甜菜渣青贮复合菌添加剂及其制备方法和应用技术

甜菜渣青贮复合菌添加剂及其制备方法和应用，它涉及一种反刍动物青贮饲料复合菌添加剂及其制备方法和应用。它解决了现有甜菜渣青贮生产中乳酸菌数量不足的问题。甜菜渣青贮复合菌添加剂是由乳酸链球菌和乳酸杆菌各１株组成。制备方法：一、发酵液的制备；二、乳酸链球菌和乳酸杆菌的分离、纯化；三、乳酸链球菌和乳酸杆菌的活化；四、微生物添加剂的制备。应用：青贮时每ｋｇ经过干燥处理水分含量在６５－７５％的甜菜渣加入１０－１５ｍｌ添加剂。用本发明专利技术添加剂处理的甜菜渣经４５天发酵，试验组与空白对照组比较，ｐＨ值、霉菌和酵母菌数量显著降低，氨态氮占总氮的比值极显著降低，同时，乳酸占总酸的比例显著提高，丁酸含量显著降低。本发明专利技术可显著提高甜菜渣青贮效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及反刍动物青贮词料复合菌添加剂及其制备方法和应用。
技术介绍
甜菜渣是甜菜块根经过浸泡，压榨制糖后的残渣，是甜菜制糖后的副产品。 其产量高、营养丰富。甜菜渣除富含大量碳水化合物外，还含有果胶、生物碱、 粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、钙、磷以及多种氨基酸，是牛、羊、鹿等反刍动物 的优质饲料来源。目前国内外甜菜渣利用方式主婆是青贮和制粒，制粒后生产 的颗粒粕营养价值很高，但价格昂贵，主要用于出口。相比而言，青贮处理方 法简单且成本较低，便于直接面向养殖户推广。目前限制甜菜渣青贮的主要问 题有两个方面， 一是含水量过高，通常在90%左右，在发酵过程中易引起霉烂； 二是甜菜渣中乳酸菌数量不足，使得青贮后甜菜渣酸度下降缓慢，对有害微生 物如霉菌和酵母菌抑制作用降低，引起青贮甜菜渣品质不高。甜菜渣水分含量 高可以通过烘干或添加秸秆等含水量低的原料的方法加以解决，而乳酸菌数量 不足是甜菜渣青贮急需解决的关键问题。
技术实现思路
本专利技术为了解决现有甜菜渣青贮生产中乳酸菌数量不足引起青贮甜菜渣 品质不高的问题，而提供的一种甜菜渣青贮复合菌添加剂及其制备方法和应 用。甜菜渣青贮复合菌添加剂是由从甜菜渣制作的发酵液中分离得到的乳酸链球菌和乳酸杆菌各1株组成，具体是将乳酸链球菌和乳酸杆菌分别在MRS 液体培养基中活化培养后，把活化的乳酸链球菌和乳酸杆菌按40-60%:40-60% 的重量百分比混合，制成甜菜渣青贮微生物添加剂。其中，每mlMRS液体培养 基中至少含有乳酸链球菌2. 5X 107cfu和乳酸杆菌3. OX 107cfu。甜菜渣青贮复合菌添加剂按以下步骤制备:步骤一、甜菜渣发酵液的制备 取新鲜甜菜渣，按新鲜甜菜渣和蒸馏水的重量比为2: 1比例充分混合，静置 1-1. 5h，经双层纱布过滤后，过滤液加入按重量比为甜菜渣葡萄糖二10: 1比例的葡萄糖后混合，充分搅拌后置于30'C发酵48h，制成发酵液；步骤二、 乳酸链球菌和乳酸杆菌的分离、纯化将甜菜渣发酵液稀释50-100倍，置于 分离固体培养基中，培养基pH值为5. 7-6. 1，温度在37-4(TC下培养48h，挑 选溶钙圈大、培养基变黄的菌落2个，分别放置在MRS固体培养基纯化，经鉴 定试验，得到乳酸链球菌及乳酸杆菌各1株，纯化后的乳酸链球菌及乳酸杆菌 用装有MRS固体培养基的试管保存；步骤三、乳酸链球菌和乳酸杆菌的活化 将纯化好的乳酸链球菌和乳酸杆菌放在MRS液体培养基中活化，活化温度为 35°C，活化时间24h，活化完成时每mlMRS液体培养基中至少含有乳酸链球菌 2. 5X 107cfu和乳酸杆菌3. OX 107cfu;步骤四、甜菜渣青贮微生物添加剂的 制备把活化的乳酸链球菌和乳酸杆菌按40-60%: 40-60%的重量百分比混合， 制成甜菜渣青贮微生物添加剂。其中，步骤二中所述的分离固体培养基配方为 牛肉膏lg，蛋白胨lg，酵母膏lg，葡萄糖lg，華茄汁20%，吐温80 0.05%， 碳酸钙2g，溴甲酚绿0.01%，琼脂1.5g， pH为5.7-6.1。步骤二中所述的MRS 固体培养基配方为牛肉膏lg,蛋白胨lg，酵母膏0.5g，葡萄糖2g，吐温 80 0.1%，碳酸,丐2g， K2HP04 0. 2g， MgS04. 7H20 0. 058g， MnS04. 4H20 0. 025g， 乙酸钠0.5g，柠檬酸二铵0.2g，琼脂1.5g， pH为6.2， 121。