动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒,包括沙丁胺醇标准品、溴布特罗标准品、特布他林标准品、所述试剂盒针对沙丁胺醇标准品、溴布特罗标准品、特布他林标准品的基因多态性设计特异性扩增引物和测序引物，对检测品进行预处理和吸附柱纯化后进行检测，所述试剂盒包括如下组分：样本处理液、磁珠、扩增试剂、扩增试剂测序引物和阳性对照。本发明专利技术具有简单快速、样品用量少、灵敏度高、不需洗涤等优点。不需洗涤等优点。不需洗涤等优点。

【技术实现步骤摘要】
动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒


[0001]本专利技术属于生物检测检测方法
，尤其是涉及一种动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒。

技术介绍

[0002]沙丁胺醇、溴布特罗、特布他林是具有相似的化学结构和功能的β
‑
受体激动剂。沙丁胺醇、溴布特罗、特布他林可以用于作为舒张剂治疗哮喘等疾病同时还是可以作为生长促进剂和育肥剂减少脂肪含量，增加肌肉蛋白质的合成。然而，他们对人产生严重的影响，如心悸、头痛等。所以如果用含有沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的饲料或其他添加剂饲养动物，则沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林可能残留在动物体内，人们食用这类肉制品后会对人产生严重的影响。需要对动物肌肉组织进行检测。
[0003]现有的检测沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的方法有有酶联免疫法，超高效液相色谱法(UPLC)，气相色谱串联质谱法(GC－MS)，色谱法设备昂贵且操作繁琐，不适用于现场快速检测。酶联免疫法存在假阳性，免疫过程时间长，酶标物易失活等问题。为了确保食品安全，有必要建立一种快速有效的方法来检测和筛选沙丁胺醇、溴布特罗及特布他林，因此，为此，我们提出一种动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒来解决上述问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是针对上述问题，提供一种动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒。
[0005]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]本专利技术包括沙丁胺醇标准品、溴布特罗标准品、特布他林标准品、所述试剂盒针对沙丁胺醇标准品、溴布特罗标准品、特布他林标准品的基因多态性设计特异性扩增引物和测序引物，对检测品进行预处理和吸附柱纯化后进行检测，所述试剂盒包括如下组分：样本处理液、磁珠、扩增试剂、扩增试剂测序引物和阳性对照。
[0007]进一步地，加入25mL S0mmolL HC，振饬20mmin；在8O00 rlmin,l5 c条件下离心10min；移取18mL上清液(3g样品)于新离心管中。加人2mL0.5mmol/L NaOH,混勾10min；加人10mL 500mnol/L.KH
‑
PO。缓冲液(p
‑
3)，简单混合并置于4℃下至少1.5h；在8000rmin,15℃条件下离心10min；移取10mL上清液(l g样品)。回酒至室温(20
‑
25c)，用RIDACg柱纯化。
[0008]进一步地，所述吸附柱纯化步骤:用3mL甲醇(100％)洗涤柱子:用2mL.50mmol/LKHPO。缓冲液6pH
‑
3)洗涤柱子；祥品洛液进柱；用2mL 50mmolLKH
‑
PO。缓冲液(pH＝3)洗涤柱子；用正压去除残留的液体并用空气吹2min干燥柱子；用l mL甲醇(ID0％洗脱样品,遣速为15滴/mira,加正压收集所有洗脱液；在50～60℃下怎气吹干；用l mL燕馏水溶解干燥的残留物,取20L进行分祈。
[0009]进一步地，所述样本处理液包括0.1％
‑
0.6％十二烷基硫酸锂、0.1
‑
0.5％曲拉通X
‑
100、2
‑
50mg/mL氢氧化钠、5
‑
15％海藻糖、3～7mmol/L BSA、20
‑
80mM Tris
‑
HCl、100mM NaCl，PH＝8.5
‑
9.5。
[0010]与现有技术相比，本专利技术提供了一种动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒，具备以下有益效果：
