用于产生针对肽-MHC复合物的治疗性抗体的经过基因修饰的非人动物、其制造方法和用途技术

利用编码人或人源化MHC分子或缔合的分子，例如β2微球蛋白的序列对非人动物进行基因修饰，并且所述非人动物对所述序列的表达诱导对从中获得所述人或人MHC分子的相应人HLA的耐受性。当此类HLA呈递对非人动物来说具有抗原性的肽时，这些非人动物所展示的耐受性允许这些动物对相应人HLA产生特异性抗体应答。特异性靶向所关注的pMHC复合物并且不结合于MHC分子的此类抗体应答可用于靶向免疫突触的组分的免疫治疗模态中，这提供了相互作用的特异性。异性。异性。

【技术实现步骤摘要】
用于产生针对肽
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MHC复合物的治疗性抗体的经过基因修饰的非人动物、其制造方法和用途
[0001]本申请是申请号为201980021918.5、申请日为2019年3月22日、专利技术名称为“用于产生针对肽
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MHC复合物的治疗性抗体的经过基因修饰的非人动物、其制造方法和用途”的中国专利技术专利申请的分案申请，原申请为国际申请号为PCT/US2019/023609的国家阶段申请，该国际申请要求以下美国临时专利申请号的优先权权益：2018年3月24日提交的第62/647,720号及2018年3月24日提交的第62/647,724号，每个申请以全文引用的方式并入本文中。


[0002]本文公开了进行基因修饰的非人动物(例如啮齿动物(例如大鼠、小鼠等))，其耐受人(源化)MHC分子(例如但不限于空人(源化)MHC分子)，或者其肽结合部分(例如MHC分子的肽结合槽)，以使得当人(源化)MHC分子呈递对非人动物来说是外来物的肽或者与肽复合时，例如当人(源化)MHC分子为肽/MHC(pMHC)复合物的一部分时非人动物可对人(源化)MHC分子产生稳固的B细胞应答，其中所述肽对非人动物来说是异源的。此类动物可用于产生针对病原性pMHC复合物的治疗性抗原结合蛋白，例如在人HLA的背景下呈递的自身免疫原性人自身肽。

技术介绍

[0003]虽然T细胞在适应性抗感染或抗肿瘤应答中发挥重要作用，但它们也在例如自身免疫和移植排斥应答等不适应免疫应答中起作用。一般来讲，T细胞介导的免疫应答涉及T细胞与抗原呈递细胞(APC)之间的紧密接触。几个分子之配对与触发T细胞活性的免疫突触的形成有关，所述分子包括但不限于(a)T细胞上的T细胞受体(TCR)，其特异性结合于APC上的主要组织相容性复合物(MHC)分子的肽结合槽中呈递的肽；和(b)与APC上的B7分子配对的CD28(T细胞上)。TCR与CD3分子一起形成TCR复合物，并在TCR与肽
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MHC(pMHC)复合物配对时，通过CD3传送信号。通过TCR复合物与T细胞上的CD28进行信号传导引起T细胞的活化。
[0004]治疗疾病之免疫治疗性方法用于体内调控T细胞活性，例如下调自身免疫和移植排斥应答等。然而，此类方法通常缺乏特异性，因为许多免疫疗法通过结合CD3和/或共刺激分子的配对等，靶向通过TCR复合物进行的信号传导。此类方法常常引起不合需要的副作用，例如活性过高的免疫应答或通用免疫抑制。因此，利用TCR与pMHC复合物之间的独特相互作用的疗法可以提供在体内调节特定T细胞活性的能力，并且基于T细胞调节提供新的治疗。

