艾叶来源外泌体样纳米囊泡及其应用和药物制造技术

本发明专利技术提供了一种艾叶来源外泌体样纳米囊泡及其应用和药物，涉及医药技术领域。本发明专利技术提供的一种艾叶来源外泌体样纳米囊泡，主要由以下方法制备得到：将艾叶破碎，然后经固液分离后取清液，再将清液进行分离纯化处理，获得艾叶来源外泌体样纳米囊泡。经发明专利技术人研究发现，本发明专利技术提供的艾叶来源的外泌体样纳米囊泡以较低浓度量显示出优异的促细胞增殖和抗氧化特性，可以有效促进细胞迁移，具有强大的抗氧化活性，能够有效清除DPPH、细胞活性氧，加快伤口愈合，对于糖尿病患者的皮肤创面修复具有良好的治疗效果。良好的治疗效果。

【技术实现步骤摘要】
艾叶来源外泌体样纳米囊泡及其应用和药物


[0001]本专利技术涉及医药
，尤其是涉及一种艾叶来源外泌体样纳米囊泡及其应用和药物。

技术介绍

[0002]随着人口老龄化的加剧和人们不合理的饮食方式，糖尿病的发病率逐年上升。糖尿病已经成为继肿瘤、心血管病变之后第三大严重威胁人类健康的慢性疾病。不同地区人们对糖尿病的认识、治疗和控制存在很大差异。最近，发表于BMJ杂志的中国人群糖尿病患病率的最新全国流行病学调查结果显示，我国糖尿病总体患病率为12.8％，糖尿病前期患病率为35.2％，地域之间存在明显的差异。糖尿病是由于胰岛素相对或绝对缺乏而引起的以慢性高血糖为主要特征的一组内分泌代谢性疾病，近年来糖尿病引发皮肤疾病的几率非常高，在临床中占30％左右。高血糖的毒性逐渐造成各种代谢紊乱，同时引起末梢神经和微血管病变、微循环障碍及皮肤感染等，继而出现溃疡，使得创面难以愈合。
[0003]最近的临床前研究表明，细胞外囊泡(EVs)有能力通过加速再上皮化和新生血管来帮助慢性伤口的再生。目前，天然来源纳米囊泡在各种疾病治疗中的作用研究逐渐成为临床研究者的关注热点。植物来源外泌体样纳米囊泡携代了蛋白质、脂质、RNA和大量活性物质，其中活性成分占植物细胞的90％以上，除了潜在的调节植物自身的免疫外，还能将这些物质传递至动物细胞介导动植物间的交流。公开号为CN115414469A的中国专利申请公开了一种含黄精、土茯苓外泌体治疗关节炎的组合物，该产品对各类型关节炎见效快，疗效好，使用方便，且不易复发。公开号为CN111436609A中国专利申请公开了一种含有红葡萄外泌体、红石榴外泌体、胡萝卜外泌和白藜芦醇的产品，该产品安全有效、抗氧化效果好。公开号为CN115161256A的中国专利申请公开了一种虎杖悬浮细胞、其外泌体及其制备方法和应用，该虎杖外泌体具有较好的细胞修复能力，可促进细胞划痕修复和细胞增殖，适用于具有细胞修复能力的药品、医美产品或护肤品中。公开号为KR20200053486A的韩国专利申请公开了一种用于预防皮肤老化或保护皮肤的化妆品组合物，其有效成分包括人参来源外泌体，该组合物可降低由紫外线照射引起的COX
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2和iNOS的表达，证实了其对炎症反应的缓解效果。公开号为KR20200053489A的韩国专利申请公开了一种用于皮肤保护和改善皮肤状况的化妆品组合物，包括大豆来源外泌体，该组合物对皮肤应用安全，能有效防止皮肤老化，改善皮肤状况，可通过加强皮肤屏障来保护皮肤，并具有良好的伤口愈合效果。
[0004]动物来源的外泌体的分离存在成本高、耗时、产量低等问题，很大程度上限制了其在慢性伤口愈合领域的应用。目前研究发现植物来源的纳米囊泡在抗氧化、抗炎、抗病毒感染、抗肿瘤作用、抗真菌作用、缓解酒精性肝病、缓解结肠炎、预防皮肤老化等方面具有显著的功效，但在糖尿病慢性创面愈合过程的潜在机制尚不明确，还有待研究。
[0005]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一目的在于提供一种艾叶来源外泌体样纳米囊泡(简称FAELNs)，以解决上述问题中的至少一种。
[0007]本专利技术的第二目的在于提供艾叶来源外泌体样纳米囊泡在制备糖尿病皮肤创面修复产品中的应用。
[0008]本专利技术的第三目的在于提供一种糖尿病皮肤创面修复药物。
[0009]第一方面，本专利技术提供了一种艾叶来源外泌体样纳米囊泡，主要由以下方法制备得到：
[0010]将艾叶破碎，然后经固液分离后取液汁，再将液汁进行分离纯化处理，获得艾叶来源外泌体样纳米囊泡。
[0011]作为进一步技术方案，所述艾叶来源外泌体样纳米囊泡的粒径为43.8～141.8nm。
