一种HEK293细胞和CHO细胞通用培养基及应用制造技术

本发明专利技术提出了一种HEK293细胞和CHO细胞通用培养基及应用，该培养基无血清、无蛋白、化学成分明确，可以稳定贮存，且细胞克隆率、汇合度高。本发明专利技术的克隆培养基是针对单细胞克隆应用开发，可显著提高单克隆增殖率，保持良好的细胞状态，并快速筛选出优质克隆；优势在于不含蛋白类不稳定成分，化学成分限定，利于批次间的稳定性、重复性、高效性；市场上普遍存在的克隆培养基针对的是CHO细胞，本发明专利技术克隆培养基，既可应用于CHO细胞，还可应用于HEK293细胞，从而增加细胞株上应用的通用性。而增加细胞株上应用的通用性。而增加细胞株上应用的通用性。

【技术实现步骤摘要】
一种HEK293细胞和CHO细胞通用培养基及应用


[0001]本专利技术涉及细胞培养基领域，具体为一种HEK293细胞和CHO细胞通用培养基及应用。

技术介绍

[0002]哺乳动物细胞需要稳定持续生长，并且能够通过外源基因导入以实现目的基因的表达，需要通过层层筛选、培养优化获得。HEK293细胞（人胚胎肾细胞）和CHO细胞（中华仓鼠卵巢细胞）是基因工程技术中常用的哺乳动物细胞，广泛应用于重组蛋白的生产，其具有诸多优点：
①
具有较高的耐受剪切力和渗透压能力，表达水平较高；
②
对表达产物进行准确的转录后糖基化修饰；
③
可在生物反应器中实现大规模高密度无血清悬浮培养；
④
胞外分泌功能利于下游产物的分离纯化；
⑤
HEK293细胞具有更高的生长密度和更快的生长速度优势，易培养，易转染。
[0003]在细胞培养过程中，群体细胞经过多次培养，细胞间存在异质性，目的基因的表达出现差异性，为了将高产优质的细胞从细胞群体中筛选出来，通常会进行群体细胞的单克隆筛选，将高产优质的单细胞从细胞群体中筛选出来，进行扩增，建立细胞库。
[0004]相比较群体细胞而言，单细胞培育具有极大的挑战，因此培育单细胞的克隆培养基直接影响单细胞的扩增及后续生物制品的产量、质量和安全。
[0005]CN111040986A（公开日2020.04.21），一种悬浮培养细胞单克隆筛选培养方法。本专利技术提供了一种促贴壁培养基和一种悬浮驯育培养基，分别可用于恢复悬浮细胞贴壁特性和辅助细胞悬浮培养驯化，其培养基需额外添加血清来促进。
[0006]CN112391335A（公开日2021.02.23），涉及一种单克隆细胞培养基、应用及培养单克隆细胞的方法。通过基础培养基和条件培养基的配合使用，使得本专利技术提供的单克隆细胞培养基有丰富的营养物质。其内容主要提供一种单克隆细胞培养基含有胎牛血清白蛋白或转铁蛋白等。
[0007]CN113122495A（公开日2021.07.16），一种用于中国仓鼠卵巢细胞克隆形成的培养基。本专利技术提供的培养基不含血清、不含动物来源的组分，但含有植物水解物成分。
[0008]目前市场上普遍应用的克隆培养基国外EX
‑
CELL
®
CHO克隆培养基（C6366，西格玛sigma），国内QuaMono
™ꢀ
Plus CHO 克隆培养基（A11602，康晟生物Quacell），均含有植物水解物成分。
[0009]应良好制造规范GMP（Good Manufacturing Practice）的要求，无血清培养基的发展主要聚焦在两个方向：无动物来源，化学成分明确。化学成分明确培养基是目前被公认为最安全和理想的培养基。