技术实现思路

[0005]公开了进行基因修饰并耐受人HLA分子和/或β2微球蛋白并且还能够产生人或人源化抗体的非人动物(例如哺乳动物，例如啮齿动物，例如大鼠或小鼠)。(1)这些非人动物对人HLA分子的耐受性与(2)这些非人动物提供人源化抗原结合蛋白的能力这两方面允许
它们用作分离细胞的独特平台，可用于体外研究，例如同种异体反应的研究，和/或用于产生特异性结合于所关注肽
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MHC复合物的人或人源化抗原结合蛋白，只有所述抗原结合蛋白准备好作为有用的治疗剂。因此，本文还提供了制备和使用本文所公开的非人动物以及细胞、组织、核酸和从中分离的抗原结合蛋白的方法。
[0006]在一些实施方案中，经过基因修饰的非人动物包含(a)编码人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分的核苷酸序列；和(b)(未)重排的人或人源化免疫球蛋白重链基因座和/或(未)重排的人或人源化免疫球蛋白轻链基因座，任选地其中(未)重排的人或人源化免疫球蛋白重链基因座和/或(未)重排的人或人源化免疫球蛋白轻链基因座中的至少一个未重排，其中经过基因修饰的非人动物表达所述人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分，其中经过基因修饰的非人动物表达包含人或人源化重链可变结构域和/或人或人源化轻链可变结构域的免疫球蛋白，并且其中所述非人动物耐受人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分，使得当用包含(i)对非人动物来说为异源的肽与(ii)从中获得所述人或人源化MHC分子的人HLA分子或其一部分复合的抗原肽
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MHC(pMHC)复合物进行免疫接种时，非人动物产生特异性B细胞应答。在一些实施方案中，经过基因修饰的非人动物进一步包含抗原肽
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MHC(pMHC)复合物，所述复合物包含对非人动物来说为异源的肽与从中获得人或人源化MHC分子的人HLA分子缔合。在一些实施方案中，经过基因修饰的非人动物进一步包含(c)一种抗原肽
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MHC(pMHC)复合物，所述复合物包含(i)对非人动物来说为异源的肽与(ii)从中获得人或人源化MHC分子的人HLA分子或其一部分缔合；以及(d)特异性结合抗原pMHC并且不结合从中获得人或人源化MHC分子的人HLA分子的人或人源化抗原结合蛋白。
[0007]在一些实施方案中，人或人源化MHC分子选自由以下组成的群组：人或人源化MHC I类分子、人或人源化MHC II类α分子、人或人源化MHC II类β分子或其任何组合。在一些实施方案中，人或人源化MHC分子是人或人源化MHC I类分子。在一些实施方案中，人或人源化MHC分子源自选自由以下组成的群组的HLA I类分子：HLA
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A分子、HLA
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B分子、HLA
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C分子和其任何组合。在一些实施方案中，经过基因修饰的非人动物在其基因组中，任选地在内源β2微球蛋白基因座上进一步包含编码人或人源化β2微球蛋白的核苷酸序列，其中所述非人动物表达所述人或人源化β2微球蛋白，使得所述非人动物耐受β2微球蛋白本身或与人或人源化I类分子缔合的β2微球蛋白。
[0008]在一些实施方案中，人或人源化MHC分子为人或人源化MHC II类分子，任选地其中所述人或人源化MHC分子来源于选自由HLA
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DP、HLA
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DQ、HLA
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DR分子和其任何组合组成的群组的HLA II类分子的α和/或β链，或至少肽结合槽。
[0009]在一些实施方案中，人或人源化MHC分子为人HLA分子。在一些实施方案中，非人动物在内源MHC基因座处包含编码人HLA分子的核苷酸序列，任选地其中该核苷酸序列替换编码内源MHC分子的内源核酸序列。在一些实施方案中，非人动物在异位基因座处包含编码人HLA分子的核苷酸序列。在一些实施方案中，非人动物在ROSA26基因座处包含编码人HLA分子之核苷酸序列。在一些实施方案中，非人动物针对内源MHC基因座、异位基因座或ROSA26基因座处的核苷酸序列是纯合的。在一些实施方案中，非人动物针对内源MHC基因座、异位基因座或ROSA26基因座处的核苷酸序列是杂合的。
[0010]在一些实施方案中，人或人源化MHC分子为人源化MHC分子，例如嵌合MHC分子。在一些实施方案中，非人动物在内源MHC基因座处包含编码嵌合MHC分子的核苷酸序列，任选
