生物标志物在诊治SAH脑血管痉挛中的应用制造技术

本发明专利技术公开了生物标志物在诊治SAH脑血管痉挛中的应用，具体的，所述的生物标志物包括miR

【技术实现步骤摘要】
生物标志物在诊治SAH脑血管痉挛中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及生物标志物在诊治SAH脑血管痉挛中的应用。

技术介绍

[0002]蛛网膜下腔出血(SAH)是一种众所周知的神经急症，其特点是蛛网膜和软脑膜之间的蛛网膜下腔出血。研究数据证明，SAH的总发病率为十万分之九，高达40％
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45％的患者可能死于SAH，而50％
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66％的患者将遭受永久性残疾。SAH的主要症状是突然的严重头痛，通常被描述为“生命中最严重的头痛”，并伴有短暂的意识丧失、恶心或呕吐、脑膜炎和癫痫发作。患有SAH的患者还可能出现各种并发症，包括再出血、脑水肿、脑血管痉挛(CVS)和脑缺血。尽管由于蛛网膜下腔出血的发病率较低，其危险因素高度不确定，但最常见的风险因素包括女性、高血压、吸烟和颅内动脉瘤的流行和生长。尽管SAH的发病率和死亡率在过去几十年中有所下降，但SAH临床治疗的进一步进展缓慢，许多随机临床试验未能改善患者的预后。
[0003]微小核糖核酸(miRNAs)是高度组织特异性的元件，不仅在细胞内发挥作用，而且在外泌体中递送到细胞外时仍保持功能，并且在体液中稳定存在。研究发现，miRNAs的异常表达与癌症相关疾病、心血管疾病和一些神经疾病有关。检测样本中的miRNA可以为蛛网膜下腔出血的研究提供有效的方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的第一目的是提供一种诊断SAH脑血管痉挛的方法；
[0005]本专利技术的第二目的是提供一种治疗SAH脑血管痉挛的方法；
[0006]本专利技术的第三目的是提供一种筛选治疗SAH脑血管痉挛的药物的方法。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0008]本专利技术第一方面提供了一种检测受试者样本中基因标志物的表达水平的试剂，所述的基因标志物包括miR
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130b、或KLF4。
[0009]“基因标志物”也称为“生物标志物”或“分子标志物”，在本专利技术中三者可互换使用，基因标志物是指在患者或患者样本中的表达水平与正常或健康者、或来源于正常或健康者的样本中的表达水平相比发生改变的任何基因或蛋白。
[0010]基因标志物可以在任何水平上差异地存在，但是一般以如下的水平存在，所述水平增加了至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少120％、至少130％、至少140％、至少150％、或更多；或一般以如下的水平存在，所述水平减少了至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或100％(即不存在)。
[0011]在本专利技术中，术语“样本”是指获得自或衍生自受试者(例如感兴趣的个体)的组合物，其包含有待根据例如物理、生化、化学和/或生理特点来表征和/或鉴定的细胞和/或其它分子实体。样本包括但不限于：组织样本、原代或培养的细胞或细胞系、细胞上清、细胞裂解物、血小板、血清、血浆、玻璃体液、淋巴液、滑液、滤泡液、精液、羊水、乳、血液、血液衍生的细胞、尿液、脑脊髓液、唾液、痰、泪、汗液、粘液、组织培养液、组织提取物如匀浆化的组织、细胞提取物及其组合。
[0012]进一步，所述的样本包括血液、活检组织、血清、血浆、尿、粪便、痰、脑脊液或来自细胞裂解物的上清液。
[0013]进一步，所述的样本为脑脊液。
[0014]进一步，所述的样本为组织，更进一步，所述的组织为脑基底动脉组织。
[0015]进一步，所述的受试者为哺乳动物，更进一步，所述的受试者为人、或鼠。
[0016]进一步，所述的试剂包括能够检测基因标志物的蛋白水平的试剂、或能够检测基因标志物的mRNA水平的试剂。
[0017]进一步，所述的检测基因标志物的蛋白水平使用选自多重邻位延伸分析、酶联免疫吸附、放射免疫测定、夹心分析、蛋白质印迹、免疫沉淀、免疫组织化学染色、荧光免疫测定、酶底物显色、抗原抗体聚集、荧光激活细胞分选、质谱分析、MRM测定、采用一组多重胺特异性稳定同位素试剂的测定或蛋白质芯片测量中的任何一种或多种来进行。
[0018]进一步，所述的检测基因标志物的mRNA水平使用选自聚合酶链反应、实时荧光定量逆转录多聚酶链反应、逆转录聚合酶链反应、竞争性聚合酶链反应、核酸酶保护分析、原位杂交法、核酸微阵列、RNA印迹或DNA芯片的方法中的任何一种或多种来进行。
[0019]进一步，所述的试剂包括：
[0020]与所述基因标志物基因特异性结合的引物或探针；
[0021]或与所述基因标志物蛋白特异性结合的抗体、肽、适配体或化合物。
[0022]本文所使用的术语“引物”是指具有短游离3'
