一种EBV高危型分型荧光PCR检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及EBV检测技术领域。本发明专利技术提供了一种EBV高危型分型荧光PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括如下组分：热启动Taq酶系统、通用引物、荧光探针、NTC、野生型质控品和突变型质控品。本发明专利技术的试剂盒可以稳定检出10copies的单基因型标本。杂合型样本中，LMP1突变型的低频基因型灵敏度为5％。其他4种EBV高危型的低频基因型灵敏度为1％。样本投入量少，仅需要10copies；低频基因型灵敏度高，最高可检测1％的杂合型高危型；成本低，检测过程简单快速。检测过程简单快速。检测过程简单快速。

【技术实现步骤摘要】
一种EBV高危型分型荧光PCR检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及EBV检测
，尤其涉及一种EBV高危型分型荧光PCR检测试剂盒。

技术介绍

[0002]鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是起源于鼻咽上皮细胞的恶性肿瘤。鼻咽癌与EBV感染密切相关，大约90％的人在年幼时感染过EBV，鼻咽癌高风险人群的EBV感染率在60％以上，几乎所有的鼻咽癌患者均与EBV感染相关。研究发现，EBV高危亚型与鼻咽癌有强相关性，通过检测EBV高危型分型，有助于鼻咽癌的早期筛查。
[0003]传统的NGS测序至少需要100copies，低频基因型灵敏度至少15％以上；成本高，检测过程繁琐，并且周期长。因此，急需开发新型检测产品。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种EBV高危型分型荧光PCR检测试剂盒，快速、准确、灵敏的检测EBV高危型分型。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种EBV高危型分型荧光PCR检测试剂盒，包括如下组分：热启动Taq酶系统、通用引物、荧光探针、NTC、野生型质控品和突变型质控品。
[0007]作为优选，所述热启动Taq酶系统的酶为高特异性、具有5
’‑3’
外切活性的热启动酶。
[0008]作为优选，所述通用引物包括：
[0009]BALF2_162215C分型的引物、BALF2_162476C分型的引物、BALF2_163364T分型的引物、RPMS1_155391A分型的引物和LMP1_del分型的引物中的一种或多种。
[0010]作为优选，
[0011]所述BALF2_162215C分型的引物如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2所示；
[0012]所述BALF2_162476C分型的引物如SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.4所示；
[0013]所述BALF2_163364T分型的引物如SEQ ID NO.5～SEQ ID NO.6所示；
[0014]所述RPMS1_155391A分型的引物如SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.8所示；
[0015]所述LMP1_del分型的引物如SEQ ID NO.9～SEQ ID NO.10所示。
[0016]作为优选，所述荧光探针包括：
[0017]BALF2_162215C分型的探针、BALF2_162476C分型的探针、BALF2_163364T分型的探针、RPMS1_155391A分型的探针和LMP1_del分型的探针中的一种或多种。
[0018]作为优选，
[0019]所述BALF2_162215C分型的探针如SEQ ID NO.11所示；
[0020]所述BALF2_162476C分型的探针如SEQ ID NO.12所示；
[0021]所述BALF2_163364T分型的探针如SEQ ID NO.13所示；
[0022]所述RPMS1_155391A分型的探针如SEQ ID NO.14所示；
[0023]所述LMP1_del分型的探针如SEQ ID NO.15所示。
[0024]作为优选，所述NTC为无菌水。
[0025]作为优选，所述野生型质控品和突变型质控品为含有目标序列的pUC57
‑
Amp质粒。
[0026]作为优选，所述野生型质控品中的目标序列为SEQ ID NO.16，所述突变型质控品中的目标序列为SEQ ID NO.17。
[0027]作为优选，所述EBV高危型分型为BALF2_162215C、BALF2_162476C、BALF2_163364T、RPMS1_155391A和LMP1_del。
[0028]本专利技术提供了一种EBV高危型分型荧光PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括如下组分：热启动Taq酶系统、通用引物、荧光探针、NTC、野生型质控品和突变型质控品。本专利技术的试剂盒可以稳定检出10copies的单基因型标本。杂合型样本中，LMP1突变型的低频基因型灵敏度为5％。其他4种EBV高危型的低频基因型灵敏度为1％。样本投入量少，仅需要10copies；低频基因型灵敏度高，最高可检测1％的杂合型高危型；成本低，检测过程简单快速。
附图说明
[0029]图1为标本人基因组定量检测结果；
[0030]图2为EBV DNA定量检测结果；
[0031]图3为管1的4个WT质控品的阈值线设置图；
[0032]图4为管1的4个MT质控品的扩增曲线图；
[0033]图5为管1检测3个突变基因型的阈值线设置图；
[0034]图6为管1，4个MT质控品各有3条扩增曲线的扩增曲线图；
[0035]图7为管1B95
‑
8的检测结果图；
[0036]图8为管2BALF2_162215C的4个MT质控品的阈值线设置图；
[0037]图9为管2BALF2_162215C的4个WT质控品的扩增曲线图；
[0038]图10为管2BALF2_162215C B95
‑
8的检测结果图；
[0039]图11为管2LMP1_del的4个WT质控品的阈值线设置图；
[0040]图12为管2LMP1_del的4个MT质控品的扩增曲线图；
[0041]图13为管2LMP1_del B95
‑
8的检测结果图。
具体实施方式
[0042]本专利技术提供了一种EBV高危型分型荧光PCR检测试剂盒，包括如下组分：热启动Taq酶系统、通用引物、荧光探针、NTC、野生型质控品和突变型质控品。
[0043]在本专利技术中，所述热启动Taq酶系统的酶优选为高特异性、具有5
’‑3’
外切活性的热启动酶。
[0044]在本专利技术中，所述通用引物优选包括：
[0045]BALF2_162215C分型的引物、BALF2_162476C分型的引物、BALF2_163364T分型的引物、RPMS1_155391A分型的引物和LMP1_del分型的引物中的一种或多种。
[0046]在本专利技术中，
[0047]所述BALF2_162215C分型的引物为：
[0048]162215_F：ACAGCATCAGCACCTTGG，
[0049]162215_R：AGCCCACCTGCGACCTG；
[0050]所述BALF2_162476C分型的引物为：
[0051]162476_F：GGGTTGTCATTCTCATAGCACATAC
[0052]162476_R：GCCAAGAACAACATCACCTACAAG；
[0053]所述BALF2_163364T分型的引物为：
[0054]163364_F：AGAC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种EBV高危型分型荧光PCR检测试剂盒，其特征在于，包括如下组分：热启动Taq酶系统、通用引物、荧光探针、NTC、野生型质控品和突变型质控品。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述热启动Taq酶系统的酶为高特异性、具有5
’‑3’
外切活性的热启动酶。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述通用引物包括：BALF2_162215C分型的引物、BALF2_162476C分型的引物、BALF2_163364T分型的引物、RPMS1_155391A分型的引物和LMP1_del分型的引物中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述BALF2_162215C分型的引物如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2所示；所述BALF2_162476C分型的引物如SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.4所示；所述BALF2_163364T分型的引物如SEQ ID NO.5～SEQ ID NO.6所示；所述RPMS1_155391A分型的引物如SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.8所示；所述LMP1_del分型的引物如SEQ ID NO.9～SEQ ID NO.10所示。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光探针包括：BALF2_162215C分...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹素梅，林冬丰，吴智聪，谢尚杭，叶鑫，
申请(专利权)人：中山大学肿瘤防治中心中山大学附属肿瘤医院，中山大学肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：