纯的冬凌草甲素和本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种同时制备冬凌草中的多种高附加值化合物的方法，其特征在于：将冬凌草粉末经工业乙醇提取，提取液脱色富集收获天然植物色素，脱色后洗脱液经石油醚/乙酸乙酯混合溶剂等度洗脱进行硅胶柱层析获得粗品；粗品纯化即分别获得高纯度冬凌草甲素、冬凌草乙素。2.按权利要求1所述的同时制备冬凌草中的多种高附加值化合物的方法，其特征在于：将冬凌草粉末用工业乙醇于常温(25
‑
30℃)下提取10
‑
30min得冬凌草乙醇提取液；其中，冬凌草粉末和工业乙醇的质量体积比例为1:10
‑
1:15。3.按权利要求1所述的同时制备冬凌草中的多种高附加值化合物的方法，其特征在于：所述冬凌草乙醇提取液使用非极性大孔吸附树脂进行脱色，得脱色后的冬凌草乙醇液，所得冬凌草乙醇液用乙酸乙酯洗脱大孔树脂上吸附的色素富集，旋干乙酸乙酯后得天然植物色素(冬凌草总色素)。4.按权利要求1所述的同时制备冬凌草中的多种高附加值化合物的方法，其特征在于：所述脱色后洗脱液经石油醚/乙酸乙酯混合溶剂等度洗脱进行硅胶柱层析获得含冬凌草甲素和/或冬凌草乙素的粗品；其中，洗脱方式为等度洗脱，洗脱溶剂为石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:2
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1:6。5.按权利要求1所述的同时制备冬凌草中的多种高附加值化合物...
【专利技术属性】
技术研发人员：王远，汪思萌，李晓东，陈曦，光海红，于丹萌，王加友，
申请(专利权)人：沈阳化工研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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