包含酰胺键的连接基化合物制造技术

各种实施方案提供了在任一端包含相同官能团的同

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含酰胺键的连接基化合物
[0001]通过引用任何优先权申请而并入本文
[0002]与本申请一起提交的PCT请求中确定了外国或国内优先权要求的任何和所有申请均通过引用结合于此。


[0003]本专利技术涉及一种化合物、制备该化合物的方法以及该化合物作为寡核苷酸和其他化学和生物物质的连接剂的相关用途。

技术介绍

[0004]多聚体形式的治疗剂的制备可能是有利的，因为其提高了生物利用度和吸收。
[0005]生物缀合物(或多缀合物)包含旨在递送至细胞或组织中的至少两种化学或生物物质的共价键连接。生物缀合物具有多种功能，例如标记、成像和跟踪分子和细胞事件、将药物递送到靶细胞以及作为诊断或治疗剂。生物缀合物的非限制性实例包括小分子(例如生物素)与蛋白质的偶联、蛋白质
‑
蛋白质缀合物(例如，与酶偶联的抗体)、抗体药物缀合物(ADC)(例如，与细胞毒性小分子缀合的单克隆抗体)、放射免疫缀合物(例如，与螯合剂缀合的单克隆抗体)、疫苗(例如，与载体蛋白缀合的半抗原)、与纳米颗粒和非细胞毒性药物缀合的抗体(例如，肽)、与元素或其衍生物缀合的生物分子(例如，与氧化铁纳米颗粒缀合的TGF
‑
β)和与细胞靶向部分缀合的寡核苷酸治疗剂。
[0006]生物缀合物形式的治疗剂的制备可对药物的药代动力学和生物利用度、其细胞内摄取以及最终其药效学和功效产生有利影响。在许多情况下，希望生物缀合物中的一些或所有治疗剂在递送时或之后的某个预定时间在靶细胞内释放。这需要通过在细胞内可裂解的连接剂将单个药物偶联在一起，通常依赖于先天的细胞内物质如酶来进行裂解，或依赖于细胞内的其他先天条件。
[0007]已经使用了多种可裂解的连接基，包括例如单链未保护核苷酸的短序列，如dTdTdTdT和dCdA，其被胞内核酸酶裂解，和基于二硫化物的连接基，其被细胞内的还原环境裂解。
[0008]然而，在某些情况下，这些类型的可裂解连接基在治疗性多缀合物的情况下会带来挑战。例如，紧邻治疗性寡核苷酸的核酸酶可裂解的连接基可能影响连接基的可切割性、寡核苷酸的活性或两者。
[0009]在可裂解的连接基化合物中使用二硫键的情况下，通过两个硫醇的反应形成二硫键可导致产物的混合物，尤其是具有杂体系的产物。为了避免这个问题，另一种方法是使用能够与硫醇部分反应的中间体连接剂，该中间体连接剂也含有预先形成的内部二硫键。这种连接基是二硫代双马来酰亚胺乙烷(DTME)，其具有内部二硫化物基团和两个末端马来酰亚胺基团，每个基团能够与另一个分子上的硫醇基团反应。
[0010]DTME通常用作二价连接基来连接两个相同的硫醇化实体，以产生同二聚体衍生物。然而，它也被用于通过单体中间体产生异二聚体，其中两个马来酰亚胺部分中只有一个
被允许与硫醇化分子反应。然后，所得的单DTME中间体与第二个硫醇化部分反应，产生DTME连接的异二聚体。WO 2016/205410中描述了这种用于合成异二聚体的技术。
[0011]该方法已用于产生同多聚体和异多聚体形式的高达八聚体大小的多聚体寡核苷酸。
[0012]然而，二硫键的某些方面可能不适用于一般化学化合物的合成，尤其是多缀合物的合成。例如，不可能在合成中间体中保持内部二硫化物基团，同时将末端二硫化物还原成硫醇用于随后的连接反应。此外，据报道，二硫键连接的分子与其他硫醇化物质解离和/或交叉反应。此外，由于二硫键氧化和随后裂解的可能性，含二硫键分子的长期储存可能是有问题的。
[0013]因此，需要在化学化合物的组装和合成中用作连接基的额外方法和材料，其保留了可裂解连接基如DTME的优点，而没有含二硫化物分子的可察觉的缺点，所述化学化合物包括例如治疗剂，具体包括治疗剂的多缀合物。
[0014]本专利技术提供了可被胞内蛋白酶裂解的连接基。
[0015]使用与用于制备治疗剂如寡核苷酸试剂不相容的化学方法制备连接基，例如使用亚磷酰胺(phosphoroamidite)。