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人免疫球蛋白可变结构域，所述人免疫球蛋白可变结构域通过在细胞中表达包含重排的人免疫球蛋白可变区基因序列的第一核酸而制造，所述重排的人免疫球蛋白可变区基因序列编码由非人动物的淋巴细胞或由所述淋巴细胞产生的杂交瘤表达的人免疫球蛋白可变结构域，其中所述非人动物包含(i)编码人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分的核苷酸序列；和(ii)(未)重排的人或人源化免疫球蛋白重链基因座和/或(未)重排的人或人源化免疫球蛋白轻链基因座，任选地其中所述(未)重排的人或人源化免疫球蛋白重链基因座和/或(未)重排的人或人源化免疫球蛋白轻链基因座中的至少一个未重排，其中所述经过基因修饰的非人动物表达所述人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分，其中所述经过基因修饰的非人动物表达包含人或人源化重链可变结构域和/或人或人源化轻链可变结构域的免疫球蛋白，和其中所述非人动物耐受所述人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分，使得当用抗原肽
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MHC(pMHC)复合物进行免疫接种时，所述非人动物产生特异性B细胞应答，所述抗原pMHC复合物包含(a)与所述非人动物异源的肽，和(b)所述人或人源化MHC分子所来源的人HLA分子或其一部分，所述(a)与(b)复合，其中所述由淋巴细胞或由其产生的杂交瘤表达的人免疫球蛋白可变结构域缔合于其同源可变结构域，以形成对所述抗原pMHC复合物具有特异性的抗原结合结构域，任选地其中所述免疫球蛋白可变结构域是免疫球蛋白重链可变结构域。2.一种包含人免疫球蛋白重链可变结构域和/或人免疫球蛋白轻链可变结构域的宿主细胞，所述宿主细胞通过包括从非人动物分离核酸的方法获得，所述核酸包含重排的人免疫球蛋白可变区基因序列，所述重排的人免疫球蛋白可变区基因序列编码由所述非人动物的淋巴细胞或由所述淋巴细胞产生的杂交瘤表达的人免疫球蛋白可变结构域，其中所述非人动物包含(i)编码人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分的核苷酸序列；和(ii)(未)重排的人或人源化免疫球蛋白重链基因座和/或(未)重排的人或人源化免疫球蛋白轻链基因座，任选地其中所述(未)重排的人或人源化免疫球蛋白重链基因座和/或(未)重排的人或人源化免疫球蛋白轻链基因座中的至少一个未重排，其中所述经过基因修饰的非人动物表达所述人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分，其中所述经过基因修饰的非人动物表达包含人或人源化重链可变结构域和/或人或人源化轻链可变结构域的免疫球蛋白，和其中所述非人动物耐受所述人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分，使得当用抗原肽
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MHC(pMHC)复合物进行免疫接种时，所述非人动物产生特异性B细胞应答，所述抗原pMHC复合物包含(a)与所述非人动物异源的肽，和(b)所述人或人源化MHC分子所来源的人HLA分子或其一部分，所述(a)与(b)复合，
其中所述由淋巴细胞或由其产生的杂交瘤表达的人免疫球蛋白可变结构域缔合于其同源可变结构域，以形成对所述抗原pMHC复合物具有特异性的抗原结合结构域。3.一种获得表达人免疫球蛋白重链可变结构域和/或人免疫球蛋白轻链可变结构域的细胞的方法，其包括分离包含根据权利要求1或2所述的人免疫球蛋白重链可变结构域和/或人免疫球蛋白轻链可变结构域的淋巴细胞，其中所述淋巴细胞表达人免疫球蛋白可变结构域，其形成对所述抗原pMHC复合物具有特异性的抗原结合结构域。4.一种根据权利要求3所述的方法获得的分离细胞，例如生殖细胞、胚胎干细胞、体细胞(例如B细胞)。5.一种获得表达人免疫球蛋白重链可变结构域和/或人免疫球蛋白轻链可变结构域的细胞的方法，其包括分离包含根据权利要求1或2所述的核酸的淋巴细胞，其中所述淋巴细胞表达人免疫球蛋白可变结构域，其形成对所述抗原pMHC复合物具有特异性的抗原结合结构域。6.一种根据权利要求5所述的方法获得的分离细胞，例如生殖细胞、胚胎干细胞、体细胞(例如B细胞)。7.一种制造人免疫球蛋白可变结构域的体外方法，其包括在细胞中表达包含重排的人免疫球蛋白可变区基因序列的第一核酸，所述第一核酸通过包括从非人动物分离核酸的方法获得，所述核酸包含重排的人免疫球蛋白可变区基因序列，所述重排的人免疫球蛋白可变区基因序列编码由所述非人动物的淋巴细胞或由所述淋巴细胞产生的杂交瘤表达的人免疫球蛋白可变结构域，其中所述非人动物包含(i)编码人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分的核苷酸序列；和(ii)(未)重排的人或人源化...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：