检测多种猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物探针组和试剂盒制造技术

本发明专利技术适用于病毒检测技术领域，提供了一种检测多种猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物探针组和试剂盒，其中，引物探针组包括：欧洲型毒株的特异性引物PRRSV

【技术实现步骤摘要】
检测多种猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物探针组和试剂盒


[0001]本专利技术属于病毒检测
，尤其涉及一种检测多种猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物探针组和试剂盒。

技术介绍

[0002]猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRR S)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的猪传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病，也是我国重点防范的动物疫病。根据基因组和抗原性差异，PRRSV分为欧洲型(I型)和美洲型(II型)，两者基因组同源性仅55％
‑
70％。在我国的流行株主要为美洲型NADC30like毒株，且美洲株毒力强、传播速度快、死亡率高，因此需要建立快速检测并鉴别欧洲型与美洲型PRRSV的检测方法。
[0003]目前报道的PRRSV荧光定量检测方法通常采用Taq
‑
man探针法检测病毒核酸，Taq探针法具有高效，灵敏度高，特异性强等特点，同时可以设计多对引物探针检测不同基因型毒株。但现有报道的检测方法通常只设计一对引物用于检测欧洲型(I型)或美洲型(II型)，以及通用型检测，无法用于鉴别诊断，临床检测效率较低，费时费力。

