增强子RNA作为靶点在制备防治或治疗炎症性肠病的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了增强子RNA作为靶点在制备防治或治疗炎症性肠病的药物中的应用，涉及生物医药技术领域。本发明专利技术鉴定了一种与炎症性肠病疾病状态相关的从Sirpa基因位点转录的增强子RNA，通过DSS诱导小鼠肠炎模型，发现所述增强子RNA序列的反义寡核苷酸可以显著降低小鼠肠道巨噬细胞表面SIRPα蛋白的表达，促进巨噬细胞的吞噬能力，进而促进小鼠肠道炎症的消退进程。因此，本发明专利技术的发现预示着所述增强子RNA序列作为靶点在研发诊断炎症性肠病的方法或试剂盒以及制备防治炎症性肠病的药物中的应用潜能。潜能。潜能。

【技术实现步骤摘要】
增强子RNA作为靶点在制备防治或治疗炎症性肠病的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体地说，是一种增强子RNA作为靶点在制备炎症性肠病的诊断剂或试剂盒以及制备防治或治疗炎症性肠病的药物中的应用。

技术介绍

[0002]炎症性肠病(Inflammatory bowel disease，IBD)是一种病因不明的慢性、非特异性肠道炎症性疾病，主要包括溃疡性结肠炎和克罗恩病，临床表现为腹泻、腹痛、血便、体质量减轻等，甚至伴有严重的并发症，如肠出血、肠梗阻、癌变等。IBD终身复发倾向严重影响了患者的身心健康与生存质量，对公共医疗系统与社会经济发展造成了巨大的压力。
[0003]虽然IBD的病因尚未明确，但目前普遍认为遗传因素、环境因素和患者的免疫状态是起始IBD发病的重要导火索。大量研究表明，IBD发生的第一阶段是由遗传因素或环境因素引起肠道上皮屏障功能损坏，导致肠腔内的微生物抗原移位进入肠道黏膜固有层，随后进入第二阶段，即肠道固有层的免疫细胞对抗原进行强烈的免疫应答，并产生大量的细胞因子，如CCL2、TNF
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α、IL
‑
2、IL
‑
12IFN
‑
γ等引起黏膜炎症反应，若此时由于调节性T细胞的功能发生障碍等造成急性肠道炎症不能够被有效地控制，黏膜免疫细胞持续对抗原产生免疫应答并分泌细胞因子而逐渐地发展成慢性肠炎。
[0004]目前对IBD的治疗着眼于控制活动性炎症和调节免疫紊乱，常用的药物主要有有氨基水杨酸类药物、糖皮质激素、免疫抑制剂，如硫唑嘌呤、甲氨喋呤等以及生物制剂，包括TNF
‑
α单抗，如英夫利昔单抗、阿达木单抗等、α4β7整合素单抗，如维得利珠单抗、那他珠单抗等。但由于当前对IBD的认识较为局限，以上治疗手段中的最佳缓解方案也仅能使炎症性肠病的复发率降低50％左右，其治疗效果不佳，且副作用较大。因此，需要继续深入研究IBD的发病机制，开发疗效好、副作用小的新型治疗方案。
[0005]在人类基因组中，仅有1.5％的DNA序列具有编码蛋白质的功能，而其余的非蛋白编码序列中绝大多数被转录成长度大于200个碱基的长链非编码RNA(Long non
‑
coding RNA，lncRNA)，在多个层面上参与细胞分化和个体发育等重要生命过程的调控，并与人类的重大疾病密切相关。研究发现，一类由基因组上的增强子(Enhancer)元件转录产生的约200
‑
500bp长度的非编码RNA被称为增强子RNA(Enhancer RNA，eRNA)，通过调控染色质空间结构、改变组蛋白修饰状态等方式参与调控相关基因的时空表达，eRNA异常引起靶基因的表达调控异常可能是导致肠道急性炎症消退异常，进而引发IBD的原因。相较于传统药物，靶向eRNA药物的高效性、高特异性与低毒副作用使得eRNA有望成为诊断、治疗IBD的新靶点。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供增强子RNA作为靶点在制备防治或治疗炎症性肠病的药物中的应用，以解决上述本领域存在的问题。本专利技术的另一目的在于提供以上eRNA在诊断炎
症性肠病中的应用以及相关产品的制备。
[0007]具体地，本专利技术提供了SIRPA
‑
eRNA作为靶点在制备用于防治或治疗炎症性肠病的药物中的应用，SIRPA
‑
eRNA的序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。
[0008]本专利技术还提供了检测SIRPA
‑
eRNA的试剂在制备炎症性肠病的诊断剂或试剂盒中的应用，SIRPA
‑
eRNA的序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。
[0009]优选的，所述炎症性肠病为溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)。
[0010]具体的，其中所述试剂为SIRPA
‑
eRNA特异性探针或PCR引物。
[0011]本专利技术还提供了用于降低或抑制SIRPA
‑
eRNA表达的化合物在制备用于防治或治疗炎症性肠病的药物中的应用，SIRPA
‑
