CD47结合剂及其用途制造技术

本发明专利技术公开提供了CD47结合剂(例如，抗体，包括多重特异性抗体，如双重特异性抗体)及其用途。用途。用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CD47结合剂及其用途
相关申请
[0001]本专利技术申请主张2020年8月4日提交的美国临时专利申请No.63/061,103的权益，该专利申请的公开内容以其全部作为参考并入本文。序列表
[0002]本专利技术申请作为参考并入了作为文本文件与本专利技术申请一起提交的序列表，该序列表于2021年7月28日创建，名称为14529
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006
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228_SEQ_LISTING.txt且大小为53，848字节。


[0003]本专利技术公开一般地涉及结合至CD47，包括人CD47的结合剂，如抗体，以及它们的使用方法。

技术介绍

[0004]CD47是细胞表面糖蛋白，其起到天然免疫系统细胞介导的吞噬的调节剂的作用。CD47与多种配体相互作用，如整合素、信号调节蛋白α(SIRPα)、信号调节蛋白γ(SIRPγ)和血小板反应蛋白。CD47通过与巨噬细胞和树突状细胞表面上的SIRPα相互作用抑制吞噬，从而引发“不要吃我”的信号。
[0005]表达CD47能够使肿瘤细胞逃避吞噬和逃脱先天免疫监视。因此，CD47已成为可能的治疗剂的靶标。然而，CD47在正常细胞，如造血细胞、红细胞(RBC)和血小板上广泛表达。健康细胞对CD47的广泛表达提供了安全性和效力问题，因为用中和抗体靶向CD47可以影响健康细胞，从而可能导致毒性作用。另外，CD47的广泛表达还可以导致CD47结合剂快速消除，从而导致不良的药物动力学和降低的效力。
[0006]另外，CD47的激活或失去可以以细胞类型依赖性方式导致增殖增强。例如，星形细胞瘤细胞已显示在CD47和TSP
‑
1激活后具有提高的增殖，尽管正常星形胶质细胞没有。目前还提出CD47可以通过P13K/Akt通路辅助癌细胞增殖。
[0007]已知一旦阻断CD47与SIRPαα的结合，已报道的多种抗
‑
CD47抗体引起RBC凝集，这显著降低了这些抗体的治疗效果。
[0008]因此，本领域仍需要克服这些问题且靶向CD47以治疗、预防或减轻吞噬细胞功能障碍疾病、病症或病况，包括涉及表达CD47的肿瘤细胞的那些的试剂。本文所提供的CD47结合剂、组合物和方法满足这种需要并且提供了相关优势。专利技术概述
[0009]本专利技术公开提供了CD47结合剂，包括人CD47结合剂。这些试剂包括结合至CD47的抗体，例如，结合至CD47的单特异性或多重特异性(例如，双重特异性)抗体。在一些实施方式中，这些抗体与具有本文(例如，表1
‑
3)所描述的重链可变区和轻链可变区的抗体竞争与人CD47的结合。
[0010]本专利技术公开还提供了包含CD47结合剂的组合物。在一些实施方式中，这些组合物
包括结合至CD47的抗体，例如，结合至CD47的单特异性或多重特异性(例如，双重特异性)抗体。在一些实施方式中，这些组合物包括与具有本文(例如，表1
‑
3)所描述的重链可变区和轻链可变区的抗体竞争与人CD47的结合的抗体。
[0011]本专利技术公开还提供了用CD47结合剂或包含试剂，包括CD47结合剂的组合物或者包含所述试剂的组合物治疗、预防或减轻吞噬细胞功能障碍疾病、病症或病况，包括吞噬细胞功能障碍疾病、病症或病况的一种或多种症状的方法。这些组合物包括结合至CD47的抗体，例如，结合至CD47的单特异性或多重特异性(例如，双重特异性)抗体。
附图说明
[0012]图1A
‑
1C显示了实施例2中进一步描述的Octet结合测定的示例性结果。
[0013]图2A
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2D显示了实施例3中进一步描述的细胞结合测定的示例性结果。
[0014]图3A
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3C显示了实施例4中进一步描述的CD47/SIRPα抑制测定的示例性结果。
[0015]图4显示了实施例5中进一步描述的吞噬测定的示例性结果。
[0016]图5A
‑
5C显示了实施例7中进一步描述的SEC色谱法的示例性结果。
[0017]图6A
‑
6B显示了实施例7中进一步描述的HIC色谱法的示例性结果。
[0018]图7A
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7C显示了实施例7中进一步描述的SMAC色谱法的示例性结果。
[0019]图8A
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8B显示了C40、C56和C59的重链可变区和轻链可变区的序列比对，其包括VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的共有序列。通过Kabat、AbM、Chothia、Contact和IMGT编号表示CDR的边界。专利技术详述
[0020]本专利技术公开提供了CD47结合剂。这些试剂包括结合至CD47的抗体(例如，单特异性或多重特异性，包括双重特异性)，包括结合至人CD47的抗体。这些结合剂在组合物和治疗、预防或减轻吞噬细胞功能障碍疾病、病症或病况，包括所述疾病、病症或病况的一种或多种症状的方法中有用。吞噬细胞功能障碍疾病、病症和病况包括肿瘤免疫和相关癌症，其包括(但不限于)其中肿瘤细胞表达或过表达CD47的任何癌症。这些CD47表达肿瘤细胞可以帮助肿瘤细胞逃逸免疫监视和清除(例如，肿瘤免疫)。另外，本文所描述的CD47结合剂，如CD47结合抗体(例如，单特异性或多重特异性抗体，包括双重特异性抗体)对于抑制SIRPα信号转导和/或增强吞噬细胞功能有用，并因此增强免疫监视和肿瘤细胞除去。本文所描述的CD47结合剂，如CD47结合抗体(例如，单特异性或多重特异性抗体，包括双重特异性抗体)在组合物和增强吞噬细胞功能，包括上调细胞