技术实现思路

[0016]各种实施方案提供了包含由包含至少一个酰胺键的连接基团连接的相同官能端基的同
‑
二价连接基化合物、制备这种连接基化合物的方法和使用该连接基化合物的方法，如以下权利要求中所概述。
[0017]本专利技术提供了在任一端包含相同官能团的同
‑
二价连接基化合物，其中所述官能团通过包含至少一个酰胺键的连接基团连接。
[0018]在一些实施方案中，所述同
‑
二价连接基化合物包括如下结构：
[0019][0020]其中，(X)是官能团；每个＜
‑‑‑
＞独立地为间隔基团，其可以存在或不存在；和是包含至少一个酰胺键的连接基团。
[0021]在一些实施方案中，所述结构1中的连接基团包括结构2：
[0022]R
‑
A
a
‑
B
b
‑
C
c
‑
D
d
‑
R'
ꢀꢀ
结构2
[0023]本专利技术提供了结构15的支链连接基化合物：
[0024][0025]其中B是三价部分；各个L1、L2和L3是支链基团；和L1、L2和L3中的至少一个通过将B连接到本文公开的同
‑
二价连接基化合物而形成；任选地，L1、L2和L3中的至少两个独立地通过将B连接到本文公开的同
‑
二价连接基化合物而形成；任选地，L1、L2和L3各自独立地通
过将B连接到本文公开的同
‑
二价连接基化合物而形成。
[0026]本专利技术提供了包含通过共价键连接在一起的两个或更多个生物部分的多缀合物，其中多缀合物中的至少一个共价键通过与连接基化合物反应形成。
[0027]本专利技术提供了合成本文公开的多缀合物的方法，包括在促进第一生物部分和连接基化合物之间形成共价键以及第二生物部分和连接基化合物之间形成共价键的反应条件下，使本文公开的同
‑
二价连接基化合物与所述第一和第二生物部分反应的步骤。
[0028]本专利技术提供了包含一端被生物部分取代的同
‑
二价连接基的化合物，其中所述同
‑
二价连接基的另一端未被取代和其中所述化合物至少75％，80、85、90、95、96、97、98、99或100％的纯度。
[0029]本专利技术提供了包含本文公开的多缀合物的药物组合物。
[0030]本专利技术提供了用于治疗需要此治疗的受试者以改善、治愈或预防疾病或障碍发作的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文公开的多缀合物。
[0031]本专利技术提供了在体外或体内调节细胞中基因表达的方法，所述方法包括向所述细胞递送有效量的本文所公开的多缀合物，其中该多缀合物包含至少一种具有调节基因表达作用的生物部分。
[0032]本专利技术提供了在体外或体内每次内化事件中向细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.在任一端包含相同官能团的同
‑
二价连接基化合物，其中所述官能团通过包含至少一个酰胺键的连接基团连接。2.根据权利要求1的同
‑
二价连接基化合物，其中所述至少一个酰胺键是真肽键。3.根据权利要求1的同
‑
二价连接基化合物，其中所述至少一个酰胺键是异肽键。4.根据权利要求1的同
‑
二价连接基化合物，其中所述至少一个酰胺键由两个氨基酸的连接形成。5.根据权利要求4的同
‑
二价连接基化合物，其中每个氨基酸独立地为天然存在的或非天然存在的。6.根据权利要求4的同
‑
二价连接基化合物，其中每个氨基酸独立地为α、β、γ或δ氨基酸。7.根据权利要求4的同
‑
二价连接基化合物，其中至少一个氨基酸是α氨基酸；或其中每个氨基酸是α氨基酸。8.根据权利要求4的同
‑
二价连接基化合物，其中至少一个氨基酸是蛋白原性氨基酸；或其中每个氨基酸是蛋白原性氨基酸。9.根据权利要求1
‑
8中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中所述相同官能团是马来酰亚胺、叠氮化物、炔烃、活化羧基或胺。10.根据权利要求1
‑
9中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中所述化合物包括结构1：其中，(X)是官能团；每个＜
‑‑‑
＞独立地为间隔基团，其可以存在或不存在；和是包含至少一个酰胺键的连接基团。11.根据权利要求10的同
‑
二价连接基化合物，其中X是马来酰亚胺、叠氮化物、炔烃、活化羧基或胺。12.根据权利要求10或11的同
‑
二价连接基化合物，其中所述化合物中存在的每个间隔基团＜
‑‑‑
＞独立地为烷基、烷氧基、环基、杂环基、芳基、杂芳基或其被取代的形式。13.根据权利要求12的同
‑
二价连接基化合物，其中所述化合物中存在的每个间隔基团＜
‑‑‑
＞独立地为C1‑
10
烷基、C1‑
10
烷氧基、5
‑
10元芳基、5
‑
10元杂芳基、5
‑
10元杂环基、(C1‑
10
烷基)
‑
(5
‑
10元芳基)、(C1‑
10
烷基)
‑
(5
‑
10元杂芳基)或(C1‑
