一种芒果果实的过敏原及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种芒果果实的过敏原及其应用，涉及生物技术相关技术领域。所述过敏原氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明专利技术所述过敏原为PR

【技术实现步骤摘要】
一种芒果果实的过敏原及其应用


[0001]本专利技术涉及生物技术相关
，特别是涉及一种芒果果实的过敏原及其应用。

技术介绍

[0002]芒果是世界上最重要的水果作物之一，在印度、中国、泰国等地产量很高，随着芒果消费量的增加，其引发的过敏问题也愈加严重。芒果引发的过敏可分为三类，分别是由IgE介导的Ⅰ型速发型过敏反应，由免疫细胞介导的Ⅳ型迟发型过敏反应，以及蛋白质接触过敏，其中由IgE介导的速发型超敏反应近年来的发生率持续增长，尤其是在我国北方蒿花粉过敏高发地区。而目前临床上用芒果提取物对患者进行体内和体外诊断的效率低下，漏诊率较高，存在安全隐患。
[0003]过敏原组分的应用能够大大提高临床诊断的精确度和灵敏度，已经成为过敏性疾病诊断的发展趋势。因为传统的蛋白提取物包含很少的有效过敏原蛋白成分。而芒果果实过敏原分子鉴定的研究远远落后于其它水果，目前为止，仅有两种过敏原分子得到鉴定，分别是14kDa的抑制蛋白以及37kDa的3
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磷酸甘油醛脱氢酶，然而这两种过敏原也没有被纳入国际过敏原命名委员会(WHO/IUIS Allergen Nomenclature Home Page)，也没有应用于芒果过敏的诊断中。国内外的研究表明，芒果过敏常伴随着蒿花粉，桦树花粉，以及乳胶、胡萝卜、芹菜等的过敏。免疫抑制实验表明，桦树花粉中的病程相关蛋白第10家族过敏原Bet v 1能够引发与芒果之间的交叉反应，说明芒果中也存在相应过敏原。PR
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10蛋白能够在植物受生物或非生物胁迫后大量积累，在植物抵御逆境中有重要作用，同时影响植物的生长发育过程。桦树花粉主要过敏原Bet v 1是PR
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10蛋白家族的代表性成员，同时也是最常见的导致花粉
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食物综合症的过敏原(Wen J,Vanek
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Krebitz M,Hoffmann
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Sommergruber K,et al.The potential of Bet v 1homologues,a nuclear multigene family,as phylogenetic markers in flowering plants.Molecular Phylogenetics&Evolution,1997,8(3):317
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333.)。
[0004]许多蔷薇科水果中所含过敏原与过敏原Bet v 1有较高的同源性，如苹果(Mal d 1)、梨(Pyr c 1)、杏(Pru ar 1)和甜樱桃(Pru av 1)等，对桦树花粉过敏的患者，食用这些食物有可能会造成过敏症状，在我国有桦树分布的地区较为常见。而芒果中PR
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10蛋白过敏原还未得到表征。过敏原组分的缺乏使芒果过敏的临床诊断存在很大问题，国内外的研究均表明，使用芒果提取物(如ImmunoCAP系统)进行诊断时，其阳性检出率均不足20％，因此亟需对芒果果实过敏原信息进行表征并将其应用于组分诊断，以此提高诊断效率。

技术实现思路

[0005]为解决现有技术中的不足，本专利技术提供了一种芒果果实的过敏原及其应用。
[0006]本专利技术提供了一种芒果果实的过敏原，所述过敏原氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0007]本专利技术又提供了编码上述过敏原的DNA分子，核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
[0008]本专利技术还提供了包含上述DNA分子的重组表达载体。
[0009]本专利技术还提供了包含上述DNA分子或包含上述重组表达载体的宿主生物体。
[0010]本专利技术还提供了上述过敏原或上述DNA分子在制备治疗或预防芒果过敏症的药物中的应用。
[0011]本专利技术还提供了一种用于治疗或预防芒果过敏症的药物，包含上述过敏原或上述DNA分子中的至少一种。
[0012]优选的，所述药物可为免疫治疗疫苗。
[0013]本专利技术还提供了上述过敏原或上述DNA分子在制备过敏原检测的试剂盒中的应用。
[0014]本专利技术还提供了一种用于过敏原检测的试剂盒，包含上述过敏原或上述DNA分子中的至少一种。
[0015]对于过敏症患者，一个重要的手段是检查出引起过敏的过敏原，通过有针对性的减少与过敏原的接触可有效预防过敏的发生。本专利技术所述过敏原或所述DNA分子可以用于单独或者与其他过敏原一起使用，制备成用于筛查过敏症患者的过敏原的试剂盒。
[0016]本专利技术一种芒果果实的过敏原，为病程相关蛋白第10家族蛋白(PR
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10)，该过敏原可被用于制备治疗或预防芒果过敏症的脱敏疫苗，或者用于制备过敏原检测的试剂盒。
附图说明
[0017]图1为实施例1中芒果果实提取物电泳和免疫印迹图；a为果实提取物电泳图，ME表示果实提取物；b为芒果果实提取物与过敏患者血清免疫印迹图，1
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5代表不同的阳性血清与提取物的结合，N代表阴性对照。
[0018]图2为实施例3中表达的芒果PR
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10过敏原图；M：蛋白maker；泳道1：IPTG诱导后的可溶性蛋白，泳道2：IPTG诱导破碎后的沉淀；泳道3
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10：20mM
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250mM梯度浓度的咪唑洗脱后纯化出的蛋白。
[0019]图3为重组的芒果PR
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10过敏原二级质谱结果图；高亮部分代表质谱匹配肽段。
[0020]图4为芒果重组PR
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10过敏原与患者血清免疫印迹图；1表示芒果过敏患者血清与PR
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10过敏原的结合，2表示阴性血清与PR
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10过敏原的结合。
具体实施方式
[0021]芒果果实“凯特”：采集自湛江。
[0022]芒果过敏阳性血清：来源于浙江大学医学院附属第二医院以及科研合作的山西省大同市第三人民医院临床病例，山西医科大学附属第一医院，云南曲靖中医院，伦理批号No.2020
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050，2015
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001，2019K
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K0007。所有患者都同意并签有知情同意书。
[0023]实施例1
[0024]提取“凯特”芒果(Mangifera indica)果实总蛋白。蛋白提取纯化方法：取1g液氮研磨后的果实粉末用5mL预冷的丙酮在4℃下脱脂三次，每次1h，离心后加入5mL的PBS缓冲液在4℃下提取3h，离心取上清并用0.22μm Millipore膜过滤即为芒果果实蛋白。SDS
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PAGE电泳对提取物进行检测，BCA法测定总蛋白含量。
[0025]将提取物好的芒果果实蛋白用12％浓度的SDS
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PAGE电泳分离，然后将蛋白转膜到PVDF膜上，5％脱脂奶粉封闭，然后加入芒果过敏阳性血清和血清池进行孵育。结合的IgE用HRP标记的羊抗人IgE(Thermo Fisher，货本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种芒果果实的过敏原，其特征在于，所述过敏原氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。2.编码如权利要求1所述过敏原的DNA分子，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。3.包含如权利要求2所述DNA分子的重组表达载体。4.包含如权利要求2所述DNA分子或包含如权利要求3所述重组表达载体的宿主生物体。5.如权利要求1所述过敏原或如权利要求2所述DNA分子在制备治疗或预防芒果过敏症的药物中...

【专利技术属性】
技术研发人员：高中山，赵岚，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：