[0011]本专利技术具有简单快速、样品用量少、灵敏度高、不需洗涤等优点。
附图说明
[0012]图1为为本专利技术动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒的沙丁胺醇标准曲线示意图；
具体实施方式
[0013]以下实施例仅处于说明性目的，而不是想要限制本专利技术的范围。
[0014]从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，充分绞碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封作为试样，标明标记。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
[0015]将试样于
‑
18℃保存，试样中的药物残留采用pH5.2的乙酸铵缓冲溶液提取，同时加入β
‑
盐酸葡萄糖醛甙酶
‑
芳基硫酯酶进行酶解后，提取液经C18和SCX双SPE柱净化，液相色谱
‑
质谱进行测定，内标法定量。
[0016]材料与仪器
[0017]所用样品均为用经LC
‑
MS/MS检测(检出限为0.05ug/kg)已知待测物阳性和阴性的样品。磷酸二氢钾缓冲液(pH
‑
3)；甲醇、乙腈(色谱纯，美国Merck公司
[0018]检测方法
[0019](1)样品前处理:称取3g均质样品于离心管中；放入95℃以上热水浴中加热10～15min；将析出的样品组织液于10000r/min,25℃条件下离心10min。
[0020]吸取上清液作为
[0021]测定液备用。
[0022](Z)检测步骤:取出检测卡平被于桌上。用测试卡袋中的滴管垂直淌加2滴样品渗出液(的40L)于加样孔,30s后再加人展开液1
‑
2滴；反应5min。根据示意图判定结果。2.2.2盐破克仓特罗试剂金
[0023](1)样品前处理:称取5g均质样品于离心管中。加入25mL S0mmolL HC，振饬20mmin；在8O00 rlmin,l5 c条件下离心10min；移取18mL上清液(3g样品)于新离心管中。加人2mL0.5 mmol/L NaOH,混勾10min；加人10mL 500mnol/L.KH
‑
PO。缓冲液(p
‑
3)，简单混合并置于4℃下至少1.5h；在8000rmin,15℃条件下离心10min；移取10mL上清液(l g样品)。回酒至室温(20
‑
25c)，用吸附柱纯化。
[0024](2)吸附柱纯化步骤:用3mL甲醇(100％)洗涤柱子:用2mL.50mmol/LKHPO。缓冲液6pH
‑
3)洗涤柱子；祥品洛液进柱；用2mL 50mmolLKH
‑
PO。缓冲液(pH＝3)洗涤柱子；用正压去除残留的液体并用空气吹2min干燥柱子；用l mL甲醇(ID0％洗脱样品,遣速为15滴/mira,加正压收集所有洗脱液；在50～60℃下怎气吹干；用l mL燕馏水溶解干燥的残留物,取20L
进行分祈。
[0025](3)检测步骤:将足够标准和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒，其特征在于：包括沙丁胺醇标准品、溴布特罗标准品、特布他林标准品、所述试剂盒针对沙丁胺醇标准品、溴布特罗标准品、特布他林标准品的基因多态性设计特异性扩增引物和测序引物，对检测品进行预处理和吸附柱纯化后进行检测，所述试剂盒包括如下组分：样本处理液、磁珠、扩增试剂、扩增试剂测序引物和阳性对照。2.根据权利要求1所述动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒，其特征在于：加入25mL50mmolLHC，振饬20mmin；在8O00r/lmin,l5c条件下离心10min；移取18mL上清液和3g样品于新离心管中，加人2mL0.5mmol/LNaOH,混勾10min；加入10mL500mnol/L.KH
‑
PO缓冲液(p
‑
3)，简单混合并置于4℃下至少1.5h；在8000rmin,15℃条件下离心10min；移取10mL上清液和lg样品回酒至室温(20
‑
25c)，用RIDACg柱纯化。3.根据权利要求1或2所述动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的Al...

【专利技术属性】
技术研发人员：郗存显，郭思言，莫敏，唐柏彬，李光满，郑小玲，王国民，李贤良，陈宗祥，
申请(专利权)人：重庆海关技术中心，
类型：发明
国别省市：