赤松茸发酵多糖提取物在制备减轻口腔溃疡症状药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于天然药物领域，具体涉及赤松茸发酵多糖提取物在制备减轻口腔溃疡症状药物中的应用。制备方法包括：步骤1：赤松茸子实体多糖培养液的制备；步骤2：酵母菌发酵；步骤3：多糖溶出；步骤4：醇溶性杂质的去除；步骤5：蛋白质的去除；步骤6：赤松茸子实体发酵多糖提取物A的分离；步骤7：赤松茸子实体发酵多糖提取物B的制备。本发明专利技术发现赤松茸发酵多糖提取物能显著抑制口腔溃疡致病菌生长，加快口腔溃疡愈合，减轻炎症反应程度等，将其制成口腔药物，具有温和、安全、无异味、无毒副作用和有效减轻口腔溃疡症状等优点。口腔溃疡症状等优点。口腔溃疡症状等优点。

【技术实现步骤摘要】
赤松茸发酵多糖提取物在制备减轻口腔溃疡症状药物中的应用


[0001]本专利技术属于天然药物领域，具体涉及赤松茸发酵多糖提取物在制备减轻口腔溃疡症状药物中的应用。

技术介绍

[0002]复发性口腔溃疡(Recurrent oral ulcer,ROU)是最常见的口腔黏膜病，患病率高达50％。其表现为口腔黏膜上的浅表溃疡，黄豆粒大小，呈圆形或椭圆形黏膜损伤。ROU的具体发病机制尚不明确，病因涉及微量元素缺乏、神经精神状态、感染、内分泌失调、免疫和微循环障碍等因素。该病发病周期短，病程较长，伴有明显疼痛，如不及时治疗，可能会导致严重口腔疾病，危及整个口腔，严重影响说话和进食，给患者的工作和生活带来很大影响和痛苦。
[0003]目前针对ROU在临床上一般以改善疼痛的对症治疗为主，尚缺乏有效的根治方法。其治疗方法主要为药物治疗，其中西药治疗主要包括维生素药物、抗生素类药物、皮质激素类药物和免疫类药物，虽然治疗作用明确，使用方便，但是常会引起口腔菌群失调，而且副作用较大；中医药物多为传统的中药汤剂，安全性高，但其成分复杂多样、缺乏统一的标准原则，而且见效慢。