技术实现思路

[0010]针对现有技术的不足，本专利技术提供一种HEK293细胞和CHO细胞通用培养基及应用，该培养基无血清、无蛋白、化学成分明确，可以稳定储存，且细胞克隆率、汇合度高，以弥补
现有技术的不足。
[0011]为了解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：一种HEK293细胞和CHO细胞通用培养基，包括氨基酸、维生素、微量元素、无机盐、核苷类和其他成分，所述氨基酸组分终浓度分别为：L
‑
盐酸精氨酸100~729.5mg/L、L
‑
天冬酰胺91.79~495 mg/L、L
‑
丙氨酸10~436.5mg/L、L
‑
谷氨酸20~200mg/L、L
‑
甘氨酸9.92~200mg/L、L
‑
盐酸组氨酸36.67~500mg/L、L
‑
异亮氨酸50~1000mg/L、L
‑
亮氨酸50~1000mg/L、L
‑
盐酸赖氨酸59.5~410mg/L、L
‑
甲硫氨酸10~800mg/L、L
‑
苯丙氨酸24.93~600mg/L、L
‑
脯氨酸50~300mg/L、L
‑
丝氨酸87.4~500mg/L、L
‑
苏氨酸30~300mg/L、L
‑
色氨酸10.5~500mg/L、L
‑
酪氨酸钠盐50~500mg/L、L
‑
缬氨酸20~200mg/L、L
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盐酸半胱氨酸10~500mg/L、L
‑
丙氨酰
‑
L
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谷氨酰胺5.2~54.1mg/L；所述维生素组分终浓度分别为：氯化胆碱10~100mg/L、叶酸3.6~50mg/L、肌醇10~100mg/L、烟酰胺1~15.8mg/L、泛酸钙0.5~30mg/L、核黄素0.1~30mg/L、生物素0.01~20mg/L、维生素B12 0.1~60mg/L、对氨基苯甲酸0.1~50mg/L、盐酸腐胺2~30mg/L、硫辛酸0.01~20mg/L、L
‑
抗坏血酸10~466.8mg/L；所述微量元素组分终浓度分别为：一水合硫酸锰0.000001~0.0001mg/L、八水合二氯氧化锆0.00000236~0.0001509mg/L、六水合三氯化铬0.000003~0.00026mg/L、六水合氯化钴0.00008~0.00065mg/L、氯化亚锡0.0000001~0.001mg/L、四水钼酸铵0.00001~0.0003mg/L、氯化镉0.0000002~0.00002mg/L、氯化铜二水合物0.0001~0.01mg/L、氯化铝0.00001~0.001mg/L、硝酸银0.0000000061~0.0000007mg/L、硫酸镍0.0000175~0.001mg/L、醋酸钡0.00000001~0.0000001mg/L、亚硒酸钠0.001~0.01652mg/L；所述无机盐组分终浓度分别为：氯化钠4000~8000mg/L、氯化钾10~250mg/L、硫酸镁10~102.8mg/L、氯化锌0.1~30mg/L、磷酸二氢钠100~1000mg/L、氯化钙100~500mg/L、碳酸氢钠1550~8000mg/L、柠檬酸铁0.5~100mg/L；所述核苷类组分终浓度分别为：腺苷0.1~10mg/L、胞苷0.1~10mg/L、鸟苷0.1~10mg/L、胸苷0.1~10mg/L、尿苷0.1~10mg/L、2'
‑
脱氧鸟苷水合物0.1~10mg/L、次黄嘌呤0.1~10mg/L；所述其他成分组分终浓度分别为：亚油酸钠0.1~50mg/L、葡萄糖2000~10000mg/L、丙酮酸钠5~500mg/L、盐酸乙醇胺0.5~150mg/L。
[0012]优选的，所述氨基酸组分终浓度分别为：L
‑
盐酸精氨酸100mg/L、L
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天冬酰胺150mg/L、L
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丙氨酸10mg/L、L<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HEK293细胞和CHO细胞通用培养基，包括氨基酸、维生素、微量元素、无机盐、核苷类和其他成分，其特征在于，所述氨基酸组分终浓度分别为：L
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盐酸精氨酸100~729.5mg/L、L
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天冬酰胺91.79~495 mg/L、L
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丙氨酸10~436.5mg/L、L
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谷氨酸20~200mg/L、L
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甘氨酸9.92~200mg/L、L
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盐酸组氨酸36.67~500mg/L、L
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异亮氨酸50~1000mg/L、L
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亮氨酸50~1000mg/L、L
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盐酸赖氨酸59.5~410mg/L、L
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甲硫氨酸10~800mg/L、L
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苯丙氨酸24.93~600mg/L、L
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脯氨酸50~300mg/L、L
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丝氨酸87.4~500mg/L、L
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苏氨酸30~300mg/L、L
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色氨酸10.5~500mg/L、L
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酪氨酸钠盐50~500mg/L、L
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缬氨酸20~200mg/L、L
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盐酸半胱氨酸10~500mg/L、L
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丙氨酰
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L
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谷氨酰胺5.2~54.1mg/L；所述维生素组分终浓度分别为：氯化胆碱10~100mg/L、叶酸3.6~50mg/L、肌醇10~100mg/L、烟酰胺1~15.8mg/L、泛酸钙0.5~30mg/L、核黄素0.1~30mg/L、生物素0.01~20mg/L、维生素B12 0.1~60mg/L、对氨基苯甲酸0.1~50mg/L、盐酸腐胺2~30mg/L、硫辛酸0.01~20mg/L、L
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抗坏血酸10~466.8mg/L；所述微量元素组分终浓度分别为：一水合硫酸锰0.000001~0.0001mg/L、八水合二氯氧化锆0.00000236~0.0001509mg/L、六水合三氯化铬0.000003~0.00026mg/L、六水合氯化钴0.00008~0.00065mg/L、氯化亚锡0.0000001~0.001mg/L、四水钼酸铵0.00001~0.0003mg/L、氯化镉0.0000002~0.00002mg/L、氯化铜二水合物0.0001~0.01mg/L、氯化铝0.00001~0.001mg/L、硝酸银0.0000000061~0.0000007mg/L、硫酸镍0.0000175~0.001mg/L、醋酸钡0.00000001~0.0000001mg/L、亚硒酸钠0.001~0.01652mg/L；所述无机盐组分终浓度分别为：氯化钠4000~8000mg/L、氯化钾10~250mg/L、硫酸镁10~102.8mg/L、氯化锌0.1~30mg/L、磷酸二氢钠100~1000mg/L、氯化钙100~500mg/L、碳酸氢钠1550~8000mg/L、柠檬酸铁0.5~100mg/L；所述核苷类组分终浓度分别为：腺苷0.1~10mg/L、胞苷0.1~10mg/L、鸟苷0.1~10mg/L、胸苷0.1~10mg/L、尿苷0.1~10mg/L、2'
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脱氧鸟苷水合物0.1~10mg/L、次黄嘌呤0.1~10mg/L；所述其他成分组分终浓度分别为：亚油酸钠0.1~50mg/L、葡萄糖2000~10000mg/L、丙酮酸钠5~500mg/L、盐...

【专利技术属性】
技术研发人员：辛丽丽，徐亮亮，向琼，赵亚，陈旭，陈刚，
申请(专利权)人：苏州依科赛生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：