一种反相/强阳离子交换固相萃取-HPLC-MS/MS测定液体乳中代谢调节剂曲美他嗪的方法技术

本发明专利技术涉及食品液体乳检测领域，具体涉及一种反相/强阳离子交换固相萃取

【技术实现步骤摘要】
一种反相/强阳离子交换固相萃取
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HPLC
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MS/MS测定液体乳中代谢调节剂曲美他嗪的方法


[0001]本专利技术涉及食品液体乳检测领域，具体涉及一种反相/强阳离子交换固相萃取
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HPLC
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MS/MS测定液体乳中代谢调节剂曲美他嗪的方法。

技术介绍

[0002]曲美他嗪是一种哌嗪类衍生物，属于冠状动脉扩张药物，能改变心肌能量代谢方式，降低血管阻力，增加冠脉及外周循环血流量，促进心肌代谢及心肌能量的产生。2021年，世界反兴奋剂机构发布的《世界反兴奋剂条例国际标准禁用清单》中明确规定曲美他嗪为激素及代谢调节剂类禁用物质。激素及代谢调节剂，调节各组织细胞的代谢活动来影响人体生理活动，包括机体的代谢、生长、发育、繁殖和性活动等；具有舒张气道、提高肌肉力量、兴奋呼吸系统和神经系统的作用。为了避免大型赛事期间运动员发生食源性兴奋剂事件，我国体育总局反兴奋剂中心在2021年11月《大型赛事食源性兴奋剂防控工作指南》中也将曲美他嗪作为代谢调节剂列入建议检测药物名单，明确将奶列为其检测对象，指出曲美他嗪的参考检出限为2.0μg/kg。但国内目前尚未制定食品中曲美他嗪的相关检测标准，无法满足大型赛事中的食品安全的监管需求。因此，建立液体乳中曲美他嗪的分析检测方法，对维护大型赛事中的食品安全杜绝食源性兴奋剂事件的发生具有重要意义。
[0003]目前关于曲美他嗪的检测技术报道较少，主要有薄层色谱法、分光光度法、气相色谱法、液相色谱法、液液相色谱
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串联质谱法、高效液相色谱
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四极杆
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静电场离子轨道阱高分辨质谱。薄层色谱法只能定性或半定量；分光度法特异性差、灵敏度低；气相色谱法大多需要衍生，且分析时间较长；高效液相色谱
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四极杆
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静电场离子轨道阱高分辨质谱，价格昂贵，多用于筛查与确证；液相色谱法虽普适性广，但抗干扰能力差且灵敏度不能满足痕量残留检测要求；液相色谱
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串联质谱法定性与定量准确、灵敏度高、抗干扰能力强，更适合于复杂基质中痕量化合物的分析检测。有关曲美他嗪的检测研究报道多为片剂以及血浆、尿液等生物样本，尚未见液体乳中曲美他嗪分析测定的报道。片剂以及血浆、尿液等生物样本前处理多采用直接提取、液
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液萃取法、蛋白质沉淀方法、常规固相萃取等方法，但由于片剂及生物样本与液体乳基质差异较大，易造成净化效果差、基质干扰严重等现象，难以在食品液体乳检测领域直接应用。

