一种植物复合多糖及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种植物复合多糖及其制备方法和应用，本发明专利技术按植物复合多糖分子量大小分级制备出高纯度的三个多糖级分，并且很好地保留了其原有增强机体免疫活性，其中植物复合多糖级分1和多糖级分2相较于粗多糖组分具有更好的增强机体免疫活性，可作为功能性保健食品的天然原料。相对于传统的耦合膜分离制备以及醇分离制备，分级醇沉耦合膜过滤分离法具有工艺简单、省时、低成本的特点，同时解决其制备纯度不足的难点。纯度不足的难点。

【技术实现步骤摘要】
一种植物复合多糖及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及物质提取
，特别涉及一种植物复合多糖及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]研究报道不同分子量的植物多糖具有不同的生物活性。目前，对于植物粗多糖或是低分子量酶解多糖的抗肿瘤活性研究较为普遍，但缺少对不同分子量段植物多糖的抗肿瘤活性比较研究。现有的多糖提取技术包括热水浸提法、微波辅助法、超声波辅助法、复合酶解法等，常用的粗多糖的分级纯化方法有醇沉法、色谱柱层析法和膜过滤法。多糖的结构和分子量不同，其极性大小不同，在有机溶剂中的溶解度不同，根据这一原理，可以依此增加醇浓度，从而将多糖按分子量从大到小的沉淀出来。但是目前醇沉法很难得到分子量均一多糖。近年来，有多种植物多糖被证明具有抗肿瘤活性，且复合植物多糖被证明可以使每一种单一多糖的作用得到很好发挥的同时还能协同发挥出各自所不具备的其它作用。相关技术公开利用分级醇沉方法将冬虫夏草菌丝体多糖分为几个组分，筛选出具有促进抗肿瘤免疫细胞增殖的组分，增强了机体抗肿瘤免疫力效果，但并没有对几个组分多糖进行分子量检测和纯度分析。柱层析法是纯化多糖的常用方法，但使用柱层析法往往受到柱子使用范围、经济成本和时间成本的限制，对于工业放大应用仍存在较大困难。膜过滤法是以压力为推动力的膜分离技术，应用膜分离原理将大小分子溶质分开，从而达到纯化的目的。也有方法利用超声波提取枸杞渣获多糖液，先用6.7万分子量膜超滤，然后再用10万分子量膜超滤，分别收集分子量小于6.7万、6.7
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10万和分子量大于10万的超滤液，得到三种不同分子量的枸杞多糖溶液，经过浓缩后冷冻干燥，得到不同用途的枸杞多糖粉，但单纯应用多个超滤膜分离纯化多糖分离纯化步骤繁琐且较为耗时。

