一种抗肿瘤多肽、生物活性溶液及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗肿瘤多肽、生物活性溶液及其应用，属于生物医药技术领域，所述抗肿瘤多肽，包括顺次连接的封端基团、成胶因子和磷酸化的GE11；所述成胶因子的氨基酸序列为GFF，所述磷酸化的GE11的氨基酸序列为pYHWYGYTPQNVI。本发明专利技术提供的抗肿瘤多肽可以通过肿瘤细胞外过表达的ALP作用，发生酶促原位自组装，且抗肿瘤多肽分子中存在可特异性结合EGFR的靶向序列，使得自组装后的多肽纳米纤维可以选择性地锚定在肿瘤细胞膜上，并激活瞬时受体电位阳离子通道，促进胞外钙离子内流，造成肿瘤细胞钙超载，进而诱导肿瘤细胞的凋亡。亡。亡。

【技术实现步骤摘要】
一种抗肿瘤多肽、生物活性溶液及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种抗肿瘤多肽、生物活性溶液及其应用。

技术介绍

[0002]钙(Ca
2+
)超载是一种以细胞质中Ca
2+
异常积累为特征的Ca
2+
代谢紊乱现象，已被广泛研究用于治疗恶性肿瘤。Ca
2+
浓度在正常幅度、空间和时间范围内的变化精确地指挥着细胞信号级联及其生物学效应；但是，Ca
2+
浓度的异常变化会导致致命的细胞应激和生理功能障碍。细胞质Ca
2+
的异常升高不仅通过膜通道和转运蛋白增加细胞内细胞器(如线粒体和内质网)中的Ca
2+
含量，导致不可逆的细胞损伤和凋亡，而且会通过胞吐的形式提高细胞外局部Ca
2+
水平，引起细胞钙化。迄今为止，大多研究都利用外源性无机钙盐制成的纳米材料，包括碳酸钙、磷酸钙、过氧化钙等来直接诱导癌细胞内的钙超载。然而，潜在的脱靶效应和由此产生的高血钙危象，包括心力衰竭、肾衰竭和急性炎症，极大限制了这些材料的临床使用。
[0003]一种非常理想的方式是在利用生物体内源性Ca
2+
，以高效、无副作用的方式对肿瘤进行特异性攻击和破坏。最近有研究表明，可以通过调控细胞钙库中的Ca
2+
释放或促进细胞外Ca
2+
内流来提高细胞质Ca
2+
浓度。外周血(2.25
‑
2.75mM)、细胞外(约1mM)和细胞器(约10μM，例如线粒体和内质网)的Ca
2+
含量都远高于胞质的水平。利用内源性Ca
2+
引发基于Ca
2+
的信号障碍、亚细胞器和细胞应激反应，以及系统毒性可忽略不计的肿瘤细胞凋亡，在癌症治疗方面显示出巨大潜力。
[0004]目前尚没有一种能够有效利用内源钙促进肿瘤细胞钙超载以实现抗肿瘤的技术。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种抗肿瘤多肽、生物活性溶液及其应用；本专利技术提供的抗肿瘤多肽可以通过肿瘤细胞外过表达的ALP作用，发生酶促原位自组装，且抗肿瘤多肽分子中存在可特异性结合EGFR的靶向序列，使得自组装后的多肽纳米纤维可以选择性地锚定在肿瘤细胞膜上，并激活瞬时受体电位阳离子通道，促进胞外钙离子内流，造成肿瘤细胞钙超载，进而诱导肿瘤细胞的凋亡。
[0006]本专利技术提供了一种抗肿瘤多肽，包括顺次连接的封端基团、成胶因子和磷酸化的GE11；所述成胶因子的氨基酸序列为GFF，所述磷酸化的GE11的氨基酸序列为pYHWYGYTPQNVI。
[0007]优选的，所述封端基团为β
‑
萘乙酸。
[0008]进一步优选的，所述抗肿瘤多肽的结构式如式I所示：
[0009][0010]本专利技术提供了一种生物活性溶液，包括所述的抗肿瘤多肽。
[0011]优选的，所述生物活性溶液以PBS缓冲液为溶剂。
[0012]优选的，所述PBS缓冲液的pH为7.2～7.4。
[0013]优选的，所述抗肿瘤多肽与缓冲液的质量体积比为2mg：0.8～1.2mL。
[0014]本专利技术提供了所述抗肿瘤多肽、所述生物活性溶液在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0015]优选的，所述抗肿瘤药物包括抗人宫颈癌药物。
