本发明专利技术公开了CREBRF作为电离辐射损伤标志物或肿瘤放化疗靶点的应用。具体地公开了生物标志物、检测该生物标志物的物质、检测该生物标志物RNA的m6A修饰水平的物质在检测或评估电离辐射损伤或暴露中的应用。本发明专利技术还公开了该生物标志物作为放化疗靶点在制备抗肿瘤药物、放化疗增敏剂中的应用。通过敲减CREBRF基因的实验证明，下调CREBRF的表达能够抑制肿瘤细胞增殖，提高肿瘤细胞对电离辐射的敏感性，促进细胞凋亡，将细胞周期阻滞于G1/S期，并可以抑制电离辐射和/或化疗药物诱导的DNA损伤的修复，加重细胞DNA损伤。本发明专利技术提供了新的电离辐射损伤标志物、宫颈癌与骨肉瘤的治疗靶点，具有广泛的临床应用前景。具有广泛的临床应用前景。
【技术实现步骤摘要】
CREBRF作为电离辐射损伤标志物或肿瘤放化疗靶点的应用
[0001]本专利技术涉及分子生物学和生物医药
，具体涉及CREBRF作为电离辐射损伤标志物或肿瘤放化疗靶点的应用。
技术介绍
[0002]随着涉核技术的发展及放射医学的进步，人们的工作和生活也与电离辐射息息相关。电离辐射(ionizing radiation，IR)作为一种影响人类健康的致损或致癌物质，能够诱导多种生物学效应。目前，主要来源于环境、医疗和职业的辐射暴露。人们在享受核工业和核医学所带来的便利的同时，应该更多地关注辐射所造成的损伤效应，探索快速、准确、高通量的电离辐射损伤标志物，检测或评估电离辐射损伤或暴露的风险，为核污染、核辐射事故和核灾难中等公共卫生事件中人群的分类和救治做好准备。目前常用于检测是否遭受电离辐射的生物学方法，包括临床指征、外周血淋巴细胞计数和细胞遗传学技术。生物标志物是一种可以被检测到的生化指标，能个性化地反映不同个体受到辐射损伤的情况，可靠的生物标志物对于快速准确评估电离辐射吸收剂量并实施有效的应对措施至关重要。电离辐射标志物的研究多聚焦在蛋白质、DNA、RNA及代谢产物等方向，基于RNA的表观修饰的电离辐射标志物的研究较少。电离辐射能否导致RNA的m6A修饰改变，这些修饰改变的基因或者编码的蛋白质在电离辐射损伤后细胞命运的抉择中发挥的作用有待探索。目前临床上仍缺乏更为及时、稳定、敏感、特异的电离辐射损伤标志物。
[0003]CREB3(也称为Luman)是CREB家族(CREB1、CREB2和CREB3)的主要成员。CREB家族蛋白可以通过识别并结合与cAMP敏感基因的cAMP响应元件(cAMP response element，CRE)调节转录。CREB3转录因子家族是属于bZIP家族的内质网定位蛋白。它们从内质网转运到高尔基体，被S1P和S2P蛋白酶切割，释放的N末端结构域充当转录因子。CREB3家族成员调节多种基因的表达，在脂质代谢、发育、存活、分化、细胞器自动调节和蛋白质分泌等方面发挥作用。它们作为细胞分泌能力和细胞特异性的调节者，参与内质网和高尔基体应激反应。CREBRF是CREB3的特异性负调节因子，是一种未折叠的蛋白质反应依赖性亮氨酸拉链转录因子。可从细胞核中募集核CREB3并促进CREB3的降解。最近的研究发现CREBRF
‑
CREB3轴心参与调节肿瘤细胞中的自噬，并且可以通过内质网应激途径参与诱导细胞凋亡，不仅如此，在一项全基因组关联研究中CREBRF被确定为一种肥胖基因。
[0004]尽管有少量报道证实CREBRF在内质网应激中发挥作用，但是CREBRF在电离辐射导致的DNA损伤后修复中的功能未见报道。电离辐射由于其高能量射线如X射线、γ射线，可以造成严重的DNA双链断裂损伤。临床上通常利用放疗、化疗药物等手段诱导肿瘤细胞发生DNA损伤，进而杀伤肿瘤细胞。目前电离辐射损伤后CREBRF的表达调控、CREBRF对细胞内DNA修复过程的影响及CREBRF作为肿瘤放化疗靶点的研究未见报道。
技术实现思路
[0005]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种生物标志物，或检测所述生物标志物的物
质，或检测所述生物标志物RNA的m6A修饰水平的物质在检测或评估电离辐射损伤或暴露程度中的应用，和/或，该生物标志物作为肿瘤放化疗靶点的应用。所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了生物标志物，或检测所述生物标志物的物质，或检测所述生物标志物RNA的m6A修饰水平的物质的下述任一种应用：
[0007]A1)在检测或评估电离辐射损伤或制备用于检测或评估电离辐射损伤的产品中的应用；
[0008]A2)在检测或评估电离辐射暴露程度或制备用于检测或评估电离辐射暴露程度的产品中的应用；
[0009]所述生物标志物(电离损伤标志物)可为CREBRF基因。
[0010]所述CREBRF基因编码CREBRF蛋白，所述CREBRF基因及其编码蛋白质可为人源的。所述CREBRF基因的核苷酸序列可为SEQ ID No.1。
[0011]所述CREBRF基因mRNA的Genbank登录号为NM_153607.3。
[0012]进一步地，所述CREBRF基因的mRNA在急性电离辐射刺激后m6A修饰水平显著升高，CREBRF基因的表达水平显著降低，CREBRF蛋白质的表达水平显著降低。
[0013]所述CREBRF基因的表达量变化和/或所述CREBRF蛋白质含量的变化可以作为判断受试者是否受到电离辐射损伤或暴露及暴露程度的依据。
[0014]所述CREBRF基因的mRNA的m6A修饰位点在CREBRF mRNA的CDS区域和3
’
UTR区域。
[0015]进一步地，急性电离辐射后CREBRF基因的显著差异RNAm6A修饰峰位于CDS区域的外显子3和3
’
UTR区。
[0016]所述检测所述生物标志物的物质包括下述至少任一种：
[0017]C1)特异性扩增CREBRF基因的引物；
[0018]C2)特异性识别CREBRF基因的探针；
[0019]C3)特异性结合CREBRF基因的物质；