10
烷基)
‑
(5
‑
10元杂环基)。14.根据权利要求13的同
‑
二价连接基化合物，其中所述化合物中存在的每个间隔基团＜
‑‑‑
＞独立地为C2至C6烷基、乙二醇、三甘醇或1,4
‑
亚苯基。15.根据权利要求10
‑
14中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中所述连接基团包含1、2、3或超过3个酰胺键。16.根据权利要求15的同
‑
二价连接基化合物，其中所述连接基团包含1、2或3个酰胺键；任选地其中所述连接基团包含至少一个由两个氨基酸连接形成的酰胺键。17.根据权利要求16的同
‑
二价连接基化合物，其中所述连接基团包括：(i)由两个氨基酸连接形成的一个酰胺键；(ii)由三个氨基酸连接形成的两个酰胺键；或
(iii)由四个氨基酸连接形成的三个酰胺键。18.根据权利要求10
‑
17中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中每个酰胺键独立地为真肽键或异肽键。19.根据权利要求16
‑
18中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中至少一个氨基酸是甘氨酸。20.根据权利要求16
‑
19中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中至少一个氨基酸是丙氨酸。21.根据权利要求16
‑
20中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中至少一个氨基酸是脯氨酸。22.根据权利要求16
‑
21中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中至少一个氨基酸是缬氨酸。23.根据权利要求16
‑
22中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中至少一个氨基酸是赖氨酸。24.根据权利要求16
‑
23中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中至少一个氨基酸是天冬氨酸。25.根据权利要求16
‑
24中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中至少一个氨基酸是瓜氨酸。26.根据权利要求16
‑
25中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中至少一个氨基酸是β
‑
丙氨酸。27.根据权利要求10
‑
26中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中所述连接基团包括结构2：R
‑
A
a
‑
B
b
‑
C
c
‑
D
d
‑
R'结构2其中：R是H，或不存在；R'是OH，或不存在；a、b、c和d各自独立地为0或1，条件是a+b+c+d之和大于或等于2；和A、B、C和D各自独立地包括结构3:其中：w、x、y和z各自独立地为0或1，条件是w+x+y+z之和大于或等于1；
▲
各自独立地为H、H2、烷基、烷氧基、烷基羧基、烷基羧酰胺、烷基氨基、烷基硫酸酯、芳基、芳基羧基、芳基羧酰胺、芳基氨基、芳基硫酸酯、或不存在；和各自独立地存在或不存在和如果存在，则如下指定环状基团的末端：指定中的N作为末端；指定中的C作为末端；指定中的C作为末端；
指定中的C作为末端；和指定中的C作为末端；条件是每个结构3独立地含有0、1或2个环状基团，每个环状基团的末端选自:作为第一末端和或作为第二末端；作为第一末端和或作为第二末端；作为第一末端和或作为第二末端；或作为第一末端和作为第二末端；进一步的条件是：如果存在，那么不存在；如果存在，那么不存在；如果存在，那么不存在；如果存在，那么不存在；结构3中存在的每个环状基团除了其各自的末端之外，还包含末端之间的中间部分Y；和各个Y独立地为烷基、烷氧基、烷基羧基、烷基羧酰胺、烷基氨基或烷基硫酸酯；和各自独立地存在或不存在和如果存在的话是H、OH、烷基、烷基羧基、烷基羧酰胺、烷基氨基、烷氧基、硫基烷基、烷基硫基烷基、芳基或杂芳基；和如果存在的话，各自任选地键合至官能端基X上，存在或不存在中间的间隔基团
‑‑‑
；每个
▼
独立地为OH、烷基、烷氧基、烷基羧基、烷基羧酰胺、烷基氨基、烷基硫酸酯、芳基、芳基羧基、芳基羧酰胺、芳基氨基、芳基硫酸酯或不存在；条件是同
‑
二价连接基化合物总共只含有两个官能端基X，这与所述化合物是同
‑
二价连接基化合物相一致；和结构2任选地包含至少一个酰胺键，其任选地由两个氨基酸的连接形成。28.根据权利要求27所述的同
‑
二价连接基化合物，其中X是马来酰亚胺、叠氮化物、炔烃、活化羧基或胺。29.根据权利要求27或28所述的同
‑