技术实现思路

[0004]本专利技术实施例的目的在于提供一种检测多种猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物探针组，旨在解决
技术介绍
中提出的问题。
[0005]针对上述问题，本专利技术实施例是这样实现的，多种猪繁殖与呼吸综合征病毒至少包括猪繁殖与呼吸综合征病毒的欧洲型毒株、美洲型毒株和NADC30like毒株；检测多种猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物探针组包括：
[0006]欧洲型毒株的特异性引物PRRSV
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EU
‑
F、PRRSV
‑
EU
‑
R以及探针PRRSV
‑
EU
‑
P；PRRSV
‑
EU
‑
F、PRRSV
‑
EU
‑
R以及PRRSV
‑
EU
‑
P的核苷酸序列分别如序列表SEQ ID NO.1
‑
3所示；
[0007]美洲型毒株的特异性引物PRRSV
‑
NA
‑
F、PRRSV
‑
NA
‑
R以及探针PRRSV
‑
NA
‑
P；PRRSV
‑
NA
‑
F、PRRSV
‑
NA
‑
R以及PRRSV
‑
NA
‑
P的核苷酸序列分别如序列表SEQ ID NO.4
‑
6所示；
[0008]NADC30like毒株的特异性引物PRRSV
‑
NL
‑
F、PRRSV
‑
NL
‑
R以及探针PRR SV
‑
NL
‑
P；PRRSV
‑
NL
‑
F、PRRSV
‑
NL
‑
R以及PRRSV
‑
NL
‑
P的核苷酸序列分别如序列表SEQ ID NO.7
‑
9所示。
[0009]作为本专利技术的一个优选方案，探针PRRSV
‑
EU
‑
P、PRRSV
‑
NA
‑
P以及PRRS V
‑
NL
‑
P的5
′
端和3
′
端均分别标记有不同的荧光基团。
[0010]作为本专利技术的一个优选方案，所述荧光基团包括FAM、HEX、CY5和MGB。
[0011]本专利技术实施例的另一个目的在于提供一种述引物探针组在制备用于同时检测并鉴别多种猪繁殖与呼吸综合征病毒的试剂盒中的应用。
[0012]本专利技术实施例的另一个目的在于提供一种检测多种猪繁殖与呼吸综合征病毒的试剂盒，所述试剂盒为一步法多重RT
‑
PCR检测试剂盒，其包括上述引物探针组。
[0013]作为本专利技术的一个优选方案，PRRSV
‑
EU
‑
F在检测时的终浓度为0.2
‑
0.4μM、PRRSV
‑
EU
‑
R在检测时的终浓度为0.2
‑
0.4μM、PRRSV
‑
EU
‑
P在检测时的终浓度为0.1
‑
0.2μM；
[0014]PRRSV
‑
NA
‑
F在检测时的终浓度为0.4
‑
0.6μM、PRRSV
‑
NA
‑
R在检测时的终浓度为0.4
‑
0.6μM、PRRSV
‑
NA
‑
P在检测时的终浓度为0.2
‑
0.3μM；
[0015]PRRSV
‑
NL
‑
F在检测时的终浓度为0.5
‑
0.7μM、PRRSV
‑
NL
‑
R在检测时的终浓度为0.5
‑
0.7μM、PRRSV
‑
NL
‑
P在检测时的终浓度为0.3
‑
0.4μM。
[0016]作为本专利技术的一个优选方案，PRRSV
‑
EU
‑
F在检测时的终浓度为0.3μM、PR RSV
‑
EU
‑
R在检测时的终浓度为0.3μM、PRRSV
‑
EU
‑
P在检测时的终浓度为0.1μM；
[0017]PRRSV
‑
NA
‑
F在检测时的终浓度为0.5μM、PRRSV
‑
NA
‑
R在检测时的终浓度为0.5μM、PRRSV
‑
NA
‑
P在检测时的终浓度为0.3μM；
[0018]PRRSV
‑
NL
‑
F在检测时的终浓度为0.6μM、PRRSV
‑
NL
‑
R在检测时的终浓度为0.6μM、PRRSV
‑
NL
‑
P在检测时的终浓度为0.4μM。
[0019]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
[0020]本专利技术实施例提供的检测多种猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物探针组，能够实现同时快速鉴别检测PRRSV欧洲型(I型)、美洲型(II型)、NADC3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测多种猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物探针组，其特征在于，多种猪繁殖与呼吸综合征病毒至少包括猪繁殖与呼吸综合征病毒的欧洲型毒株、美洲型毒株和NADC30like毒株；所述引物探针组包括：欧洲型毒株的特异性引物PRRSV
‑
EU
‑
F、PRRSV
‑
EU
‑
R以及探针PRRSV
‑
EU
‑
P；PRRSV
‑
EU
‑
F、PRRSV
‑
EU
‑
R以及PRRSV
‑
EU
‑
P的核苷酸序列分别如序列表SEQ ID NO.1
‑
3所示；美洲型毒株的特异性引物PRRSV
‑
NA
‑
F、PRRSV
‑
NA
‑
R以及探针PRRSV
‑
NA
‑
P；PRRSV
‑
NA
‑
F、PRRSV
‑
NA
‑
R以及PRRSV
‑
NA
‑
P的核苷酸序列分别如序列表SEQ ID NO.4
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6所示；NADC30like毒株的特异性引物PRRSV
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NL
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F、PRRSV
‑
NL
‑
R以及探针PRRSV
‑
NL
‑
P；PRRSV
‑
NL
‑
F、PRRSV
‑
NL
‑
R以及PRRSV
‑
NL
‑
P的核苷酸序列分别如序列表SEQ ID NO.7
‑
9所示。2.根据权利要求1所述的检测多种猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物探针组，其特征在于，探针PRRSV
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EU
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P、PRRSV
‑
NA
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P以及PRRSV
‑
NL
‑
P的5
´
端和3
´
端均分别标记有不同的荧光基团。3.根据权利要求2所述的检测多种猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物探针组，其特征在于，所述荧光基团包括FAM、HEX、CY5和MGB。4.如权利要求1
‑
3中任一项所述引物探针组在制备用于同时检测并鉴别多种猪繁殖与呼吸综合征病毒的试...

【专利技术属性】
技术研发人员：周闯，颜丽强，符舒欣，丰胜，陈园园，郭誉，
申请(专利权)人：江西硕卓科技有限公司，
类型：发明
国别省市：