一种采用反相色谱法检测卡非佐米对映异构体的方法技术

本发明专利技术涉及一种反相色谱法检测卡非佐米对映异构体的方法，采用如下色谱条件：以硅胶表面共价键合直链淀粉

【技术实现步骤摘要】
一种采用反相色谱法检测卡非佐米对映异构体的方法


[0001]本专利技术涉及药物分析领域，具体涉及一种反相色谱法检测卡非佐米中对映异构体的方法。

技术介绍

[0002]卡非佐米是一个脂溶性较强的弱碱性化合物，几乎不溶于水，其结构中（如式1）具有5个手性中心，因此，在原料药的合成过程中，可能引入多个手性异构体，其中，对映异构体的具体结构如式2。磺丁基β环糊精钠是一种阴离子型的β环糊精衍生物，对含氮类药物具有特殊的亲和力和包合作用，同时具有高水溶性，由此可知，卡非佐米和磺丁基β环糊精钠在溶解性上表现出近乎相反的特点。注射用卡非佐米以高比例的磺丁基β环糊精钠进行包合，从而呈现出与磺丁基β环糊精钠类似的高水溶性特点。
[0003][0004]目前关于卡非佐米对映异构体杂质检测的方法有手性添加剂
‑
反相色谱法，以及常规的正相色谱法。注射用卡非佐米辅料主要为磺丁基β环糊精钠，存在紫外末端吸收，极性强，在反相色谱体系下保留很弱。此外，专利CN107402259A中采用正相色谱法，色谱柱为CHIRALPAK OX
‑
H柱，流动相为正己烷
‑
异丙醇
‑
乙醇体系，同时测定卡非佐米中3种手性异构体含量。使用正相色谱法测定制剂中对映异构体杂质时，主要存在以下不足：
①
样品溶解性及提取问题：常规的正相溶剂（如正己烷
‑
醇溶剂（异丙醇/甲醇/乙醇）与样品中磺丁基β环糊精钠不相溶，被包合的卡非佐米及其对映异构体提取效率存在风险。/>②
柱压、色谱峰形及溶剂效应问题：用纯甲醇制备的供试品溶液中磺丁基β环糊精钠浓度较高，与正相流动相不互溶，发生析出导致柱压持续升高；且主峰峰形不佳，存在溶剂效应。此外，在常规的正相色谱体系中，卡非佐米对映异构体保留较强，峰形展宽，灵敏度较低。
[0005]由于手性异构体杂质可能影响药品质量，在卡非佐米原料药及制剂的质量研究中需对手性异构体进行检测，而现有正相色谱法不适用于注射用卡非佐米中对映异构体的测定，手性添加剂
‑
反相色谱法则需要特殊的手性试剂，因此，开发一种适用于注射用卡非佐米中对映异构体的检测方法具有重要意义。

