一种呼吸道合胞病毒的全人源单克隆抗体及其应用制造技术

本文提供了结合呼吸道合胞病毒(RSV)F蛋白的人源抗体(hAb)或其抗原结合片段。本文还提供了该人源抗体(hAb)或其抗原结合片段在防治及检测RSV感染方面的用途。治及检测RSV感染方面的用途。治及检测RSV感染方面的用途。

【技术实现步骤摘要】
一种呼吸道合胞病毒的全人源单克隆抗体及其应用


[0001]本文涉及结合呼吸道合胞病毒(RSV)F蛋白的人源抗体(hAb)或其抗原结合片段。本文还涉及该抗体或其抗原结合片段在防治及检测RSV感染方面的用途。

技术介绍

[0002]呼吸道合胞病毒(RSV)是常见的呼吸道感染病原体。免疫力低下人群，包括老年人及婴幼儿为主要易感人群。它是世界上婴儿住院的主要原因，也是仅次于疟疾的婴儿死亡的第二大原因。RSV是一种丝状包膜、反义、单链RNA病毒，隶属于单核病毒目(Mononegavirales)、肺炎病毒科、正肺病毒属。这个家族还包括人偏肺病毒(hMPV)，它属于偏肺病毒属，和RSV一样，是感染儿童的主要病原体。RSV和hMPV感染的症状很难区分，虽然它们可以通过雾化飞沫传播，但它们通常都是通过密切接触传播的。在鼻咽和上呼吸道的上皮细胞复制一段短时间后，呼吸道合胞病毒感染可能会扩散到下呼吸道的小细支气管或肺泡。宿主对RSV感染的免疫反应增加了粘液的产生和炎症，导致气道变窄，导致幼儿患支气管炎。
[0003]RSV基因组全长15.2kb，包含10个基因，编码11个蛋白。RSV病毒粒子含有一个脂质双层，表达有融合蛋白(F)、附着蛋白(G)和小分子疏水蛋白(SH)。F和G蛋白比SH蛋白要丰富得多，SH蛋白是一种五聚体离子通道，被认为与延缓感染细胞的凋亡有关。其中，F蛋白(I型整合膜融合蛋白)在介导RSV病毒与宿主细胞膜的融合以及致病过程中起关键作用。F蛋白呈现两种不同的构象，一种是“棒棒糖”形状的预融合(pre
‑<br/>F)状态，在病毒与细胞相互作用之前存在于病毒表面；另一种是“拐杖状”的融合后状态(post
‑
F)，它是在病毒与细胞膜融合后获得的，或者是由未知的机制自发地从高度稳定的pre
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F重排到能量有利的post
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F构象。这两种形式在抗原性上是截然不同的，都被认为是潜在的候选疫苗。然而，前一种形式已被证明能在自然感染或免疫后诱导大多数高度中和抗体，使其成为疫苗开发的首选抗原。事实上，F蛋白免疫原性最强的两个位点，命名为位点和位点V，只存在于pre
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F构象上，而免疫原性较低的位点(位点I、位点II、位点III和位点IV)在该抗原的pre
‑
F形式和post
‑
F形式之间共享。
[0004]最早用于预防RSV感染的是Medimmune开发的RespiGam，这是一种混合人静脉免疫球蛋白(IVIG)，含有高浓度的RSV保护性抗体。它在高危婴儿中预防由RSV感染导致的严重下呼吸道感染具有明显的疗效。随着Palivizumab(Synagis)的推出，Medimmune于2003年自愿停止使用RespiGam。Palivizumab是一种能与RSV F蛋白结合的人源的鼠源性单克隆抗体。它也是第一个、也是唯一被批准用于人类治疗的抗病毒单克隆抗体。对于妊娠小于32周的高危早产儿在出院后前6个月内，palivizumab预防可以有效地减少RSV住院时间。这一批准为被动免疫预防提供了概念证明。但因其成本和效果有限，与RespiGam一样，目前也仅被批准用于早产儿和出生时患有心肺疾病的婴儿预防RSV。
[0005]开发可供所有新生儿注射的更有效的RSV抗体，将有利于直接保护这一脆弱群体免受RSV感染。因此，筛选广谱高中和活性的RSV抗体，对于临床预防RSV疾病具有重要的现
实意义。同时，通过生物结构功能分析抗体与RSV F蛋白结合的保守表位，对于亚单位疫苗的设计及开发也具有潜在的指导作用。