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介导的免疫应答的方法中有用。
[0021]除非另外说明，否则术语“CD47”、“分化簇47”或“CD47多肽”和类似术语是指来自任何脊椎动物来源，包括哺乳动物，如灵长类动物(例如，人、食蟹猴(cyno))、狗和啮齿类(例如，小鼠和大鼠)的多肽(在本文中“多肽”和“蛋白”是可互换使用的)或任何天然CD47。在本领域中还已知作为整合素相关蛋白(IAP)的CD47具有胞外N末端IgV结构域、5个跨膜结构域和短C末端胞内尾。术语CD47涵盖了“全长”未处理的CD47，以及从细胞中的加工所产生的任何形式的CD47或其任何片段，包括4个已知在胞内尾长度方面不同的CD47的替代剪接同工型。术语CD47还涵盖了CD47的天然存在的变体，如SNP变体、剪接变体和等位变体。CD47在本领域中已知与SIRPα相互作用并且这种相互作用导致细胞信号转导，包括通过巨噬细胞的吞噬的抑制等。以下提供了人CD47的全长氨基酸序列(示例性胞外域＝加下划线的文
本)：
[0022]术语CD47还涵盖的其它相关CD47多肽包括保留CD47活性和/或足以产生抗
‑
CD47免疫应答的片段、衍生物(例如，替换、缺失、截短和插入变体)、融合多肽和种间同源物。如本领域技术人员将理解的，本文所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.与抗体竞争与人CD47的结合的抗体或其片段，所述抗体包含：(i)具有SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列的轻链可变区；(ii)具有SEQ ID NO：51所示的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：52所示的氨基酸序列的轻链可变区；或者(iii)具有SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：78所示的氨基酸序列的轻链可变区。2.结合至CD47的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含：(a)重链可变(V
H
)区，其包含：(1)具有选自下列的氨基酸序列的V
H CDR1：(i)SEQ ID NO：1、27或53，(ii)SEQ ID NO：7、33或59，(iii)SEQ ID NO：12、38或64，(iv)SEQ ID NO：13、39或65，和(v)SEQ ID NO：18、44或70；(2)具有选自下列的氨基酸序列的V
H CDR2：(i)SEQ ID NO：2、28或54，(ii)SEQ ID NO：8、34或60，(iii)SEQ ID NO：14、40或66，(iv)SEQ ID NO：19、45或71，和(v)SEQ ID NO：24、50或76；和(3)具有选自下列的氨基酸序列的V
H CDR3：(i)SEQ ID NO：3、29或55，(ii)SEQ ID NO：9、35或61，(iii)SEQ ID NO：15、41或67，和(iv)SEQ ID NO：20、46或72；且(b)轻链可变(V
L
)区，其包含：(1)具有选自下列的氨基酸序列的V
L CDR1：(i)SEQ ID NO：4、30或56，(ii)SEQ ID NO：10、36或62，(iii)SEQ ID NO：16、42或68，和(iv)SEQ ID NO：21、47或73；(2)具有选自下列的氨基酸序列的V
L CDR2：(i)SEQ ID NO：5、31或57，(ii)SEQ ID NO：11、37或63，和(iii)SEQ ID NO：22、48或74；和(3)具有选自下列的氨基酸序列的V
L CDR3：(i)SEQ ID NO：6、32或58，(ii)SEQ ID NO：17、43或69，和(iii)SEQ ID NO：23、49或75。
3.结合至CD47的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含：重链可变(V
H
)区，其包含：(1)具有选自下列的氨基酸序列的V
H CDR1：(i)SEQ ID NO：1、27或53，(ii)SEQ ID NO：7、33或59，(iii)SEQ ID NO：12、38或64，(iv)SEQ ID NO：13、39或65，和(v)SEQ ID NO：18、44或70；(2)具有选自下列的氨基酸序列的V
H CDR2：(i)SEQ ID NO：2、28或54，(ii)SEQ ID NO：8、34或60，(iii)SEQ ID NO：14、40或66，(iv)SEQ ID NO：19、45或71，和(v)SEQ ID NO：24、50或76；和(3)具有选自下列的氨基酸序列的V
H CDR3：(i)SEQ ID NO：3、29或55，(ii)SEQ ID NO：9、35或61，(iii)SEQ ID NO：15、41或67，和(iv)SEQ ID NO：20、46或72。4.结合至CD47的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含：轻链可变(V
L
)区，其包含：(1)具有选自下列的氨基酸序列的V
L CDR1：(i)SEQ ID NO：4、30或56，(ii)SEQ ID NO：10、36或62，(iii)SEQ ID NO：16、42或68，和(iv)SEQ ID NO：21、47或73；(2)具有选自下列的氨基酸序列的V
L CDR2：(i)SEQ ID NO：5、31或57，(ii)SEQ ID NO：11、37或63，和(iii)SEQ ID NO：22、48或74；和(3)具有选自下列的氨基酸序列的V
L CDR3：(i)SEQ ID NO：6、32或58，(ii)SEQ ID NO：17、43或69，和(iii)SEQ ID NO：23、49或75。5.结合至CD47的抗体或其片段，其包含全部3个重链互补决定区(CDR)或者全部3个轻链CDR，其来自：表示为C40的抗体，其包含作为SEQ ID NO：25的VH序列和作为SEQ ID NO：26的VL序列；表示为C56的抗体，其包含作为SEQ ID NO：51的VH序列和作为SEQ ID NO：52的VL序列；或表示为C59的抗体，其包含作为SEQ ID NO：77的VH序列和作为SEQ ID NO：78的VL序列。6.根据权利要求5所述的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含来自表示为C40的