eRNA的序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。
[0012]本专利技术还提供了一种用于防治或治疗炎症性肠病的药物，成分包含降低或抑制SIRPA
‑
eRNA表达的化合物；所述SIRPA
‑
eRNA的序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。
[0013]具体的，所述化合物为靶向SIRPA
‑
eRNA序列的反义寡核苷酸ASO。
[0014]优选的，靶向如SEQ ID NO.1所示的SIRPA
‑
eRNA序列的反义寡核苷酸ASO序列为5
’‑
AAAUCAGGTGCCAGGUGUCC
‑3’
，
[0015]靶向如SEQ ID NO.2所示的SIRPA
‑
eRNA序列的反义寡核苷酸ASO序列为5
’‑
ACCAUAGCAACAGTCAGAG
‑3’
。
[0016]优选的，所述炎症性肠病为溃疡性结肠炎或克罗恩病。
[0017]本专利技术利用ATAC
‑
seq、ChIP
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seq、RNA
‑
seq等技术从葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的肠炎小鼠模型中鉴定出一种从Sirpa基因位点转录的增强子RNA(序列如SEQ ID NO.2所示)，可以参与调控肠炎小鼠炎症消退期肠道巨噬细胞的SIRPα蛋白表达从而调控巨噬细胞的吞噬能力，吞噬功能增强的巨噬细胞有助于清除炎症条件下肠道的凋亡中性粒细胞，促进炎症消退；进一步通过RNA荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization，FISH)、荧光定量PCR等技术分析了炎症性肠病患者的肠道组织，结果显示患者肠道组织中eRNA含量显著上升。通过DSS诱导小鼠肠炎模型，给予针对所述RNA序列的反义寡核苷酸(ASO)处理后，小鼠肠道巨噬细胞的SIRPα蛋白表达降低，吞噬能力增强，同时小鼠的结肠长度显著增加，肠道调节性T细胞浸润增加，体重显著升高，肠炎症状显著减轻。因此，本专利技术的发现提示了在研发诊断炎症性肠病的方法或试剂盒以及制备防治炎症性肠病的药物中具有广泛的应用前景。
附图说明
[0018]图1为分析SIRPA mRNA在IBD患者活检结肠组织中表达升高。A：分析数据库GSE36807、GSE73661和GSE9452健康对照和IBD患者的结肠组织SIRPA mRNA表达水平；B：分析数据库GSE14580、GSE12251对英夫里昔单抗响应及不响应的IBD患者结肠组织SIRPA mRNA表达水平；C：分析数据库GSE73661对维多利珠单抗响应及不响应的IBD患者结肠组织SIRPA m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.SIRPA
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eRNA作为靶点在制备用于防治或治疗炎症性肠病的药物中的应用，SIRPA
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eRNA的序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。2.检测SIRPA
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eRNA的试剂在制备炎症性肠病的诊断剂或试剂盒中的应用，SIRPA
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eRNA的序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述炎症性肠病为溃疡性结肠炎或克罗恩病。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，其中所述试剂为SIRPA
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eRNA特异性探针或PCR引物。5.用于降低或抑制SIRPA
‑
eRNA表达的化合物在制备用于防治或治疗炎症性肠病的药物中的应用，SIRPA
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eRNA的序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。6.一种用于防治或治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，成分包含降低或抑制SIRPA

【专利技术属性】
技术研发人员：王青青，熊佳，晋凯风，邹霭萱，来利华，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：