技术实现思路

[0006]一方面，本文提供了结合呼吸道合胞病毒F蛋白的人源抗体或其抗原结合片段，所述人源抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:2或4所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3所示的轻链可变区包含的LCDR1，LCDR2和LCDR3；优选地，按照IMGT编号系统，所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3选自如下组合之一：
[0007](1)HCDR1的氨基酸序列为:GFLFSSYS(SEQ ID NO：10)；
[0008]HCDR2的氨基酸序列为:ISFDGSER(SEQ ID NO：11)；
[0009]HCDR3的氨基酸序列为:AKTWVDRTLSLDS(SEQ ID NO：12)；
[0010](2)HCDR1的氨基酸序列为:GFLFSCYS(SEQ ID NO：13)；
[0011]HCDR2的氨基酸序列为:MSFDGSEI(SEQ ID NO：14)；
[0012]HCDR3的氨基酸序列为:ARTWVDRTLSLDH(SEQ ID NO：15)；优选地，按照IMGT编号系统，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3如下所示：
[0013]LCDR1的氨基酸序列为:QGIKNA(SEQ ID NO：16)，
[0014]LCDR2的氨基酸序列为:AAS(SEQ ID NO：17)，
[0015]LCDR3的氨基酸序列为:LQDYSYPWT(SEQ ID NO：18)；
[0016]更优选地，按照IMGT编号系统，所述人源抗体的LCDR1
‑
LCDR3和HCDR1
‑
HCDR3的序列如下所示：
[0017](1)LCDR1的氨基酸序列为:QGIKNA(SEQ ID NO：16)；
[0018]LCDR2的氨基酸序列为:AAS(SEQ ID NO：17)；
[0019]LCDR3的氨基酸序列为:LQDYSYPWT(SEQ ID NO：18)；
[0020]HCDR1的氨基酸序列为:GFLFSSYS(SEQ ID NO：10)；
[0021]HCDR2的氨基酸序列为:ISFDGSER(SEQ ID NO：11)；
[0022]HCDR3的氨基酸序列为:AKTWVDRTLSLDS(SEQ ID NO：12)；或
[0023](2)LCDR1的氨基酸序列为:QGIKNA(SEQ ID NO：16)；
[0024]LCDR2的氨基酸序列为:AAS(SEQ ID NO：17)；
[0025]LCDR3的氨基酸序列为:LQDYSYPWT(SEQ ID NO：18)；
[0026]HCDR1的氨基酸序列为:GFLFSCYS(SEQ ID NO：13)；
[0027]HCDR2的氨基酸序列为:MSFDGSEI(SEQ ID NO：14)；
[0028]HCDR3的氨基酸序列为:ARTWVDRTLSLDH(SEQ ID NO：15)。
[0029]在一些实施方案中，所述重链可变区包括SEQ ID NO：2、4所示的序列或由其组成，或者包括与SEQ ID NO：2、4所示序列有至少85％(例如，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.结合呼吸道合胞病毒F蛋白的人源抗体或其抗原结合片段，所述人源抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:2或4所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3所示的轻链可变区包含的LCDR1，LCDR2和LCDR3；优选地，按照IMGT编号系统，所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3选自如下组合之一：(1)HCDR1的氨基酸序列为:GFLFSSYS(SEQ ID NO：10)；HCDR2的氨基酸序列为:ISFDGSER(SEQ ID NO：11)；HCDR3的氨基酸序列为:AKTWVDRTLSLDS(SEQ ID NO：12)；(2)HCDR1的氨基酸序列为:GFLFSCYS(SEQ ID NO：13)；HCDR2的氨基酸序列为:MSFDGSEI(SEQ ID NO：14)；HCDR3的氨基酸序列为:ARTWVDRTLSLDH(SEQ ID NO：15)；优选地，按照IMGT编号系统，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3如下所示：LCDR1的氨基酸序列为:QGIKNA(SEQ ID NO：16)，LCDR2的氨基酸序列为:AAS(SEQ ID NO：17)，LCDR3的氨基酸序列为:LQDYSYPWT(SEQ ID NO：18)；更优选地，按照IMGT编号系统，所述人源抗体的LCDR1
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LCDR3和HCDR1
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HCDR3的序列如下所示：(1)LCDR1的氨基酸序列为:QGIKNA(SEQ ID NO：16)；LCDR2的氨基酸序列为:AAS(SEQ ID NO：17)；LCDR3的氨基酸序列为:LQDYSYPWT(SEQ ID NO：18)；HCDR1的氨基酸序列为:GFLFSSYS(SEQ ID NO：10)；HCDR2的氨基酸序列为:ISFDGSER(SEQ ID NO：11)；HCDR3的氨基酸序列为:AKTWVDRTLSLDS(SEQ ID NO：12)；或(2)LCDR1的氨基酸序列为:QGIKNA(SEQ ID NO：16)；LCDR2的氨基酸序列为:AAS(SEQ ID NO：17)；LCDR3的氨基酸序列为:LQDYSYPWT(SEQ ID NO：18)；HCDR1的氨基酸序列为:GFLFSCYS(SEQ ID NO：13)；HCDR2的氨基酸序列为:MSFDGSEI(SEQ ID NO：14)；HCDR3的氨基酸序列为:ARTWVDRTLSLDH(SEQ ID NO：15)。2.权利要求1所述的结合呼吸道合胞病毒F蛋白的人源抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：2、4所示的序列或由其组成，或者包括与SEQ ID NO：2、4所示序列有至少85％(例如，86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％)序列一致性的氨基酸序列或由其组成。3.权利要求1或2所述的结合呼吸道合胞病毒F蛋白的人源抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：2所示的序列或由其组成，或者包括与SEQ ID NO：2所示序列具有至少85％(例如，86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％)序列一致性的氨基酸序列或由其组合成；所述轻链可变区包括SEQ ID NO：3所示的序列或由其组成，或者包括与SEQ ID NO：3所示序列具有至少85％(例如，86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％)序列一致性的
氨基酸序列或由其组成；或者所述重链可变区包括SEQ ID NO：4所示的序列或由其组成，或者包括与SEQ ID NO：4所示序列具有至少85％(例如，86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％)序列一致性的氨基酸序列或由其组成，所述轻链可变区包括SEQ ID NO：5所示的序列或由其组成，或者包括与SEQ ID NO：5所示序列具有至少85％(例如，86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％)序列一致性的氨基酸序列或由其组成。4.权利要求1
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3任一项所述的结合呼吸道合胞病毒F蛋白的人源抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体还包含重链恒定区和轻链恒定区，优选地，所述重链恒定区包括SEQ ID NO：6所示的序列或由其组成，或者包括与SEQ ID NO：6有至少85％...

【专利技术属性】
技术研发人员：高福，王奇慧，戴连攀，崔庆为，尚桂军，马东礼，麻晓鹏，尚子方，
申请(专利权)人：山西高等创新研究院深圳市儿童医院，
类型：发明
国别省市：