检测产品、引物或其组合、检测产品及应用制造技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及检测产品、引物或其组合、检测产品及应用。本发明专利技术提供了标志物，所述标志物具有：如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。本发明专利技术公开了血浆miR

【技术实现步骤摘要】
检测产品、引物或其组合、检测产品及应用


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及检测产品、引物或其组合、检测产品及应用。

技术介绍

[0002]癫痫是最常见的严重脑部疾病之一，影响全球7000多万人。严重影响患者正常生活、工作和学习。癫痫的产生是由于神经元兴奋性作用增强，抑制性作用减弱或两者兼有之。癫痫的临床诊断主要根据发作史，目击者对发作过程提供可靠的详细描述，辅以脑电图痫性放电证据才可确诊，目前尚无敏感性和特异性强的血液学诊断指标。进一步癫痫具有反复发作的特点，而且发作程度个体间也有差异，但是目前尚无客观的指标评价癫痫患者发作程度。因此，寻找新的血液指标对癫痫发作预警、癫痫发作程度及用药后癫痫控制情况进行评估至关重要。
[0003]MicroRNAs(miRNAs)是一类长度为20～25个核苷酸序列的非编码RNA，它们通过结合靶基因mRNAs的非翻译区(Untranslted Region，UTR)从而调节mRNA的转录或者减少mRNA水平。研究表明，miRNAs表达的失调参与众多疾病的发生如癌症、脆性X染色体综合征、自闭症、精神分裂症、阿尔茨海默病、心血管疾病等。血液中含有丰富的miRNAs，研究显示血液中miRNAs可作为肿瘤、脓毒症、心血管疾病、子宫内膜异位症和阿尔兹海默症等多种疾病诊断和预后指标。
[0004]但是目前尚未见癫痫患者血清学有效和敏感性诊断指标。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了检测产品、引物或其组合、检测产品及应用。本专利技术公开了血浆miR
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5p作为癫痫诊断标志物及其用途。通过临床实验证实：与健康对照组人群相比，癫痫患者血浆中miR
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5p的水平显著升高。因此血浆miR
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5p的水平可用于癫痫诊断标记物。并研制出以检测血浆miR
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5p水平的检测试剂和试剂盒，该试剂或试剂盒可用于临床癫痫患者的辅助诊断及预后评估。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了标志物，所述标志物具有：
[0008](1)、如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；或
[0009](2)、与(1)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(1)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或
[0010](3)、与(1)或(2)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列。
[0011]在本专利技术的一些实施方案中，上述SEQ ID NO:1为：uauugcacauuacuaaguugca。
[0012]在本专利技术的一些实施方案中，上述标志物中，所述标志物为miR
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5p。
[0013]在本专利技术的一些实施方案中，上述标志物中，所述标志物的来源为血浆。
[0014]本专利技术还提供了标志物在制备诊断和/或预后评估癫痫的产品中的应用。
[0015]本专利技术还提供了引物或其组合，以上述标志物为扩增的目的片段。
[0016]在本专利技术的一些实施方案中，上述引物或其组合中所述标志物的引物具有：
[0017](4)、如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；或
[0018](5)、与(4)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(4)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或
[0019](6)、与(4)或(5)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列。
[0020]在本专利技术的一些实施方案中，上述SEQ ID NO:2为：ggcggcggtattgcacattactaa。
[0021]在本专利技术的一些实施方案中，上述SEQ ID NO:3为：gcgcaatgcatcgcatagcaactgt。
[0022]在本专利技术的一些实施方案中，上述引物或其组合，还包括以内参基因U6为目的片段的引物；
[0023]所述内参基因U6的引物具有：
[0024](7)、如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列；或
[0025](8)、与(7)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(7)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或
[0026](9)、与(7)或(8)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列。
[0027]在本专利技术的一些实施方案中，上述SEQ ID NO:4为：ctcgcttcggcagcaca。
[0028]在本专利技术的一些实施方案中，上述SEQ ID NO:5为：aacgcttcacgaatttgcgt。
[0029]本专利技术还提供了检测产品，包括上述引物或其组合以及可接受的助剂。
[0030]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测产品中，所述助剂包括：反转录试剂或PCR扩增试剂。
[0031]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测产品中，所述助剂包括：逆转录缓冲液、逆转录酶、TB green，ROX染料、RNase
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Free、标准品或对照品中的一种或多种。
[0032]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测产品包括：芯片、检测试剂或试剂盒中的一种或多种。
[0033]本专利技术还提供了扩增方法，以上述引物或其组合或上述检测产品中的引物或其组合为目的片段扩增。
[0034]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测方法中，所述检测包括以下步骤：提取所述待测样本的miRNA，逆转录后获得cDNA，扩增所述标志物和所述内参基因U6，通过熔解曲线和扩增曲线，获得所述标志物的相对定量值。
[0035]本专利技术还提供了癫痫的检测方法，以上述引物或其组合或上述检测产品对待测样品的DNA进行扩增，若出现荧光信号，为阳性；反之，为阴性。
[0036]本专利技术提供的癫痫辅助诊断试剂盒的制作基于miRNA的QCR检测技术，该试剂盒用于检测血浆中miR
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5p水平，试剂盒包含检测miR
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5p的检测试剂；检测试剂包括检测试剂包括QPCR实验中使用的miR
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5p和内参基因U6的扩增引物，miR
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5p的PCR扩增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，反向引物为miRNA PCR扩增通用引物，序列如SEQ ID NO:3所示；所述U6的PCR扩增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述U6的PCR扩增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。更进一步地，所述试剂盒还包含本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.标志物，其特征在于，所述标志物具有：(1)、如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；或(2)、与(1)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(1)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或(3)、与(1)或(2)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的标志物在制备诊断和/或预后评估癫痫的产品中的应用。3.引物或其组合，其特征在于，以如权利要求1所述标志物为扩增的目的片段。4.如权利要求3所述的引物或其组合，其特征在于，所述标志物的引物具有：(4)、如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；或(5)、与(4)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(4)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或(6)、与(4)或(5)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列。5.如权利要求3或4所述的引物或其组合，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘江华，祖旭宇，钟小林，武衡，陈玲，
申请(专利权)人：南华大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：