技术实现思路

[0004]为解决上述技术问题，本专利技术针对液体乳中食源性兴奋剂曲美他嗪无标准方法以及相关检测技术难以满足其质量控制和监管需求，采用反相/强阳离子交换固相萃取柱净化，结合超高液相色谱
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串联质谱技术，内标法定量，建立液体乳中曲美他嗪的分析测定方法，为大型赛事食源性兴奋剂防控工作和质量监管工作提供了技术支持。
[0005]一种反相/强阳离子交换固相萃取
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HPLC
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MS/MS测定液体乳中代谢调节剂曲美他嗪的方法，包括如下步骤：
[0006](1)分别采用曲美他嗪、曲美他嗪
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D8的标准溶液，用甲醇定容并稀释，分别配成曲美他嗪标准中间液、曲美他嗪
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D8内标中间液；
[0007](2)分别取适量不同体积的曲美他嗪标准中间液，各加入适量相同体积曲美他嗪
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D8内标标准中间液，配制成系列浓度的标准工作溶液；
[0008](3)称取试样于螺纹带盖的离心管中，加入曲美他嗪
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D8内标中间液，涡旋充分混匀；加入甲酸乙腈，涡旋混匀后超声，离心后取全部上清液，加入水，混匀后上样于固相萃取柱，再依次用水、甲醇淋洗，抽干，最后用氨水甲醇洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，得到残留物；
[0009](4)加入甲酸
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乙腈溶解残留物，经有机相滤膜过滤后注入超高效液相色谱质谱联用仪中进行测定；
[0010](5)将系列浓度的标准工作溶液按浓度由低到高依次经超高效液相色谱质谱联用仪分析测定，以待测物质量浓度为横坐标，待测物与其内标色谱峰面积比值为纵坐标，绘制标准曲线。
[0011]优选地，步骤(3)采用体积比为0.5％甲酸乙腈作为提取溶剂；
[0012]优选地，步骤(3)的固相萃取柱采用Prime MCX柱；
[0013]优选地，步骤(3)采用体积比为3％氨水甲醇溶液进行洗脱；
[0014]优选地，步骤(4)液相色谱条件：
[0015]Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱(2.1mm
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100mm，1.7μm)；流动相A为0.1％甲酸溶液，B为乙腈；进样量2μL；柱温35℃；流速0.30mL/min；梯度洗脱程序：0～0.5min，98％A；0.5～2.0min，98％A～70％A；2.0～4.0min，70％A～5％A；4.0～6.0min，5％A；6.0～6.1min，5％A～98％A；6.1～7.0min，98％A。
[0016]优选地，步骤(4)质谱条件：喷射流电喷雾电离源(AJS ESI)，正离子模式；干燥气温度250℃；干燥气流量5L/min；雾化气压力45psi；鞘气温度350℃；鞘气流量，11L/min；毛细管电压4000V；喷嘴电压500V；采集模式多反应监测(MRM)。
[0017]优选地，步骤(3)具体步骤为：称取2.00g均匀的试样于50mL螺纹带盖的离心管中，加入20μL 1.00μg/mL曲美他嗪
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D8内标中间液，涡旋充分混匀。加入8mL 0.5％甲酸乙腈，涡旋混匀后超声25min，离心后取全部上清液，加入15mL水，混匀后上样于Prime MCX固相萃取柱，再依次用6mL水、6mL甲醇淋洗，抽干，最后用2mL 3％氨水甲醇洗脱，收集洗脱液，40℃氮气吹干。
[0018]优选地，步骤(4)具体步骤为：准确加入体积比为9:1的0.1％甲酸
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乙腈2.00mL，溶解残留物，经0.22μm有机相滤膜过滤。
[0019]有益效果：
[0020]本专利技术建立了反相/强阳离子交换固相萃取
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HPLC
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MS/MS测定液体乳中的代谢调节剂曲美他嗪的方法。针对液体乳的基质特点，选取0.5％甲酸乙腈作为提取溶剂，提取效果好；采用反相/强阳离子交换固相萃取柱Prime MCX净化，净化效果好，有效去除了液体乳中基质干扰；采用内标法定量，可以有效降低前处理操作过程带来的损失，提高了方法的准确性和稳定性。本专利技术检出限为0.1μg/kg，远低于我国2021年11月《大型赛事食源性兴奋剂防控工作指南》中曲美他嗪的参考检出限2.0μg/kg，具有灵敏度高、普适性强、稳定性好等优点，可满足液体乳中曲美他嗪分析测定的要求，可为大型体育赛事食源性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种反相/强阳离子交换固相萃取
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HPLC
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MS/MS测定液体乳中代谢调节剂曲美他嗪的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)分别采用曲美他嗪、曲美他嗪
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D8的标准溶液，用甲醇定容并稀释，分别配成曲美他嗪标准中间液、曲美他嗪
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D8内标中间液；(2)分别取适量不同体积的曲美他嗪标准中间液，各加入适量相同体积曲美他嗪
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D8内标标准中间液，配制成系列浓度的标准工作溶液；(3)称取试样于离心管中，加入曲美他嗪
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D8内标中间液，涡旋充分混匀；加入甲酸乙腈，涡旋混匀后超声，离心后取全部上清液，加入水，混匀；上样于固相萃取柱，再依次用水、甲醇淋洗，抽干，最后用氨水甲醇洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，得到残留物；(4)加入甲酸
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乙腈溶解残留物，经有机相滤膜过滤后，得到待测物，然后注入超高效液相色谱质谱联用仪中进行测定；(5)将系列浓度的标准工作溶液按浓度由低到高依次经超高效液相色谱质谱联用仪分析测定，以待测物质量浓度为横坐标，待测物与其内标色谱峰面积比值为纵坐标，绘制标准曲线。2.根据权利要求1所述的一种反相/强阳离子交换固相萃取
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HPLC
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MS/MS测定液体乳中代谢调节剂曲美他嗪的方法，其特征在于，步骤(3)采用体积比为0.5％甲酸乙腈作为提取溶剂。3.根据权利要求1所述的一种反相/强阳离子交换固相萃取
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HPLC
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MS/MS测定液体乳中代谢调节剂曲美他嗪的方法，其特征在于，步骤(3)的固相萃取柱采用Prime MCX柱。4.根据权利要求1所述的一种反相/强阳离子交换固相萃取
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HPLC
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MS/MS测定液体乳中代谢调节剂曲美他嗪的方法，其特征在于，步骤(3)采用体积比为3％氨水甲醇溶液进行洗脱。5.根据权利要求1所述的一种反相/强阳离子交换固相萃取
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HPLC
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MS/MS测定液体乳中...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘艳明，卢兰香，张艳侠，薛霞，魏莉莉，赵慧男，武传香，丁一，刘桂亮，王骏，胡梅，
申请(专利权)人：山东省食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：