[0016]本专利技术还提供了所述的抗肿瘤多肽、所述的生物活性溶液在制备促进肿瘤细胞钙超载试剂中的应用。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的抗肿瘤多肽可以在肿瘤细胞外过表达的碱性磷酸酶的作用下去磷酸化，在原位自组装形成纳米纤维，并通过靶向EGFR，锚定在细胞膜上不被细胞摄取，激活细胞膜上的瞬时受体电位(TRP)离子通道，导致细胞外的钙离子内流，在生理血钙浓度(2.25
–
2.75mM)引起肿瘤细胞钙超载，并且能够诱导肿瘤细胞的彻底钙化，促进肿瘤细胞凋亡。本专利技术提供的抗肿瘤多肽的生物相容性很高，不会对机体产生负面影响。本专利技术提供的生物活性溶液，稳定性好。
附图说明
[0018]图1为实施例1合成的抗肿瘤多肽的高效液相色谱
‑
质谱图，其中，上图为吸收波长220nm的液相色谱图，中图为吸收波长254nm的液相色谱图，下图为上、中两图中出峰对应的分子量；
[0019]图2为对比例1合成的多肽的高效液相色谱
‑
质谱图，其中，上图为吸收波长220nm的液相色谱图，中图为吸收波长254nm的液相色谱图，下图为上、中两图中出峰对应的分子量；
[0020]图3为对比例1合成的多肽的化学结构式；
[0021]图4为实施例1合成的抗肿瘤多肽的PBS溶液的微观形貌图；
[0022]图5为实施例1合成的抗肿瘤多肽的PBS溶液经ALP催化自组装后的微观形貌图；
[0023]图6为实验例2中N
‑
pGE11经ALP催化前后以及GE11与EGFR蛋白的结合图；
[0024]图7为实验例3中N
‑
pGE11经ALP催化前后的二级结构图；
[0025]图8为实验例4N
‑
pGE11原位组装形成的纳米纤维锚定细胞膜的共聚焦图；
[0026]图9为实验例5中细胞内钙离子含量检测的共聚焦图及钙含量比色法检测的柱状图；
[0027]图10为实验例6中茜素红S染色的细胞钙化图；
[0028]图11为实验例7中N
‑
pGE11在不同钙离子浓度下对HeLa细胞毒性图；
[0029]图12为实验例8中使用钙离子通道抑制剂后测试N
‑
pGE11促进钙离子内流的柱状
图；
[0030]图13为实验例9中肿瘤体积统计图；
[0031]图14为实验例9中肿瘤离体后的光学照片；
[0032]图15为实验例9中小鼠治疗期间的体重监测统计图。
具体实施方式
[0033]本专利技术提供了一种抗肿瘤多肽，包括顺次连接的封端基团、成胶因子和磷酸化的GE11；所述成胶因子的氨基酸序列为GFF，所述磷酸化的GE11的氨基酸序列为pYHWYGYTPQNVI(SEQ ID No.1)。
[0034]在本专利技术中，所述封端基团优选为β
‑
萘乙酸；所述抗肿瘤多肽是由L构型的氨基酸序列组成；所述抗肿瘤多肽中接近N端的第一个酪氨酸中存在碱性磷酸酶反应位点；进一步优选的，所述抗肿瘤多肽的结构式如式I所示：
[0035][0036]本专利技术对所述抗肿瘤多肽的制备方法没有特殊限定，采用本领域常规的制备方法即可，在本专利技术具体实施过程中，优选的采用Fmoc
‑
短肽固相合成法。
[0037]本专利技术提供了一种生物活性溶液，包括所述的抗肿瘤多肽。优选的，所述生物活性溶液以PBS缓冲液为溶剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗肿瘤多肽，其特征在于，包括顺次连接的封端基团、成胶因子和磷酸化的GE11；所述成胶因子的氨基酸序列为GFF，所述磷酸化的GE11的氨基酸序列为pYHWYGYTPQNVI。2.根据权利要求1所述的抗肿瘤多肽，其特征在于，所述封端基团为β
‑
萘乙酸。3.根据权利要求2所述的抗肿瘤多肽，其特征在于，所述抗肿瘤多肽的结构式如式I所示：4.一种生物活性溶液，其特征在于，包括权利要求1～3任意一项所述的抗肿瘤多肽。5.根据权利要求4所述的生物活性溶液，其特征在于，所述生物活性溶液以PBS缓冲液为溶剂。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：杨志谋，王玲，张正昊，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：