抗体的全部3个重链CDR和全部3个轻链CDR。7.根据权利要求5所述的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含来自表示为C56的抗体的全部3个重链CDR和全部3个轻链CDR。8.根据权利要求5所述的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含来自表示为C59的抗体的全部3个重链CDR和全部3个轻链CDR。9.结合至CD47的抗体或其片段，其中所述抗体包含：(a)重链可变(V
H
)区，其包含表1
‑
3中所示的V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3氨基酸序列；或(b)轻链可变(VL)区，其包含表1
‑
3中所示的V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3氨基酸序列。10.根据权利要求9所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含：(a)重链可变(V
H
)区，其包含表1
‑
3中所示的V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3氨基酸序列；和(b)轻链可变(VL)区，其包含表1
‑
3中所示的V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3氨基酸序列。11.根据权利要求9所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含包含表1
‑
3中所示的V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3氨基酸序列的重链可变(V
H
)区。12.根据权利要求9所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含包含表1
‑
3中所示的V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3氨基酸序列的轻链可变(V
L
)区。13.根据权利要求9所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含：(a)重链可变(V
H
)区，其包含：(1)具有选自下列的氨基酸序列的V
H CDR1：SEQ ID NO：1、7、12、13和18；(2)具有选自下列的氨基酸序列的V
H CDR2：SEQ ID NO：2、8、14、19和24；和(3)具有选自下列的氨基酸序列的V
H CDR3：SEQ ID NO：3、9、15和20；且(b)轻链可变(V
L
)区，其包含：(1)具有选自下列的氨基酸序列的V
L CDR1：SEQ ID NO：4、10、16和21；(2)具有选自下列的氨基酸序列的V
L CDR2：SEQ ID NO：5、11和22；和(3)具有选自下列的氨基酸序列的V
L CDR3：SEQ ID NO：6、17和23。14.根据权利要求13所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含：(a)重链可变(V
H
)区，其包含：(1)具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的V
H CDR1；(2)具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的V
H CDR2；和(3)具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的V
H CDR3；且(b)轻链可变(V
L
)区，其包含：(1)具有SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的V
L CDR1；(2)具有SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的V
L CDR2；和(3)具有SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的V
L CDR3。15.根据权利要求13所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含：(a)重链可变(V
H
)区，其包含：
(1)具有SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的V
H CDR1；(2)具有SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列的V
H CDR2；和(3)具有SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列的V
H CDR3；且(b)轻链可变(V
L
)区，其包含：(1)具有SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列的V
L CDR1；(2)具有SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列的V
L CDR2；和(3)具有SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的V
L CDR3。16.根据权利要求13所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含：(a)重链可变(V
H
)区，其包含：(1)具有SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列的V
H CDR1；(2)具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的V
