一株阿氏普利斯特菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株阿氏普利斯特菌及其应用。本发明专利技术自舟山市六横岛东南侧海滩采集的沙土中筛选到对芋头软腐病病原有较强抑制效果的阿氏普利斯特菌(Priestia aryabhattai)RW010111，该菌株保藏编号为CGMCC No.26463。经试验证明：阿氏普利斯特菌RW010111及其发酵上清液对温度、pH和紫外线照射展现出优良的耐受性和稳定性；田间试验显示，以阿氏普利斯特菌RW010111为主要有效成分的生物防治制剂可有效控制芋头软腐病的发生，防治效果可达62.61％。62.61％。62.61％。

【技术实现步骤摘要】
一株阿氏普利斯特菌及其应用


[0001]本专利技术涉及一株阿氏普利斯特菌及其应用，属于微生物


技术介绍

[0002]芋头软腐病是由胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora subsp.carotovora，Ecc)引起的芋头种植上的一种毁灭性病害，该病害对芋头产量的损失影响一般可达15％左右，高的可达30％～50％，甚至绝收。目前，全世界每年因芋头软腐病造成的损失达上亿美元，在生产上既未培育出优良的抗病品种，也未研制出针对该病害的特效药剂，严重影响芋头产业的发展。
[0003]近年来，以微生物及其代谢产物作为有效成分来控制植物病害成为一种新趋势。但目前为止，利用微生物及其代谢产物防治芋头软腐病的报道少之又少。CN103621621A公开了一种复配生物防腐保鲜剂及其使用方法，其保鲜剂有效成分包含解淀粉芽孢杆菌，能用于防治贮藏期果蔬细菌性软腐病；CN112608869A公开了一株耐盐碱阿根廷假单胞菌及其活菌制剂与应用，所涉及的阿根廷假单胞菌PAPM
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9具有防治番茄软腐病和促进番茄生长的作用；CN112760258A公开了一株皮尔瑞俄类芽孢杆菌及其在防治黄瓜细菌性软腐病中的应用，所涉及菌株能够防治黄瓜细菌性软腐病。CN111172065A公开了一株高产多粘类芽孢杆菌YSD7，保藏编号为CGMCC 19087。该菌可防治：大白菜软腐病菌、芋头软腐病菌、烟草疫霉、花卉根腐病菌、小麦根腐病菌、花生黑斑病菌或玉竹根腐病菌。未见阿氏普利斯特菌防治芋头软腐病的研究，急需进一步挖掘新的拮抗菌资源。