技术实现思路

[0004]本专利技术发现赤松茸发酵多糖提取物能显著抑制口腔溃疡致病菌生长，加快口腔溃疡愈合，减轻炎症反应程度等，将其制成口腔药物，具有温和、安全、无异味、无毒副作用和有效减轻口腔溃疡症状等优点。
[0005]本专利技术采用以下技术方案：
[0006]第一方面，本专利技术提供上述赤松茸发酵多糖提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0007]步骤1：赤松茸子实体多糖培养液的制备：
[0008]向每1000mL赤松茸子实体多糖滤液中加有葡萄糖40g、蛋白胨10g，得赤松茸子实体多糖培养液；
[0009]其中，赤松茸子实体多糖滤液采用以下方法制备：将赤松茸子实体干燥后打粉，按照料液比1:30(g/mL)加入蒸馏水浸泡过夜后进行超声提取，过滤后收集赤松茸子实体多糖滤液。超声温度60℃，超声时间60min。
[0010]步骤2：益生菌(酵母菌)发酵：
[0011]在赤松茸子实体多糖培养液中按照2.5％接种量加入布拉式酵母菌菌液和产朊假丝酵母菌菌液，28℃、160r/min摇床培养48h，得到赤松茸子实体多糖发酵液。所述2.5％接种量是指每100mL赤松茸子实体多糖培养液中加入的布拉式酵母菌菌液和产朊假丝酵母菌菌液共计2.5mL(布拉式酵母菌菌液和产朊假丝酵母菌菌液分别为1.25mL，布拉式酵母菌菌液和产朊假丝酵母菌菌液的OD
600
均为1)。
[0012]酵母菌液的制备方法如下：首先活化酵母菌菌种，具体的，分别挑取3mm2左右布拉式酵母菌和产朊假丝酵母菌菌种接种到100mL沙氏液体培养基中，在30℃、160r/min的恒温摇床培养箱中培养10～14h。然后将上述活化的菌液按10％的接种量接种到新的沙氏液体培养基中，在30℃、160r/min的恒温摇床培养箱中培养10～14h。接着分别将布拉式酵母菌菌液和产朊假丝酵母菌菌液调至OD
600
＝1。
[0013]步骤3：多糖溶出：
[0014]在赤松茸子实体多糖发酵液中按照体积比1:1加入蒸馏水进行稀释，在功率60W、温度70℃条件下超声30min；再加入蛋白酶至终浓度10mg/mL，45℃条件下进行酶解6h，13000r/min离心10min后取上清液。本步骤中，超声和蛋白酶联用破坏酵母菌细胞壁，增加多糖溶出效率和速率。
[0015]步骤4：醇溶性杂质的去除：
[0016]将上清液浓缩至适当体积，加入3倍体积的无水乙醇，4℃静置24h，4000r/min离心10min，取沉淀。本步骤中采用乙醇进行初步纯化，以去除醇溶性杂质。
[0017]步骤5：蛋白质的去除：
[0018]将步骤4得到的沉淀复溶于水后加入2倍体积的Sevage试剂(V
氯仿
：V
正丁醇
为4：1)，震荡15min，4000r/min，离心10min，取上清液。重复此步骤3次，最后得到上清液，浓缩至适当浓度后真空冷冻干燥，得到沉淀。本步骤是对步骤4得到的产物进行进一步纯化，去除蛋白质。
[0019]步骤6：赤松茸子实体发酵多糖提取物A的分离：
[0020]采用阴离子交换柱对赤松茸子实体发酵多糖提取物进行分离，得到赤松茸子实体发酵多糖提取物A。
[0021]具体操作步骤如下：选取1.6
×
30cm的DEAE
‑
52阴离子交换柱进行装柱，蒸馏水持续平衡12h，将步骤5得到的沉淀用蒸馏水配制成10mg/mL的溶液，0.45μm滤膜过滤，上样量为2mL。通过蒸馏水洗脱出中性多糖，真空冷冻干燥，获得沉淀，即得到赤松茸子实体发酵多糖提取物A。
[0022]步骤7：赤松茸子实体发酵多糖提取物B的制备：
[0023]将步骤6得到的沉淀加水复溶后，通过乙醇分级沉淀得到40％乙醇沉淀物，浓缩后冷冻干燥，得到赤松茸子实体发酵多糖提取物B。
[0024]第二方面，本专利技术提供了上述方法制备的赤松茸发酵多糖提取物，所述赤松茸发酵多糖提取物为赤松茸子实体发酵多糖提取物A、赤松茸子实体发酵多糖提取物B或赤松茸子实体发酵多糖提取物A和赤松茸子实体发酵多糖提取物B的混合物。
[0025]第三方面，本专利技术提供了上述赤松茸发酵多糖提取物在制备减轻口腔溃疡症状药物中的应用。
[0026]本专利技术的有益效果为：
[0027]本专利技术赤松茸多糖提取物为赤松茸子实体发酵多糖，纯度达93％以上，生物活性高，发酵和制备工艺简单、质量稳定、成本低廉。
[0028]本专利技术赤松茸子实体发酵多糖能显著抑制口腔溃疡致病菌生长，加快口腔溃疡愈合，减轻炎症反应程度等，将其制成含漱剂、含片、口腔喷雾、凝胶剂、膜记等，具有温和、安全、无异味、无毒副作用和有效减轻口腔溃疡症状等优点。
附图说明
[0029]图1为赤松茸子实体发酵多糖提取物提取物A、B和两种复配组合物的抑菌作用；图中左边两张图为金黄色葡萄球菌，右边两张图为变异链球菌。
[0030]图2为葡萄糖标准曲线及线性方程。
具体实施方式
[0031]下面通过具体实施方式对本专利技术进行更加详细的说明，以便于对本专利技术技术方案的理解，但并不用于对本专利技术保护范围的限制。
[0032]实施例1
[0033]赤松茸发酵多糖提取物的制备方法，包括：
[0034](1)赤松茸子实体多糖培养液的制备
[0035]将赤松茸子实体干燥后打粉，按照料液比1:30(g/mL)加入蒸馏水浸泡过夜后进行超声提取，超声温度60℃，超声时间60min，过滤后收集赤松茸子实体多糖滤液。
[0036]在1000mL赤松茸子实体多糖滤液中，加入葡萄糖40g、蛋白胨10g，搅拌均匀后采用高温高压灭菌，121℃下灭菌20min，冷却后得到赤松茸子实体多糖培养液。
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.赤松茸发酵多糖提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：赤松茸子实体多糖培养液的制备：向每1000 mL赤松茸子实体多糖滤液中添加葡萄糖40 g、蛋白胨10 g，得赤松茸子实体多糖培养液；步骤2：酵母菌发酵：在赤松茸子实体多糖培养液中加入布拉式酵母菌菌液和产朊假丝酵母菌菌液，28 ℃摇床培养，得到赤松茸子实体多糖发酵液，每100mL赤松茸子实体多糖培养液中加入的布拉式酵母菌菌液和产朊假丝酵母菌菌液共2.5mL；步骤3：多糖溶出：在赤松茸子实体多糖发酵液中加入蒸馏水进行稀释，超声后再加入蛋白酶 至终浓度10 mg/mL，45℃下进行酶解，离心后取上清液；步骤4：醇溶性杂质的去除：将上清液浓缩，加入3倍体积的无水乙醇，4 ℃静置，离心取沉淀；步骤5：蛋白质的去除：将步骤4得到的沉淀复溶于水后加入2倍体积的Sevage试剂，震荡，离心取上清液，浓缩后真空冷冻干燥，得到沉淀即为赤松茸子实体发酵多糖提取物；步骤6：赤松茸子实体发酵多糖提取物A的分离：采用阴离子交换柱对赤松茸子实体发酵多糖提取物进行分离，得到赤松茸子实体发酵多糖提取物A；步骤7：赤松茸子实体发酵多糖提取物B的制备：将步骤6得到的沉淀加水复溶后，通过乙醇分级沉淀得到40 %乙醇沉淀物，浓缩后冷冻干燥，得到赤松茸子实体发酵多糖提取物B。2.根据权利要求1所述的赤松茸发酵多糖提取物的制备方法，其特征在于，步骤1中，赤松茸子实体多糖滤液采用以下方法制备：将赤松茸子实体干燥后打粉，按照料液比1g:30mL加入蒸馏水浸泡过夜后进行超声提取，过滤后收集赤松茸子实体多糖滤液。3.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏磊，景炳年，王伟，卢明华，刘雨晴，李宁洁，谢晓阳，陈飞，李晓，王学方，
申请(专利权)人：河南省科学院，
类型：发明
国别省市：