H CDR2；和(3)具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的V
H CDR3；且(b)轻链可变(V
L
)区，其包含：(1)具有SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的V
L CDR1；(2)具有SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的V
L CDR2；和(3)具有SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的V
L CDR3。17.根据权利要求13所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含：(a)重链可变(V
H
)区，其包含：(1)具有SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列的V
H CDR1；(2)具有SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列的V
H CDR2；和(3)具有SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列的V
H CDR3；且(b)轻链可变(V
L
)区，其包含：(1)具有SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列的V
L CDR1；(2)具有SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列的V
L CDR2；和(3)具有SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列的V
L CDR3。18.根据权利要求13所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含：(a)重链可变(V
H
)区，其包含：(1)具有SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列的V
H CDR1；(2)具有SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列的V
H CDR2；和(3)具有SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列的V
H CDR3；且(b)轻链可变(V
L
)区，其包含：(1)具有SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列的V
L CDR1；(2)具有SEQ ID NO：22所示的氨基酸序列的V
L CDR2；和(3)具有SEQ ID NO：23所示的氨基酸序列的V
L CDR3。19.根据权利要求13所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含：
(a)重链可变(V
H
)区，其包含：(1)具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的V
H CDR1；(2)具有SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列的V
H CDR2；和(3)具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的V
H CDR3；且(b)轻链可变(V
L
)区，其包含：(1)具有SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的V
L CDR1；(2)具有SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的V
L CDR2；和(3)具有SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的V
L CDR3。20.根据权利要求9所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含：(a)重链可变(V
H
)区，其包含：(1)具有选自下列的氨基酸序列的V
H CDR1：SEQ ID NO：27、33、38、39和44；(2)具有选自下列的氨基酸序列的V
H CDR2：SEQ ID NO：28、34、40、45和50；和(3)具有选自下列的氨基酸序列的V
H CDR3：SEQ ID NO：29、35、41和46；且(b)轻链可变(V
L
)区，其包含：(1)具有选自下列的氨基酸序列的V
L CDR1：SEQ ID NO：30、36、42和47；(2)具有选自下列的氨基酸序列的V
L CDR2：SEQ ID NO：31、37和48，和(3)具有选自下列的氨基酸序列的V
L CDR3：SEQ ID NO：32、43和49。21.根据权利要求20所述的抗体或其片段，其中所述抗体包含：(a)重链可变(V
H
)区，其包含：(1)具有SEQ ID NO：27所示的氨基酸序列的V
H CDR1；(2)具有SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列的V
H CDR2；和(3)具有SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列的V
H CDR3；且(b)轻链可变(V
L
)区，其包含：(1)具有SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列的V
L CDR1；(2)具有SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列的V
L CDR2；和(3)具有SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：布莱恩，
申请(专利权)人：埃克塞里艾克西斯公司，
类型：发明
国别省市：