C灭菌15min。步 骤三中所述的MRS液体培养基配方为牛肉膏lg，蛋白胨lg，酵母膏0.5g， 葡萄糖2g，吐温80 0,1%，碳酸钙2g， K2HP04 0. 2g， MgS04. 7H20 0.058g， MnS04. 4H20 0. 025g，乙酸钠0. 5g，拧檬酸二铵0. 2g， pH为6. 2， 121 。C灭菌15min。甜菜渣青贮复合菌添加剂的应用甜菜渣经过干燥处理后使其水分含量在 65-75%，按照每kg甜菜渣加入10-15ml的量加入甜菜渣青贮复合菌添加剂，在 常温下经40-50天进行发酵应用。本专利技术的特点在于(l)乳酸链球菌和乳酸杆菌均由甜菜渣中分离，对甜菜 渣青贮具有很强的针对性；(2)将乳酸链球菌和乳酸杆菌按比例混合，二者皆为 甜菜渣青贮过程中的优势菌群，协同作用明显。本专利技术的有益效果对比试验结果表明，用本专利技术甜菜渣青贮复合菌添加 剂处理的甜菜渣经45天发酵，可显著提高甜菜渣青贮效果(l)试验组pH值发酵期间下降迅速，显著低于空白对照组。试验组pH值和 空白对照组pH值分别为3. 94和4. 58， P〈0. 05;(2) 试验组较空白对照组霉菌和酵母菌数量显著降低，分别为3.52X 107cfu/g和5. 87 X107cfu/g， P〈0.05;(3) 试验组氨态氮占总氮的比值，即VBN/TN与空白对照组相比差异极显著， 分别为10. 48%和14. 67%, P<0. 01;(4) 试验组乳酸占总酸的比例较空白对照组提高9.24%， P〈0.05; 丁酸含量 较空白对照组显著降低8.31%， P〈0.05。具体实施例方式具体实施方式一本实施方式甜菜渣青贮复合菌添加剂是由从甜菜渣制作 的发酵液中分离得到的乳酸链球菌和乳酸杆菌各1株组成，具体是二者分别在 MRS液体培养基培养后，按照重量百分比由40-60%的乳酸链球菌和40-60%的 乳酸杆菌混合而成，其中，每mlMRS液体培养基中至少含有乳酸链球菌2.5X 107cfu和乳酸杆菌3. OX 107cfu。具体实施方式二本实施方式与具体实施方式一不同的是按照重量百分 比由40%的乳酸链球菌和60%的乳酸杆菌混合而成。其它参数与具体实施方式 一相同。 '具体实施方式三本实施方式与具体实施方式一不同的是按照重量百分比由50%的乳酸链球菌和50%的乳酸杆菌混合而成。其它参数与具体实施例方式一相同。具体实施方式四本实施方式与具体实施方式一不同的是按照重量百分比由60%的乳酸链球菌和40%的乳酸杆菌混合。其它参数与具体实施方式一相同。具体实施方式五甜菜渣青贮复合菌添加剂通过以下步骤制备步骤一、 甜菜渣发酵液的制备取新鲜甜菜渣，按新鲜甜菜渣和蒸馏水的重量比为2: 1比例充分混合，静置1-1.5h，经双层纱布过滤启，过滤液加入按重量比为甜菜渣葡萄糖=10: l比例的葡萄糖后混合，充分搅拌后置于3(TC发酵48h，制成发酵液；步骤二、乳酸链球菌和乳酸杆菌的分离、纯化将甜菜渣发酵液 稀释50-100倍，置于分离固体培养基中，培养基pH值为5. 7-6. 1 ，温度在37-40 。C下培养48h，挑选溶钙圈大、培养基变黄的菌落2个，分别放置在MRS固体 培养基纯化，经鉴定试验，得到乳酸链球菌及乳酸杆菌各1株，纯化后的乳酸6链球菌及乳酸杆菌用装有MRS固体培养基的试管保存；步骤三、乳酸链球菌和 乳酸杆菌的活化将纯化好的乳酸链球菌和乳酸杆菌放在MRS液体培养基中活 化，活化温度为35"C，活化时间24h，活化完成时每mlMRS液体培养基中至少 含有乳酸链球菌2.5X107cfu和乳酸杆菌3.0X107cfu;步骤四、甜菜渣青贮 微生物添加剂的制备把活化的乳酸链球菌和乳酸杆菌按40-60%: 40-60%的 重量百本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甜菜渣青贮复合菌添加剂，其特征在于甜菜渣青贮复合菌添加剂按照重量百分比由４０－６０％的乳酸链球菌和４０－６０％的乳酸杆菌混合而成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘春龙，李忠秋，张永根，林曦，张薇薇，
申请(专利权)人：中国科学院东北地理与农业生态研究所，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]