一株高产愈创木酚的产氮假单胞菌YF-58及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一株高产愈创木酚产氮假单胞菌YF

【技术实现步骤摘要】
一株高产愈创木酚的产氮假单胞菌YF
‑
58及其应用


[0001]本专利技术涉及菌株筛选
，尤其涉及一株高产愈创木酚的产氮假单胞菌YF
‑
58及其应用。

技术介绍

[0002]白酒有五千多年的深厚历史，风格特征独特。大曲作为白酒酿造的发酵剂，可以为白酒提供众多有益微生物、酶及风味物质。同时研究结果表明，白酒中含有众多对人体有益的微量成分，适量饮用白酒对人们的身体健康有诸多好处。近年来，人们对饮食健康的日益重视，白酒作为日常不可缺少的饮品，也朝着健康、安全的方面进行发展。
[0003]在白酒的生产过程中，会产生一些酚类物质如愈创木酚、香草醛、香草酸等酚类化合物，它们具有良好的抗氧化的功效，可以降低血糖、抗血栓、抗炎镇痛、抗自由基、预防心血管疾病等功能。提高白酒中酚类物质的含量对白酒品质的提升具有重要意义。
[0004]当前关于提高白酒中愈创木酚的研究较少。为此提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]为解决上述问题，本申请从酒曲中筛选可高产愈创木酚的原生菌种，通过发酵提升白酒中愈创木酚功效物质的含量，为提高白酒健康因子含量提供新的发酵菌源。
[0006]本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一株产氮假单胞菌(Pseudomonas azotoformans)YF
‑
58，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为：2023年3月23日，保藏编号为：CGMCC No.26879。
[0008]本专利技术还提供了一种愈创木酚功能麸曲，所述麸曲中添加有产氮假单胞菌YF
‑
58。
[0009]本专利技术还提供了一种所述的愈创木酚功能麸曲的制备方法，包括如下步骤：
[0010](1)将麸皮与水按照质量比0.5～1.5:0.5～1.5混合，灭菌，得到麸皮培养物；
[0011](2)将所述产氮假单胞菌YF
‑
58接种至LB液体培养基中，制备种子液：
[0012](3)将所述种子液按照体积百分比8～12％接种到所述麸皮培养物中，于28～32℃下培养3～4d。
[0013]优选的，所述产氮假单胞菌YF
‑
58接种至LB液体培养基的接种量为种子液体积的1～2％。
[0014]优选的，所述LB液体培养基的配方为：每1000mL水中包括胰蛋白胨8～12g，酵母提取物4～6g，氯化钠8～12g。
[0015]优选的，所述种子液的培养条件为：温度30～34℃，转速150～170rpm，时间20～28h。
[0016]本专利技术还提供了一种利用所述产氮假单胞菌YF
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58或所述愈创木酚功能麸曲或按照所述的制备方法得到的愈创木酚功能麸曲发酵白酒的应用。
[0017]优选的，发酵白酒时所述愈创木酚功能麸曲的添加量为发酵原料质量的2～3％。
[0018]本专利技术提供的菌株YF
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58为高产愈创木酚的原生菌种，通过发酵工艺提升白酒中功效物质愈创木酚的含量，与对照组相比实验组的愈创木酚含量提高了34.10％，提高白酒中的健康因子。
附图说明
[0019]图1为实施例1绘制的愈创木酚的标准曲线。
[0020]图2为实施例2培养的产氮假单胞菌YF
‑
58的菌落生长情况。
[0021]图3为实施例2中产氮假单胞菌YF
‑
58的革兰氏染色结果。
[0022]图4为实施例2的16S对比的系统进化树。
[0023]保藏说明
[0024]一株产氮假单胞菌(Pseudomonas azotoformans)YF
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58，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为：2023年3月23日，保藏编号为：CGMCCNo.26879。
具体实施方式
[0025]下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0026]实施例1
[0027]产氮假单胞菌YF
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58的筛选
[0028]本专利技术提供的产氮假单胞菌YF
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58是从丹泉酒业有限公司的酒曲中分离获得，分离过程如下：
[0029]1、称取1g酒曲，加入10ml无菌水中，在32℃摇床以160rpm洗脱30min，沉淀，吸取1ml上清液，加入100ml的LB液体培养基中，在摇床中以32℃、160rpm的条件培养24h，获得培养液。
[0030]LB液体培养基：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，水1000mL。
[0031]2、将步骤1获得的培养液进行梯度稀释，取0.5mL稀释倍数为10
‑4、10
‑5、10
‑6的培养液涂布于阿魏酸乙酯培养基中，于32℃下培养3天；选取透明圈较大且生长良好的菌株纯种划线分离后，将其接种于刚果红培养基中，于32℃下在培养3天，挑取透明圈较大且生长良好的单菌落进行划线保存。
[0032]阿魏酸乙酯培养基：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，15mL阿魏酸乙酯(10％(v/v)溶于二甲基甲酰胺)，琼脂18g，水1000mL。
[0033]刚果红培养基：羧甲基纤维素钠5g，(NH4)2SO42g，MgSO40.5g，KH2PO41g，NaCl 0.5g，琼脂18g，水1000mL。
[0034]3、最后将透明圈初筛优选菌株(YF
‑
11、YF
‑
24、YF
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37、YF
‑
52、YF
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58)分别接种于LB液体培养基中，32℃、160rpm培养24h，将得到的各种子液按5％的接种量再分别接入麸皮培养基中，于32℃、160rpm的条件下培养6d后，得到各菌株的麸皮发酵液。
[0035]麸皮培养基：麸皮5g，水95mL。
[0036]4、GCMS检测
[0037]样品处理：取上述麸皮发酵液分别于10000rpm下离心10min，取上清液按体积比1：
9与无水乙醇(GC级)混合。
[0038]采用外标法对愈创木酚进行定量检测：
[0039](1)愈创木酚标准液的配制：取不同体积的愈创木酚(GC级，上海麦克林生化科技股份有限公司)溶于无水乙醇(GC级，上海麦克林生化科技股份有限公司)中，得到浓度为560μg/L、1120μg/L、1680μg/L、2240μg/L、2800μg/L的标准溶液，用于绘制标准曲线，标准曲线见图1。
[0040](2)采取直接进样法进行定量检测：气象色谱条件为：色谱柱型号：DB
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5ms，进样口温度250℃，不分流模式，初始柱温50℃，保持0min；以20℃/min速度升温至1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株产氮假单胞菌(Pseudomonasazotoformans)YF
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58，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为：2023年3月23日，保藏编号为：CGMCCNo.26879。2.一种愈创木酚功能麸曲，其特征在于，所述麸曲中添加有权利要求1所述的产氮假单胞菌YF
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58。3.一种权利要求2所述愈创木酚功能麸曲的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将麸皮与水按照质量比0.5～1.5:0.5～1.5混合，灭菌，得到麸皮培养物；(2)将所述产氮假单胞菌YF
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58接种至LB液体培养基中，制备种子液：(3)将所述种子液按照体积百分比8～12％接种到所述麸皮培养物中，于28～32℃下培养3～4d。4.如权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：张文学，杜亚珂，朱敏，夏玙，张子洁，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：