技术实现思路

[0004]本专利技术克服了上述现有技术的不足，提供了一株遗传及功能稳定的阿氏普利斯特菌(Priestia aryabhattai)RW010111及其应用，该菌株及其发酵上清液和以该菌株以主要有效成分制备的生物防治制剂对芋头软腐病的生长有明显的抑制效果，在防治芋头软腐病方面表现出广阔的应用前景。
[0005]本专利技术自舟山市六横岛东南侧海滩采集的沙土中筛选到对芋头软腐病病原有较强抑制效果的阿氏普利斯特菌(Priestia aryabhattai)RW010111，该菌株保藏编号为CGMCC No.26463。经试验证明：阿氏普利斯特菌RW010111及其发酵上清液都对芋头软腐病菌的生长有明显的抑制效果。并经试验证明：菌株RW010111对高温环境(80～100℃)、强酸环境(pH2～3)、强碱环境(pH9～10)和高盐环境(8.5％NaCl)具有较好的耐受性；菌株RW010111对头孢霉素、氨苄青霉素、新霉素、庆大霉素、链霉素具有耐药性。同时，该菌株发酵上清液在4～70℃范围内具有良好的稳定性，在pH4～10范围内抑菌活性较高，且经相同强度不同时长的紫外线照射后，其抑菌活性无明显变化。
[0006]本专利技术还提供了一种以阿氏普利斯特菌(Priestia aryabhattai)RW010111为主要有效成分的生物防治制剂。
[0007]上述生物防治制剂优选为液体制剂。
[0008]上述液体制剂的制备方法，其特征是，
[0009](1)种子液获取
[0010]挑取阿氏普利斯特菌RW010111单菌落接种至LB液培养基中，28～32℃恒温振荡培养12～20h，获得种子液；
[0011](2)种子罐发酵
[0012]将培养好的种子液按接种量0.5～1.5％倒入装有大量发酵培养基的发酵罐中28～32℃下发酵12～16h；
[0013](3)大量发酵
[0014]将种子罐发酵的种子液按接种量8～12％泵入装有大量发酵培养基的大量发酵罐，28～32℃下发酵20～26h，制成RW010111液体制剂。
[0015]其中，大量发酵培养基(重量比)：葡萄糖2％、牛骨蛋白胨1％、酵母浸粉0.5％、硫酸镁0.05％、磷酸氢二钾0.02％、柠檬酸三铵0.2％、牛肉浸膏1％、乙酸钠0.2％，pH调至7.0
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7.2。
[0016]本专利技术还提供了阿氏普利斯特菌(Priestia aryabhattai)RW010111及其生物防治制剂在防治芋头软腐病方面的应用。
[0017]本专利技术还提供了采用上述生物防治制剂防治芋头软腐病的方法，其特征是，将上述生物防治制剂加水稀释300～500倍在芋头长至2～3片叶时进行灌根，处理完成30
±
2d后进行二次施药。
[0018]本专利技术的技术效果是：
[0019]1、抑菌效果高效
[0020]本专利技术自舟山市六横岛东南侧海滩采集的沙土中筛选到对芋头软腐病病原有较强抑制效果的阿氏普利斯特菌(Priestia aryabhattai)RW010111，经试验证明：菌株RW010111及其发酵上清液对芋头软腐病病原胡萝卜软腐欧文氏菌(Ecc)的生长有明显的抑制效果，抑菌圈直径分别高达16.67mm和10.33mm。
[0021]2、遗传及功能稳定
[0022]经试验证明：菌株RW010111传代100次后对Ecc抑制效果无显著性变化，遗传稳定性良好。
[0023]菌株RW010111对高温环境(80～100℃)、强酸环境(pH2～3)、强碱环境(pH9～10)和高盐环境(8.5％NaCl)具有较好的耐受性；菌株RW010111对头孢霉素、氨苄青霉素、新霉素、庆大霉素、链霉素具有耐药性。
[0024]该菌株发酵上清液在4～70℃范围内具有良好的稳定性，在pH4～10范围内抑菌活性较高，且经相同强度不同时长的紫外线照射后，其抑菌活性无明显变化。
[0025]3、田间效果优良
[0026]经试验证明：以该菌株为有效成分制备的液体制剂，稀释300倍进行直接灌根，防治效果达62.61％；表明该菌株能够有效防治芋头软腐病。
[0027]4、该菌株易于发酵生产，菌剂生产简便易行，使用方式简单，适合大面积推广。
附图说明
[0028]图1为部分待测菌株(RW010103、RW010104、RW010105、RW010108、RW010111、
RW010201和RW010204)对Ecc的拮抗效果；
[0029]图2为初筛7株菌发酵上清液对Ecc的拮抗效果；
[0030]图3为阿氏普利斯特菌RW010111菌落培养特征；
[0031]图4为阿氏普利斯特菌RW010111菌体形态；
[0032]图5为不同温度对阿氏普利斯特菌RW010111发酵上清液抑菌稳定性影响结果；
[0033]图6为不同pH对阿氏普利斯特菌RW010111发酵上清液抑菌稳定性影响结果；
[0034]图7为紫外线照射不同时间对阿氏普利斯特菌RW010111发酵上清液抑菌稳定性影响结果。
具体实施方式
[0035]为能清楚说明本专利技术方案的技术特点，下面结合具体实施例，对本专利技术进行阐述。但是本专利技术的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本专利技术构思的改变或本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株阿氏普利斯特菌(Priestia aryabhattai)RW010111，该菌株保藏编号为CGMCCNo.26463。2.权利要求1所述的阿氏普利斯特菌RW010111在抑制芋头软腐病菌生长中的应用。3.权利要求1所述的阿氏普利斯特菌RW010111的发酵上清液在抑制芋头软腐病菌生长中的应用。4.一种以权利要求1所述的阿氏普利斯特菌RW010111为主要有效成分的生物防治制剂。5.如权利要求4所述的生物防治制剂，其特征是，所述生物防治制剂为液体制剂。6.权利要求5所述的生物防治制剂的制备方法，其特征是，(1)种子液获取挑取阿氏普利斯特菌RW010111单菌落接种至LB液培养基中，28～32℃恒温振荡培养12～20h，获得种子液；(2)种子罐发酵将培养好的种子液按接种量0.5～1...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈攀辉，赵林，张淑静，牛赡光，
申请(专利权)人：浙江欧格纳科海洋生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：