外泌体microRNAnovel-3及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种外泌体microRNA novel

【技术实现步骤摘要】
外泌体microRNA novel
‑
3及其应用


[0001]本专利技术涉及医学检测领域，具体涉及一种外泌体microRNA novel
‑
3及其应用。

技术介绍

[0002]动脉粥样硬化可累及全身各处的动脉，包括冠状动脉、脑动脉、外周动脉和主动脉，是缺血性心脑血管事件发生的主要病因。其病理特点为受累动脉病变从内膜局部增厚开始，伴富含脂质的巨噬细胞(泡沫细胞)和细胞外基质蓄积，可有纤维组织增生及钙质沉着，动脉壁斑块形成，受累血管管腔狭窄，导致缺血性事件的发作。近年来，有关动脉粥样硬化斑块稳定性的问题也逐渐被重视，稳定性差的斑块常伴有斑块内出血破裂，更容易引发症状性缺血性事件的发生，所以对于动脉粥样硬化斑块稳定性的判断具有非常重要的临床价值。然而目前评估斑块的稳定程度主要通过动脉超声来评估，受限制于超声医师的诊疗水平、超声检查仪器设备、血管位置和大小是否可以通过超声判断等。因此，开发基于外周血通用型的检测技术手段以及寻找能准确判断斑块稳定性的生物标志物尤为重要。
[0003]另一方面，大动脉粥样硬化型缺血性卒中(LAA)是脑梗死中的一个重要亚类，其临床症状重、复发率高且急性血管再通等治疗方式对此类型脑梗死的治疗收益欠佳，因此亟需一种优化的、灵敏的、可临床操作的生物标志物对动脉粥样硬化引起的缺血性卒中进行早期、准确地诊断及干预预后。
[0004]外泌体是一种直径在40
‑
150nm的具有磷脂双层膜结构的微囊泡，可由多种细胞分泌，广泛存在于细胞外基质及体液中。外泌体通过携带蛋白质、脂质、代谢产物及核酸等物质可介导细胞间的相互通讯。外泌体包含多种RNA分子，其中带编码信息的microRNA(miRNA)是一种内源性的小RNA，其表达水平在正常和病理状态之间差异较大，故具有作为疾病诊断、预后的生物标志物的潜能。
[0005]目前已有相关报道以及专利提出了急性缺血性卒中患者血液外泌体源miRNA的变化可以作为潜在的诊断标志物的应用。公开号为CN105925677A的中国专利技术专利公开了一种血清外泌体miR
‑9‑
3p和miR
‑
124
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3p作为急性脑梗死的诊断标志物的应用，并以此来判断脑缺血损伤和程度的标志物。公开号为CN 111534584A的中国专利技术专利公开了一种血清外泌体miR
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410
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3p作为急性脑梗死诊断标志物的应用及其检测方法。公开号为CN108070650A的中国专利技术专利公开了一种血清外泌体miR
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155
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5p和miR
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93
‑
5p可作为显著区分心源性与非心源性缺血性卒中的标志物辅助诊断。这些公开的专利体现了外泌体miRNA作为脑梗死生物标志物的可行性，但尚未见有专利公开报道使用外泌体miRNA协助诊断或判断大动脉粥样硬化型脑梗死的预后；同时，公开号为CN115112877A的中国专利技术专利公开了一种血清代谢标志物及其评估颅内动脉斑块稳定性的应用，但尚无专利公开使用外泌体源miRNA高效地明确地预测动脉粥样硬化斑块稳定性的报道。
[0006]因此，迫切需要开发一种基于外周血的外泌体源miRNA作为生物标志物，用于动脉粥样硬化斑块稳定性的判断以及用于动脉粥样硬化引起的缺血性卒中的诊断和预后评估。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种全新的外泌体miRNA novel
‑
3检测方式和临床应用。本专利技术开发一种优化的、明确的、灵敏的、可临床操作的外周血外泌体miRNA novel
‑
3作为生物标志物，用于判断动脉粥样硬化斑块稳定性、协助诊断动脉粥样硬化引起的缺血性卒中发病风险、疾病严重程度及预后，具有重要的临床应用价值。
[0008]为实现上述目的，本专利技术所设计的技术方案如下：
[0009]本专利技术提供了一种外泌体miRNA novel
‑
3，其核苷酸序列为ucaggccaggcugggaggaugc，其如SEQ ID NO:1所示。
[0010]本专利技术还提供了一种逆转录外泌体miRNA novel
‑
3的引物序列，其核苷酸序列为gtcgtatcgactgcagggtccgaggtattcgcagtcgatacgacgcatcc，其如SEQ ID NO:2所示；且引物序列的结构为茎环结构。
[0011]本专利技术还提供了一种检测外泌体miRNA novel
‑
3的引物对：所述引物对为novel
‑3‑
H引物对或novel
‑3‑
M引物对；其中
[0012]所述novel
‑3‑
H引物对为：
[0013]novel
‑3‑
H上游序列：5
’‑
gctcaggccaggctggga
‑3’
，
[0014]novel
‑3‑
H下游序列：5
’‑
actgcagggtccgaggtatt
‑3’
；
[0015]所述novel
‑3‑
M引物对为：
[0016]novel
‑3‑
M上游引物：5
’‑
tcaggccaggctggga
‑3’
，
[0017]novel
‑3‑
M下游引物：5
’‑
actgcagggtccgaggtatt t
‑3’
。
[0018]本专利技术还提供了一种上述的引物对在检测大动脉粥样硬化型缺血性卒中(LAA
‑
AIS)血浆外泌体novel
‑
3中的应用。
[0019]本专利技术还提供了一种上述的外泌体miRNA novel
‑
3作为生物标志物在制备动脉粥样硬化斑块稳定性的检测分析试剂或试剂盒中的应用。
[0020]本专利技术还提供了一种上述的外泌体miRNA novel
‑
3作为生物标志物在制备预测大动脉粥样硬化型急性缺血性卒中的试剂或试剂盒中的应用。
[0021]本专利技术还提供了一种上述的外泌体miRNA novel
‑
3在制备预测大动脉粥样硬化型急性缺血性卒中患者预后的产品中应用。
[0022]本专利技术还提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括上述的引物对；该试剂盒的用途如下：
[0023](1)用于动脉粥样硬化斑块稳定性的检测；
[0024](2)用于大动脉粥样硬化型急性缺血性卒中的诊断；
[0025](3)用于大动脉粥样硬化型急性缺血性卒中患者预后的预测。
[0026]进一步地，所述试剂盒还包括5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种外泌体miRNA novel
‑
3，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.一种逆转录外泌体miRNA novel
‑
3的引物序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。3.一种检测外泌体miRNA novel
‑
3的引物对，其特征在于：所述引物对为novel
‑3‑
H引物对或novel
‑3‑
M引物对；其中所述novel
‑3‑
H引物对为：novel
‑3‑
H上游序列：5
’‑
gctcaggccaggctggga
‑3’
，novel
‑3‑
H下游序列：5
’‑
actgcagggtccgaggtatt
‑3’
；所述novel
‑3‑
M引物对为：novel
‑3‑
M上游引物：5
’‑
tcaggccaggctggga
‑3’
，novel
‑3‑
M下游引物：5
’‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：田代实，王伟，秦川，董明皓，唐玥，庞晓伟，周罗绮，杨笙，张航，肖君，尚珂，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属同济医院，
类型：发明
国别省市：