技术实现思路

[0003]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的上述技术问题之一。为此，本专利技术的目的在于提供一种植物复合多糖及其制备方法和应用。
[0004]为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
[0005]根据本专利技术的第一个方面，提出了一种植物复合多糖的制备方法，包括以下步骤：
[0006]S1：将植物复合多糖加水配制成固液比为1：(5～15)的多糖溶液A，再加入乙醇，搅拌后静置，离心，上清液回收乙醇后即得分子量小于3000Da的多糖级分3；
[0007]S2：向S1中离心获得的多糖沉淀加水配制成固液比为1：(2～8)的多糖溶液B，再加入乙醇，调节pH为6～11，搅拌后静置，离心，取沉淀即得分子量大于47000Da的多糖级分1；
[0008]S3：将S2离心获得的多糖上清液回收乙醇，加水配制成固液比为1：(1～4)的多糖溶液C，再用3000Da分子量的超滤膜超滤，取截留液即为3000Da～47000Da的多糖级分2。
[0009]在本专利技术的一些实施方式中，所述的植物复合多糖的制备方法还包括：在S1前，根据所述植物复合多糖的分子量分布确定分级纯化范围；优选地，在S1前，采用高效凝胶渗透
色谱法测定所述植物复合多糖的分子量，根据所述植物复合多糖的分子量分布确定分级纯化范围。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，S1中，所述多糖溶液A与所述乙醇的质量比为1：(3～8)。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，S1中，所述乙醇的浓度为60％～90％；优选为70％～90％。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，S1中，所述搅拌的时间为20min～40min。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，S1中，所述静置的时间为4h～8h。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，S1中，所述离心的转速为3000rpm～5000rpm；时间为8min～15min；优选为所述离心的转速为4000rpm；时间为10min。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，S2中，所述多糖溶液B与所述乙醇的质量比为1：(1～3)。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，S2中，所述乙醇的浓度为70％～90％。
[0017]在本专利技术的一些实施方式中，S2中，所述调节pH为7～9。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，S2中，所述搅拌的时间为20min～40min。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，S2中，所述静置的时间为4h～8h。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，S2中，所述离心的转速为3000rpm～5000rpm；时间为8min～15min；优选为所述离心的转速为4000rpm；时间为10min。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，所述的植物复合多糖的制备方法还包括：将所述多糖级分1、多糖级分2、多糖级分3干燥分别制成对应的干粉。
[0022]在本专利技术的一些实施方式中，所述的植物复合多糖包括灵芝、菟丝子、茯苓、五味子、党参、白术的至少两种。
[0023]根据本专利技术的第二个方面，提出了一种植物复合多糖，包括如所述的植物复合多糖的制备方法制得的所述的多糖级分1、多糖级分2、多糖级分3的至少一种。
[0024]在本专利技术的一些实施方式中，植物复合多糖，包括如所述的植物复合多糖的制备方法中S2制得的所述的多糖级分1、S3制得的多糖级分2、S1制得的多糖级分3的至少一种。
[0025]根据本专利技术的第三个方面，提出了一种所述的植物复合多糖在制备抗肿瘤和/或提高机体免疫力的保健品、药物中的应用。
[0026]在本专利技术的一些实施方式中，所述的肿瘤为实体肿瘤或非实体肿瘤。
[0027]在本专利技术的一些实施方式中，所述实体肿瘤包括肝癌。
[0028]在本专利技术的一些实施方式中，所述植物复合多糖的治疗有效量为50mg/kg～200mg/kg。
[0029]本专利技术的有益效果是：
[0030](1)相对于传统的耦合膜分离制备以及醇分离制备，分级醇沉耦合膜过滤分离法具有工艺简单、省时、低成本的特点，同时解决其制备纯度不足的难点。
[0031](2)本专利技术按植物复合多糖分子量大小分级制备出高纯度的三个多糖级分，并且很好地保留了其原有增强机体免疫活性，其中植物复合多糖级分1和多糖级分2相较于粗多糖组分具有更好的增强机体免疫活性，可作为功能性保健食品的天然原料。
[0032](3)本专利技术获得的三个纯度高且分子量确定的多糖级分，明确了多糖的分子量大
小与其免疫增强活性存在正相关。
附图说明
[0033]图1为本专利技术实施例1不同固液比多糖溶液对不同多糖级分分离效果的影响。
[0034]图2为本专利技术实施例1不同乙醇浓度醇沉对不同多糖级分提取效果的影响。
[0035]图3为本专利技术实施例1不同pH对不同多糖级分提取效果的影响。
[0036]图4为本专利技术实施例2中标准多糖分子量
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洗脱体积标准曲线。
[0037]图5为本专利技术实施例2中植物复合多糖的GPC色谱图。
[0038]图6为本专利技术实施例2中多糖级分1的GPC色谱本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植物复合多糖的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：S1：将植物复合多糖加水配制成固液比为1：(5～15)的多糖溶液A，再加入乙醇，搅拌后静置，离心，上清液回收乙醇后即得分子量小于3000Da的多糖级分3；S2：向S1中离心获得的多糖沉淀加水配制成固液比为1：(2～8)的多糖溶液B，再加入乙醇，调节pH为7～9，搅拌后静置，离心，取沉淀即得分子量大于47000Da的多糖级分1；S3：将S2离心获得的多糖上清液回收乙醇，加水配制成固液比为1：(1～4)的多糖溶液C，再用3000Da分子量的超滤膜超滤，取截留液即为3000Da～47000Da的多糖级分2。2.根据权利要求1所述的植物复合多糖的制备方法，其特征在于：在S1前，根据所述植物复合多糖的分子量分布确定分级纯化范围。3.根据权利要求1所述的植物复合多糖的制备方法，其特征在于：S1中，所述多糖溶液A与所述乙醇的质量比为1：(3～8)。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：龙洁怡，林晓亮，梁明，余意，余庆涛，张婷，
申请(专利权)人：无限极中国有限公司，
类型：发明
国别省市：