技术实现思路

[0006]针对现有正相色谱法中对卡非佐米中对映异构体杂质控制方法存在的缺陷和不足，本专利技术提供了一种检测卡非佐米中的对映异构体杂质的方法，该方法采用反相色谱法检测，专属性好、准确度高、重复性好、灵敏度高、操作简单、快速。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了如下方案。
[0008]本专利技术提供了一种采用反相色谱法检测卡非佐米对映异构体的方法，采用如下色谱条件：色谱柱：以硅胶表面共价键合直链淀粉
‑
三（3氯
‑5‑
甲基苯基氨基甲酸酯）为填料的色谱柱；流动相：50mM磷酸盐缓冲液
‑
乙腈；流速：0.8
‑
1.2ml/min；检测波长：210nm；柱温：25
‑
40℃；进样量：50μl；检测器采用紫外检测器；洗脱模式为等度洗脱；所述流动相中磷酸盐缓冲液
‑
乙腈的体积比为60：40
‑
40：60；所述流动相中磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾缓冲液，pH值为3.0
‑
4.5。
[0009]进一步地，所述以硅胶表面共价键合直链淀粉
‑
三（3氯
‑5‑
甲基苯基氨基甲酸酯）为填料的色谱柱为CHIRALPAK IG柱，更优选为CHIRALPAK IG（Daicel，4.6mm
×
250mm，5μm）柱。
[0010]进一步地，所述流动相中，磷酸盐缓冲液
‑
乙腈的体积比为50：50。
[0011]进一步地，所述流动相中，磷酸盐缓冲液的pH值为3.5。
[0012]进一步地，所述流速为1.0ml/min。
[0013]进一步地，所述柱温为30℃。
[0014]进一步地，所述方法包括以下步骤：（1）卡非佐米对照品溶液的制备：取卡非佐米对照品适量，加适量乙腈超声溶解，用40%乙腈水溶液配制成对照品溶液；（2）卡非佐米对映异构体定位溶液的制备：取卡非佐米对映异构体对照品适量，加适量乙腈超声溶解，用40%乙腈水溶液配制成卡非佐米对映异构体定位溶液；（3）供试品溶液的制备：取注射用卡非佐米适量，用水复溶，用40%乙腈水溶液稀释，作为供试品溶液；或，取卡非佐米原料药适量，加入适量乙腈超声溶解，用40%乙腈水溶液稀释，配制成供试品溶液；或，取除注射用卡非佐米之外的其他卡非佐米注射剂适量，配制成供试品溶液；（4）取卡非佐米对照品溶液、卡非佐米对映异构体定位溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件进行高效液相色谱分析。
[0015]本专利技术选用的色谱柱为CHIRALPAK IG柱，填料为硅胶表面共价键合直链淀粉
‑
三（3氯
‑5‑
甲基苯基氨基甲酸酯），属于多糖键合型手性柱，不仅适用于正相色谱体系，也可在反相色谱体系下使用，对手性化合物具有区分力，色谱柱稳定性高，柱温耐受范围为0
‑
40℃，pH耐受范围为2.0
‑
9.0，使用寿命长。
[0016]本专利技术利用手性色谱柱对卡非佐米及其对映异构体的手性选择性的差异，设计以硅胶表面共价键合直链淀粉
‑
三（3氯
‑5‑
甲基苯基氨基甲酸酯）为填料的色谱柱为分析柱的
反相液相色谱分析方法，同时利用体系的疏水作用，实现二者的分离，进行对映异构体含量研究，适用于卡非佐米原料药/制剂中对映异构体的分析，检测限达到0.05μg/ml，定量限达到0.1μg/ml。与现有方法相比，具有明显优点，如其他杂质不干扰对映异构体测定，专属性好；样品溶液制备简单，兼顾样品溶解性及与流动相体系的相容性，操作简单；本专利技术方法延长了色谱柱及设备的使用寿命；准确度高、重复性好；改善了对映异构体的峰形，灵敏度高；试剂简单，检测成本低。同时，本专利技术方法也适用于部分非对映异构体的检测。
附图说明
[0017]图1为实施例1中流动相中磷酸盐缓冲液
‑
乙腈的体积比为50：50时的注射用卡非佐米加标供试品溶液色谱图；图2为实施例5中空白辅料溶液色谱图；图3为实施例5中卡非佐米原料药酸破坏溶液色谱图；图4为实施例8中卡非佐米非对映异构体1定位溶液色谱图；图5为实施例8中卡非佐米非对映异构体2定位溶液色谱图；图6为实施例8中卡非佐米非对映异构体3定位溶液色谱图；图7为实施例8中卡非佐米非对映异构体4定位溶液色谱图；图8为实施例8中卡非佐米非对映异构体5定位溶液色谱图。
具体实施方式
[0018]以下实施例用于进一步说明和理解本专利技术的精神实质，但不以任何方式限制本专利技术的保护范围。
[0019]实施例1流动相比例考察检测器与色谱条件HPL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种采用反相色谱法检测卡非佐米对映异构体的方法，其特征在于包括采用如下色谱条件：色谱柱：以硅胶表面共价键合直链淀粉
‑
三（3氯
‑5‑
甲基苯基氨基甲酸酯）为填料，流动相：50mM磷酸盐缓冲液
‑
乙腈，其体积比为60：40
‑
40：60，流速：0.8
‑
1.2ml/min，检测波长：210nm，柱温：25
‑
40℃，检测器采用紫外检测器，所述磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾缓冲液，其pH值为3
‑
4.5。2. 根据权利要求1所述的方法，所述色谱柱为CHIRALPAK IG柱。3.根据权利要求1所述的方法，所述流动相中，50mM磷酸盐缓冲液
‑
乙腈的体积比为50：50。4.根据权利要求1所述的方法，所述流动相中，磷酸盐缓冲液的pH为3.5。5.根据权利要求1所述的方法，所述流速为1.0ml/min。6.根据权利要求1所述的方法，所述柱温为30℃。7.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊小叶，黄凌晶，袁涤，徐颖，蒋娟娟，
申请(专利权)人：吉斯美武汉制药有限公司，
类型：发明
国别省市：