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羟基的核酸序列，是可以与互补模板形成碱基对并充当模板链复制的起点的短核酸。在适当的缓冲溶液和温度下，在存在用于聚合的试剂(即DNA聚合酶或逆转录酶)和四种不同的核苷三磷酸的情况下，引物可以引发DNA合成。可以根据本领域已知的技术适当地选择PCR条件以及正义和反义引物的长度。
[0023]本文所使用的术语“探针”是指对应于可以特异性结合mRNA的几个碱基至数百个碱基的核酸片段(例如RNA或DNA)，并且可以通过标签来确认特定mRNA的存在与否以及表达水平。探针可以以寡核苷酸探针、单链DNA探针、双链DNA探针或RNA探针的形式制备。可以根据本领域已知的技术适当地选择合适的探针和杂交条件。
[0024]本文所使用的术语“抗体”是本领域众所周知的，是指针对抗原位点的特异性免疫球蛋白。本专利技术中的抗体是指与本专利技术的基因标志物蛋白特异性结合的抗体，可以根据本领域中的常规方法来制造抗体。抗体的形式包括多克隆抗体或单克隆抗体、抗体片段(诸如Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段)、单链Fv(scFv)抗体、多特异性抗体(诸如双特异性抗体)、单特异性抗体、单价抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、包含抗体的抗原结合位点的融合蛋白，以及包含抗原结合位点的任何其他修饰的免疫球蛋白分子，只要该抗体表现出所需的生物结合活性。
[0025]本文所使用的术语“肽”具有与靶物质高度结合的能力，并且在热处理/化学处理
期间不会发生变性。而且，由于其尺寸小，可以通过将其附接到其它蛋白上而用作融合蛋白。具体而言，因为可以特异性地附接到高分子蛋白链上，它可以用作诊断试剂盒和药物递送物质。
[0026]本文所使用的术语“适配体”是指一种由特定类型的单链核酸(DNA、RNA或修饰的核酸)组成的多核苷酸，所述单链核酸自身具有稳定的三级结构，并且具有能够以高亲和力和特异性与靶分子结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测受试者样本中基因标志物的表达水平的试剂，其特征在于，所述的基因标志物包括miR
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130b、或KLF4，优选的，所述的样本包括血液、活检组织、血清、血浆、尿、粪便、痰、脑脊液或来自细胞裂解物的上清液，优选的，所述的样本为脑脊液；优选的，所述的样本为组织，更为优选的，所述的组织为脑基底动脉组织；优选的，所述的受试者为哺乳动物，更为优先的，所述的受试者为人、或鼠。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的试剂包括能够检测基因标志物的蛋白水平的试剂、或能够检测基因标志物的mRNA水平的试剂，优选的，所述的检测基因标志物的蛋白水平使用选自多重邻位延伸分析、酶联免疫吸附、放射免疫测定、夹心分析、蛋白质印迹、免疫沉淀、免疫组织化学染色、荧光免疫测定、酶底物显色、抗原抗体聚集、荧光激活细胞分选、质谱分析、MRM测定、采用一组多重胺特异性稳定同位素试剂的测定或蛋白质芯片测量中的任何一种或多种来进行，优选的，所述的检测基因标志物的mRNA水平使用选自聚合酶链反应、实时荧光定量逆转录多聚酶链反应、逆转录聚合酶链反应、竞争性聚合酶链反应、核酸酶保护分析、原位杂交法、核酸微阵列、RNA印迹或DNA芯片的方法中的任何一种或多种来进行，优选的，所述的试剂包括：与所述基因标志物基因特异性结合的引物或探针；或与所述基因标志物蛋白特异性结合的抗体、肽、适配体或化合物。3.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括miR
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130b的抑制剂，或KLF4的激活剂。4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，所述的抑制剂包括核酸抑制物、蛋白抑制物、化合物抑制物，优选的，核酸抑制物包括shRNA、siRNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸；优选的，所述蛋白抑制物包括蛋白水解酶、蛋白结合分子。5.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，所述的激活剂包括KLF4基因、KLF4蛋白、促进型miRNA、促进型转录调控因子、或促进型靶向小分子化合物。6.根据权利要求3
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5任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物还包括药学上可接受的载体。7.一种筛选治疗脑血管痉挛的药物的方法，所述的方法包括对细胞添加测试药物后或在对模型动物施用测试药物后的某个时期测量基因标志物的表达水平来测定测试药物治疗脑血管痉挛的效果，其特征在于，所述的基因标志物...

【专利技术属性】
技术研发人员：王浩，黄泽伟，
申请(专利权)人：深圳市人民医院，
类型：发明
国别省市：