[0020]C4)特异性结合CREBRF蛋白的物质。
[0021]所述检测所述生物标志物RNA的m6A修饰水平的物质包括但不限于基于TLC(薄层色谱法，thin layer chromatography)、Dot
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blot(斑点印迹法)、LC
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MS/MS(液相色谱串联质谱法)、MeRIP
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seq/m6A
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seq(RNA甲基化免疫沉淀测序)技术(包括m6A
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seq2)、m6A
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CLIP/miCLIP、m6A
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SEAL
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seq、m6A
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SAC
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Seq、Nanopore Direct RNA Seq、GLORI
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Seq、MeRIP
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qRT
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PCR(MeRIP
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qPCR)、SELECT(single
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base elongation
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and ligation
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based qPCR amplification method)和SCARLET技术检测CREBRF基因RNA的m6A修饰水平的试剂。
[0022]上述应用中，所述检测所述生物标志物的物质可为下述至少任一种：
[0023]B1)用于检测CREBRF基因的mRNA表达水平的试剂；
[0024]B2)用于检测CREBRF基因的蛋白质表达水平的试剂；
[0025]所本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.生物标志物，或检测所述生物标志物的物质，或检测所述生物标志物RNA的m6A修饰水平的物质的下述任一种应用：A1)在检测或评估电离辐射损伤或制备用于检测或评估电离辐射损伤的产品中的应用；A2)在检测或评估电离辐射暴露程度或制备用于检测或评估电离辐射暴露程度的产品中的应用；所述生物标志物为CREBRF基因。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测所述生物标志物的物质为下述至少任一种：B1)用于检测CREBRF基因的mRNA表达水平的试剂；B2)用于检测CREBRF基因的蛋白质表达水平的试剂；所述检测所述生物标志物RNA的m6A修饰水平的物质包括基于MeRIP
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qPCR技术检测CREBRF基因RNA的m6A修饰水平的引物对。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述引物对包括下述至少任一种：D1)由SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的单链DNA分子组成的引物对；D2)由SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示的单链DNA分子组成的引物对。4.检测或评估电离辐射损伤或暴露的产品，其特征在于，所述产品包括权利要求1
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3中任一所述的检测所述生物标志物的物质和/或检测所述生物标志物RNA的m6A修饰水平的物质。5.权利要求1中所述生物标志物的下述任一种应用：E1)作为靶点在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用；E2)作为靶点在制备放疗增敏剂或化疗增敏剂中的应用。6.CREBRF抑制剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：周钢桥，陈红霞，卢一鸣，张琦，赵曦，郝荣娇，路浩，全婧丹，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：
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