[0012]作为进一步技术方案，所述破碎的步骤包括：将艾叶与缓冲液混合后再进行破碎；
[0013]所述破碎的方式包括榨汁机破碎。
[0014]作为进一步技术方案，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液；
[0015]所述缓冲液的pH为7
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8。
[0016]作为进一步技术方案，所述固液分离的方式包括离心或者过滤。
[0017]作为进一步技术方案，所述分离纯化处理包括差速离心法和/或蔗糖密度梯度离心。
[0018]作为进一步技术方案，所述差速离心法的步骤包括：
[0019]将所述液汁在600
×
g～1000
×
g下进行第一次离心，弃去沉淀，取上清液，然后将上清液在3500
×
g～4500
×
g下进行第二次离心，弃去沉淀，取上清液，再将上清液在8000
×
g～10 000
×
g下进行第三次离心，取上清液，之后将上清液在100 000
×
g～120 000
×
g下进行第四次离心，收集沉淀，再将沉淀重悬，经过滤除菌后，获得艾叶来源外泌体样纳米囊泡。
[0020]作为进一步技术方案，所述第四次离心后还包括将艾叶来源外泌体样纳米囊泡进行蔗糖密度梯度离心的步骤；
[0021]所述差速离心法和蔗糖密度梯度离心的温度为4℃。
[0022]作为进一步技术方案，采用缓冲液进行重悬；
[0023]所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液。
[0024]第二方面，本专利技术提供了上述艾叶来源外泌体样纳米囊泡在皮肤创面修复产品中的应用。
[0025]作为进一步技术方案，所述皮肤创面修复产品包括糖尿病皮肤创面修复产品。
[0026]第三方面，本专利技术提供了一种皮肤创面修复药物，包括上述的艾叶来源外泌体样纳米囊泡。
[0027]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0028]经专利技术人研究发现，本专利技术提供的艾叶来源的外泌体样纳米囊泡以较低浓度量显示出优异的促细胞增殖和抗氧化特性，可以有效促进细胞迁移，具有强大的抗氧化活性，能够有效清除DPPH、细胞活性氧，加快伤口愈合，对于糖尿病患者的皮肤创面修复具有良好的治疗效果。
附图说明
[0029]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0030]图1为本专利技术试验例1提供的试验结果(图1中的A、B和C分别为FAELNs的电镜、粒径分布和电位图)；
[0031]图2为本专利技术试验例2提供的试验结果(图2中的A和B为FAELNs促进血管内皮细胞、成纤维细胞增殖结果)；
[0032]图3为本专利技术试验例3提供的试验结果(图3中的A为FAELNs的DPPH清除实验结果；图3中的B和C为FAELNs清除ROS及其定量结果)；
[0033]图4为本专利技术试验例4提供的试验结果(图4中的A和B为体内糖尿病小鼠皮肤创面愈合实验及本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种艾叶来源外泌体样纳米囊泡，其特征在于，主要由以下制备方法制备得到：将艾叶破碎，然后经固液分离后取液汁，再将液汁进行分离纯化处理，获得艾叶来源外泌体样纳米囊泡。2.根据权利要求1所述的艾叶来源外泌体样纳米囊泡，其特征在于，所述艾叶来源外泌体样纳米囊泡的粒径为43.8～141.8nm。3.根据权利要求1所述的艾叶来源外泌体样纳米囊泡，其特征在于，所述破碎的步骤包括：将艾叶与缓冲液混合后再进行破碎；所述破碎的方式包括榨汁机破碎。4.根据权利要求1所述的艾叶来源外泌体样纳米囊泡，其特征在于，所述固液分离的方式包括离心或者过滤。5.根据权利要求1所述的艾叶来源外泌体样纳米囊泡，其特征在于，所述分离纯化处理包括差速离心法和/或蔗糖密度梯度离心。6.根据权利要求5所述的艾叶来源外泌体样纳米囊泡，其特征在于，所述差速离心法的步骤包括：将所述液汁在600
×
g～1000
×
g下进行第一次离心，弃去沉淀，取上清液，然后将上清液在3500
×
g...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书六页附图三页，
申请(专利权)人：浙江省人民医院，
类型：发明
国别省市：