二价连接基化合物，其中间隔基团
‑‑‑
各自独立地为烷基、烷氧基、环基、杂环基、芳基、杂芳基，或其被取代的形式。30.根据权利要求29所述的同
‑
二价连接基化合物，其中间隔基团
‑‑‑
各自独立地为C1‑
10
烷基、C1‑
10
烷氧基、5
‑
10元芳基、5
‑
10元杂芳基、5
‑
10元杂环基、(C1‑
10
烷基)
‑
(5
‑
10元芳基)、(C1‑
10
烷基)
‑
(5
‑
10元杂芳基)或(C1‑
10
烷基)
‑
(5
‑
10元杂环基)。31.根据权利要求30所述的同
‑
二价连接基化合物，其中间隔基团
‑‑‑
各自独立地为C2‑
C6烷基、乙二醇、三甘醇或1,4
‑
亚苯基。32.根据权利要求27
‑
31中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中至少一个酰胺键是真肽键。33.根据权利要求27
‑
31中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中至少一个酰胺键是异肽键。34.根据权利要求27
‑
33中任一项的同
‑
二价连接基化合物，其中至少一个酰胺键由两
个氨基酸的连接形成。35.根据权利要求34所述的同
‑
二价连接基化合物，其中氨基酸各自独立地为天然存在的或非天然存在的。36.根据权利要求34所述的同
‑
二价连接基化合物，其中氨基酸各自独立地为α、β、γ或δ氨基酸。37.根据权利要求34所述的同
‑
二价连接基化合物，其中至少一个氨基酸是α氨基酸；或其中每个氨基酸是α氨基酸。38.根据权利要求34所述的同
‑
二价连接基化合物，其中至少一个氨基酸是蛋白原性氨基酸；或其中每个氨基酸是蛋白原性氨基酸。39.根据权利要求27所述的同
‑
二价连接基化合物，其中所述化合物包含通过将甘氨酸连接到甘氨酸而形成的真肽键，其中：关于结构2:每个间隔基团＜
‑‑‑
＞都存在；R和R'不存在；a和b是1；c和d是0；关于元素A，结构3:w是1；x、y和z是0；
▲
是H；是H；和不存在；和
▼
不存在；关于元素B，结构3:w是1；x、y和z是0；
▲
是H；是H；和不存在；和
▼
不存在；结果是所述同
‑
二价连接基化合物包括结构4:X
‑‑‑‑
NH
‑
(CH2)
‑
CO
‑
NH
‑
(CH2)
‑
CO
‑‑‑‑
X(结构4)。40.根据权利要求27所述的同
‑
二价连接基化合物，其中所述化合物包含由甘氨酸连接到丙氨酸形成的真肽键，其中：关于结构2：每个间隔基团＜
‑‑‑
＞都存在，R和R'不存在；a和b是1；c和d是0；关于元素A，结构3:
w是1；x、y和z是0；
▲
是H；是H；和不存在；和
▼
不存在；关于元素B，结构3:w是1；x、y和z是0；
▲
是H；是甲基；和不存在；和
▼
不存在；结果是所述同
‑
二价连接基化合物包括结构5:X
‑‑‑‑
NH
‑
(CH2)
‑
CO
‑
NH
‑
(CH甲基)
‑
CO
‑‑‑‑
X(结构5)。41.根据权利要求27所述的同
‑
二价连接基化合物，其中所述化合物包含由甘氨酸与脯氨酸连接形成的真肽键，其中：关于结构2:每个间隔基团＜
‑‑‑
＞都存在，R和R'不存在；a和b是1；c和d是0；关于元素A，结构3:w是1；x、y和z是0；
▲
是H；是H；和不存在；和
▼
不存在；关于元素B，结构3:w是1；x、y和z是0；
▲
不存在；和存在；Y是丙基和所述环状基团是吡咯烷；和和
▼
不存在；结果是所述同
‑
二价连接基化合物包括结构6:
42.根据权利要求27所述的同
‑
二价连接基化合物，其中所述化合物包含由甘氨酸与缬氨酸连接形成的真肽键，其中：关于结构2:每个间隔基团＜
‑‑‑
＞都存在，R和R'不存在；a和b是1；c和d是0；关于元素A，结构3:w是1；x、y和z是0；
▲
是H；是H；和不存在；和
▼
不存在；关于元素B，结构3:w是1；x、y和z是0；
▲
是H；是异丙基；和不存在；和
▼
不存在；结果所述同
‑
二价连接基化合物包括结构7:X
‑‑‑‑
NH
‑
(CH2)
‑
CO
‑
NH
‑
(CH
‑
异丙基)
‑
CO
‑‑‑‑
X(结构7)。43.根据权利要求27所述的同
‑
二价连接基化合物，其中所述化合物包含由甘氨酸与赖氨酸连接形成的真肽键，其中：关于结构2：每个间隔基团＜
‑‑‑
＞都存在，R和R'不存在；a和b是1；c和d是0；关于元素A，结构3:w是1；x、y和z是0；
▲
是H；是H；和不存在；和
▼
不存在；关于元素B，结构3:w是1；x、y和z是0；
▲
是H；是丁氨基；和不存在；和
▼
不存在；结果是所述同
‑
二价连接基化合物包括结构8:44.根据权利要求27所述的同...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：MPEGLA有限责任公司，
类型：发明
国别省市：